不同浓度姜黄素对胃癌SGC-7901细胞增殖、自噬性凋亡和TGF-β/Smad信号通路的影响

摘要 目的：研究不同浓度姜黄素（Cur）体外对胃癌SGC-7901细胞增殖、自噬性凋亡和TGF-β/Smad信号通路的影响。方法：体外培养SGC-7901细胞,以不同浓度Cur作用于SGC-7901细胞。MTT法检测不同浓度的Cur对SGC-7901细胞增殖的影响。Hoechst 33258法观察不同浓度Cur对SGC-7901细胞凋亡影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率。划痕实验检测不同浓度Cur对SGC-7901迁移能力的影响。免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白NF-κB、自噬相关蛋白Beclin1、LC3Ⅱ及TGF-β/Smad信号通路蛋白TGF-β和p-smad2/3表达。结果：Cur能够抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移,并且Cur对增殖和迁移的影响具有浓度依赖性。Cur能够促进胃癌SGC-7901细胞自噬性凋亡的发生,Cur浓度越高,SGC-7901细胞凋亡率越高（P<0.05）。Cur处理胃癌SGC-7901细胞后NF-κB、Beclin1、LC3Ⅱ表达明显升高,而TGF-β、p-smad2/3表达明显降低,且NF-κB、Beclin1、LC3Ⅱ、TGF-β和p-smad2/3的变化具有浓度依赖性。结论：Cur能够抑制胃癌SGC-7901细胞增殖和迁移并诱导自噬性凋亡的发生,其机制与促进NF-κB、Beclin1、LC3Ⅱ表达,抑制TGF-β/Smad信号通路激活有关。     

环状RNA circTCF25通过miR-103a-3p/miR-107调控CDK6的表达促进膀胱癌的增殖和迁移

该文旨在探讨环状RNA circTCF25对膀胱癌增殖和迁移的影响。采用RT-q PCR检测膀胱癌及癌旁组织中miR-103a-3p和miR-107的表达水平;采用Western blot和免疫组化检测膀胱癌细胞及膀胱癌和癌旁组织中CDK6的蛋白表达;将circTCF25过表达载体转染两种膀胱癌细胞后,采用RT-q PCR检测细胞中circTCF25以及miR-103a-3p和miR-107的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证circTCF25靶向结合miR-107及miR-107的靶基因CDK6;划痕实验检测细胞迁移能力;Edu实验检测细胞增殖能力。RT-q PCR结果表明,膀胱癌组织中miR-103a-3p和miR-107的表达明显低于癌旁组织。免疫组化和Western blot结果显示,膀胱癌组织中CDK6蛋白质水平明显高于癌旁组织。转染circTCF25过表达载体的细胞中,circTCF25的表达水平高于对照组。过表达circTCF25后,细胞中miR-103a-3p和miR-107的表达显著下降,CDK6的蛋白水平增加。双荧光素酶报告基因实验表明,circTCF25可以直接结合miR-107并降低其对靶基因CDK6的抑制。过表达circTCF25后,细胞迁移和增殖能力增强。该研究说明,环状RNA circTCF25可通过miR-103a-3p/miR-107调控CDK6的表达促进膀胱癌的增殖和迁移。     

miR-608靶向PCDHGA9调控胃癌细胞凋亡的机制

[目的]探讨miR-608调控胃癌细胞SGC-7901凋亡的潜在机制。[方法]将胃癌中表达失调的miRNA以mimics的形式在胃癌细胞SGC-7901中过表达,检测细胞的凋亡水平。将能够调节凋亡的miRNA在多种胃癌细胞中敲低或过表达,检测这些胃癌细胞的凋亡水平。miRDB和荧光素酶报告实验验证miRNA的潜在底物。胃癌细胞SGC-7901中过表达或敲低底物后,检测凋亡水平。[结果] miR-608能够抑制胃癌细胞SGC-7901的凋亡水平(26.31±6.54 vs 7.04±2.19,P<0.05)。在胃癌细胞株MKN-1、 MNK-28、MNK-45、HGC-27、SNU-1、SNU-5、 Hs-746T、SGC-7901、SNU-719、KATO 3中过表达miR-608后,这些胃癌细胞株的凋亡水平均显著下降(P<0.05)。胃癌细胞SGC-7901中过表达miR-608后,PCDHGA9的表达水平显著下降(1.42±0.31 vs 0.42±0.10,P<0.05)。此外,miR-608靶向PCDHGA9的3′端非编码区(100±7 vs 23±5,P&l...     

