噬菌体颗粒大小与其遗传控制的噬菌斑大小的关系

测定培养温度、琼脂浓度、感染系数、培养基丰度和时间等因子对形成噬菌斑大小的影响程度,从而排除了影响噬菌斑大小的非遗传本底。分析电镜下噬菌体颗粒大小和平板上噬菌斑大小两者之间的关系,发现在同一容量较恒定的细胞内,不向噬菌体其生物合成总量趋于相等,该原理解释了决定噬菌斑大小的主要遗传控制方式。计算并推导出在一定程度上可反映噬菌体颗粒大小的经验公式。     

龋齿DNA疫苗(PGJAP)中污染大肠杆菌噬菌体的检测方法的建立

龋齿DNA疫苗工程菌采用的大肠杆菌DH-5α在生产过程中极易污染大肠杆