lncRNA CBR3-AS1通过调控miR-145-5p影响胃癌HGC-27细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡

为探讨lncRNA CBR3-AS1靶向miR-145-5p对胃癌细胞HGC-27恶性生物学行为的影响,该研究先用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测30例胃癌患者的癌组织及癌旁组织中CBR3-AS1和miR-145-5p的表达水平。然后,将CBR3-AS1干扰表达载体质粒、miR-145-5p模拟物、miR-145-5p抑制剂与CBR3-AS1干扰表达载体质粒转染至胃癌细胞HGC-27;用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡流程;Transwell法检测迁移和侵袭的细胞数;双荧光素酶报告实验检测CBR3-AS1和miR-145-5p的靶向关系。实验结果显示,胃癌组织中CBR3-AS1表达水平高于癌旁组织,而miR-145-5p表达水平低于癌旁组织(P0.05)。过表达miR-145-5p或抑制lncRNA CBR3-AS1表达可降低HGC-27细胞活性,减少迁移侵袭细胞数,而提高细胞凋亡率(P0.05)。lncRNA CBR3-AS1靶向调控miR-145-5p;下调miR-145-5p逆转了抑制lncRNA CBR3-AS1表达对HGC-27细胞的作用。因此,抑制lncRNA CBR3-AS1表达可能通过上调miR-145-5p抑制HGC-27细胞的迁移侵袭、增殖,促进细胞凋亡。     

肝细胞癌患者血清外泌体microRNA表达鉴定

目的:探讨肝癌细胞外泌体中差异表达的microRNAs(miRNAs)在肝细胞癌(HCC)诊断中的应用价值。方法:通过高通量测序筛选肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNAs。实时定量PCR验证差异表达分子;检测差异表达的miRNAs在健康人(Health)、慢性乙型肝炎患者(CHB)、肝硬化患者(LC)及乙型肝炎病毒阳性的肝细胞癌患者(HCC)血清外泌体中的表达。结果:高通量测序筛选到肝癌细胞外泌体中差异表达的miRNA共88种,其中58种表达上调,30种表达下调。选择其中8种差异表达的miRNAs进行q RT-PCR验证,结果显示,此8种miRNAs在细胞上清外泌体、细胞内、癌与癌旁组织中的表达趋势与测序结果一致。miR-221-3p和miR-224-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著高于Health组、CHB组和LC组(P0.01),miR-124-3p和let-7a-5p在HCC组外泌体中的表达水平显著低于其他各组(P0.05)。四个组中,miR-21-5p、miR-191-5p、miR-34a-5p和miR-122-5p的表达水平不存在显著性差异(P0.05)。结论:血清外泌体中的miR-221-3p、miR-224-5p、miR-124-3p和let-7a-5p可能成为肝细胞癌的候选标志物。     

miR-550a-3靶向NFIC表达调控肺癌细胞HCC827增殖、迁移和侵袭

[目的]探讨miR-550a-3靶向NFIC表达调控肺癌细胞HCC827增殖、迁移和侵袭作用。[方法]检测40例肺癌患者癌组织和癌旁组织中miR-550a-3和NFIC mRNA表达,并分析NFIC表达与肺癌患者病理特征的相关性。按Lipofectamine 2000方法分别将miR-NC、miR-550a-3 mimics和miR-550a-3inhibitor转染到HCC827细胞,48h后检测细胞增殖、迁移和侵袭情况,同时检测细胞中miR-550a-3和NFIC mRNA表达,并检测细胞中NFIC、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。[结果]肺癌组织中miR-550a-3表达水平(1.83±0.19)高于癌旁组织(1.00±0.15),NFIC mRNA表达水平(0.62±0.14)低于癌旁组织(1.00±0.10)(P<0.05);以miR-550a-3 mRNA均数为标准,将肺癌患者分为高表达组(22例)和低表达组(18例),miR-550a-3与病理类型和TNM分期相关(P<0.05),与年龄、性别、是否吸烟和肿瘤直径不相关(P>0.05)...     

上调miR-216a-5p通过靶向双特异性磷酸酶10抑制胃癌细胞自噬并增强放射敏感性

摘要 目的：探究miR-216a-5p对胃癌细胞自噬和放射敏感性的调控机制及其对双特异性磷酸酶10（DUSP10）的调控作用。方法：采用直线加速器6-MV X射线照射SGC-7901细胞,剂量率为0.8Gy/min,总剂量为8Gy。用Lipofectamine 2000试剂将miR-216a-5p mimic、NC mimic、pcDNA DUSP10或pcDNA NC转染到SGC-7901细胞中。转染后,将细胞分为miR-216a-5p mimic组和NC mimic组,每组又分为0Gy和8Gy两个亚组。在拯救实验中,将细胞分为miR-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组和miR-216a-5p mimic+pcDNA NC组。通过qRT-PCR检测miR-216a-5p和DUSP10 mRNA水平。通过5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EdU）掺入实验和集落形成测定检测细胞增殖。通过流式细胞仪评估细胞凋亡。通过Western blot检测DUSP10、Bax、Bad、Bcl-2、LC3和p62的蛋白表达。通过免疫荧光法检测γH2AX的表达,用于评估细胞中的DNA双链断裂（DSB）。通过荧光素酶报告基因检测miR-216a-5p和DUSP10的靶向关系。通过GFP-mRFP-LC3检测自噬体。结果：与8Gy NC-mimic组相比,8Gy miR-216a-5p-mimic组的集落数量、EdU阳性率和Bcl-2蛋白表达水平降低,而γH2AX阳性率、细胞凋亡率和Bax和Bad蛋白表达水平升高（P<0.01）。与8Gy NC-mimic组相比,8Gy miR-216a-5p-mimic组的自噬体数量和LC3II蛋白表达水平降低,而p62蛋白表达水平升高（P<0.001）。与miR-216a-5p-mimic共培养后,与DUSP10-3''-UTR-MUT组相比,DUSP10-3''-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著降低（P<0.001）。与NC-mimic组相比,miR-216a-5p-mimic组的DUSP10 mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.001）。与miR-216a-5p mimic+pcDNA NC组相比,miR-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组的集落数量和自噬体数量升高,而细胞凋亡率降低（P<0.001）。结论：miR-216a-5p通过抑制DUSP10来抑制细胞增殖、增加放射诱导的细胞凋亡并抑制放射诱导的自噬,从而增强胃癌细胞的放射敏感性。     

miR-596在胃癌组织中的表达和临床意义

为了研究micro RNA-596(miR-596)在人胃癌组织中的表达情况和临床意义。本研究选用80例癌症患者,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测技术,比较miR-596在胃癌组织以及相对应的癌旁组织中的miR-596含量差异,并分析其表达水平与胃癌患者临床病例特征的相关性。此外还通过CCK-8实验和Transwell穿孔实验比较正常胃癌细胞系AGS和转染过表达miR-596的AGS细胞的增殖水平和侵袭能力。发现通过CCK-8实验检测细胞的增殖水平,使用Transwell穿孔实验检测细胞的侵袭能力。相比于癌旁组织,miR-596在胃癌组织中的表达量显著降低(p0.05)。miR-596的表达量与患者的淋巴结是否转移(p0.05)、癌组织大小和TNM分期这几个因素具有显著相关,而与患者的年龄、性别、分化程度这几个因素无显著相关性。与阴性对照组细胞相比,AGS转染了miR-596 mimics后,细胞增殖能力显著下降(p0.01),同时细胞的侵袭能力显著降低(p0.01)。说明miR-596在胃癌组织中具有非常重要的作用,且与患者的不良临床病理特征相关。过表达miR-596可以抑制胃癌细胞的增殖和侵袭能力,从而达到抑制胃癌发展的效果,该发现对于胃癌的早期诊断和预后估计以及制定更加有效的手术方案均具有较大的临床意义,此外还可为进一步研究miR-596靶向药物的研究与开发奠定理论基础。     

lncRNA CEBPA-AS1靶向miR-455-3p调控胃癌细胞生物学行为的分子机制研究

摘要 目的：探讨lncRNA CEBPA-AS1对胃癌细胞生物学行为的影响及其可能作用机制。方法：qRT-PCR法检测胃癌组织、癌旁组织与正常人胃上皮GES1细胞和人胃癌SNU-1、AGS、HS-746T细胞系中lncRNA CEBPA-AS1、miR-455-3p的表达量。si-NC、si-lncRNA CEBPA-AS1、miR-NC、miR-455-3p mimics、si-lncRNA CEBPA-AS1与anti-miR-NC、si-lncRNA CEBPA-AS1与anti-miR-455-3p分别转染至SNU-1细胞（分别命名为si-NC组、si-lncRNA CEBPA-AS1组、miR-NC组、miR-455-3p组、si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-NC组和si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-455-3p组）后,MTT实验与平板克隆形成实验分别检测细胞增殖及克隆形成能力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,双荧光素酶报告基因实验与qRT-PCR实验验证lncRNA CEBPA-AS1与miR-455-3p的靶向调控关系,Western blot法检测MMP2、MMP9蛋白表达情况。结果：与癌旁组织比较,胃癌组织中lncRNA CEBPA-AS1的表达量显著升高,miR-455-3p的表达量显著降低,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与GES1细胞比较,SNU-1、AGS、HS-746T细胞中lncRNA CEBPA-AS1的表达量显著升高,miR-455-3p的表达量显著降低,其中SNU-1细胞的lncRNA CEBPA-AS1表达量最高,差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与si-NC组比较,si-lncRNA CEBPA-AS1组细胞活力降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与miR-NC组比较,miR-455-3p组细胞活力降低,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数减少,MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。lncRNA CEBPA-AS1可靶向结合miR-455-3p,并可负调控miR-455-3p的表达。与si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-NC组比较,si-lncRNA CEBPA-AS1+anti-miR-455-3p组细胞活力升高,细胞克隆形成数、迁移及侵袭细胞数增多,MMP2、MMP9蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：干扰lncRNA CEBPA-AS1表达可通过靶向调控miR-455-3p而抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移及侵袭。     

G蛋白偶联胆汁酸受体1促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭的实验研究

目的:探讨G蛋白偶联胆汁酸受体1(G-protein coupled bile acid receptor 1,GPBAR1/TGR5)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:免疫组织化学染色方法(Immunohistochemistry,IHC)检测胃癌及癌旁组织芯片中TGR5表达情况;qRT-PCR及Western blot检测胃癌细胞系中TGR5表达水平;小干扰RNA处理AGS、MKN-45胃癌细胞后构建TGR5敲减细胞系,慢病毒载体转染胃癌SGC-7901细胞构建TGR5过表达细胞系;CCK-8实验、平板克隆形成实验、裸鼠皮下移植瘤实验检测TGR5对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测TGR5对细胞周期及凋亡的影响;Tanswell实验检测TGR5对胃癌细胞迁移及侵袭的影响;Western blot检测上皮间充质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子β-连环蛋白(β-catenin)、锌脂蛋白转录因子(Snail)、E盒结合锌指蛋白(Zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB)1在AGS、MKN-45及SGC-7901胃癌细胞中的表达。结果:TGR5在胃癌及癌旁组织中均有表达,胃癌组织TGR5高表达率(41.0%)显著高于癌旁组织(9.5%),伴肠化生癌旁组织TGR5高表达率(50%)显著高于不伴肠化生的癌旁组织(0%),胃癌组织TGR5表达与肿瘤大小相关。TGR5在正常人胃上皮永生化细胞株GES-1及各胃癌细胞系中均有表达。TGR5表达敲低的AGS和MKN-45细胞增殖能力减弱、凋亡率显著升高、侵袭和迁移能力显著降低。过表达TGR5的SGC-7901细胞增殖能力增强、克隆形成能力提高、凋亡率明显减低、侵袭和迁移能力显著升高。此外,TGR5过表达显著上调了间质细胞标志物β-catenin、Snail、ZEB1的表达水平。结论:TGR5能够增强胃癌细胞增殖及迁移能力,并抑制细胞凋亡。TGR5可能通过EMT途径介导胃癌细胞转移。     

Recent advances in the study of Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus replication and pathogenesis

It has now been over twenty years since a novel herpesviral genome was identified in Kaposi's sarcoma biopsies. Since then, the cumulative research effort by molecular biologists, virologists, clinicians, and epidemiologists alike has led to the extensive characterization of this tumor virus, Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus(KSHV; also known as human herpesvirus 8(HHV-8)), and its associated diseases. Here we review the current knowledge of KSHV biology and pathogenesis, with a particular emphasis on new and exciting advances in the field of epigenetics. We also discuss the development and practicality of various cell culture and animal model systems to study KSHV replication and pathogenesis.     

The structure, reproduction and taxonomy of Vidalia and Osmundaria (Rhodophyta, Rhodomelaceae)

Comprises species occurring mostly in subtidal habitats in tropical, subtropical and warm-temperate areas of the world. An analysis of the type species, V. spiralis (Sonder) Lamouroux ex J. Agardh, a species from Australia, establishes basic characters for distinguishing species in the genus. These characters are (1) branching patterns of thalli, (2) flat blades that may be spiralled on their axis, (3) width of the blade, (4) primary or secondary derivation of sterile and fertile branchlets and (5) position of sterile and fertile branchlets on the thalli. Application of the latter two characters provides an important basic method for separation of species into three major groups. Osmundaria , a genus known only in southern Australia, was studied in relation to Vidalia , and its separation from the Vidalia assemblage is not accepted. Species of Vidalia therefore are transferred to the older genus name, Osmundaria. Two new species, Osmundaria papenfussii and Osmundaria oliveae are described from Natal. Confusion in the usage of the epithet, Vidalia fimbriala Brown ex Turner has been clarified, and Vidalia gregaria Falkenberg, described as an epiphyte on Osmundaria pro/ifera Lamouroux, is revealed to be young branches of the host, Osmundaria prolifera.     

New or rare chromosome counts in Artemisia L. (Asteraceae, Anthemideae) and related genera from Kazakhstan

Fifteen chromosome counts of six Artemisia taxa and one species of each of the genera Brachanthemum, Hippolytia, Kaschgaria, Lepidolopsis and Turaniphytum are reported from Kazakhstan. Three of them are new reports, two are not consistent with previous counts and the remainder are confirmations of very scarce (one to four) earlier records. All the populations studied have the same basic chromosome number, x = 9, with ploidy levels ranging from 2x to 6x. Some correlations between ploidy level, morphological characters and distribution are noted.     

肝癌中HBV和HCV基因和抗原的分布及意义

采用原位分子杂交方法检测HCV RNA及HBV X基因;采用免疫组织化学方法研究HCV核心抗原,非结构区C33c抗原及HBxAg在肝细胞肝癌中的定位及分布.结果表明(1)HCV RNA、HBV X基因在肝细胞肝癌组织检出率分别为40%(55/136)和82%(112/136).HCV RNA定位于癌细胞的胞浆内,阳性细胞呈散在、灶状及弥漫分布三种形式;HBV X基因在肝癌细胞中的分布呈胞浆型、核型及核浆型,阳性细胞也呈上述三种分布形式;(2)HCV C33c抗原、核心抗原在肝细胞肝癌中的阳性率为81%(133/164)及86%(141/164).C33c抗原定位于癌细胞及肝细胞的胞浆内;核心抗原既定位于癌细胞核中,又可定位于胞浆中.C33c抗原阳性细胞以灶状分布为主;而核心抗原阳性细     

Selection with two alleles and complete dominance

For a plant selection model with frequency-independent viabilities, fertilities and selfing rates, it is shown that apart from global fixation, for certain parameter combinations a protected polymorphism and facultative fixation (either allele may become fixed according to initial frequencies) may both occur. Facultative fixation requires different selling rates for the dominant and recessive type. Protection of the polymorphism requires resource allocation for male and female function. In this connection the problem of purely genetically caused population extinction is discussed.
For general frequency dependence and regular segregation, the chances for establishment of a completely recessive gene are compared to those of a completely dominant gene. It is proven that the process of establishment of the recessive gene, despite a fitness advantage, may be considerably endangered by drift effects if random mating prevails. The recessive gene may reach the same effectivity in establishment as a dominant gene, only if the recessive homozygote mates exclusively with its own type during the period of establishment.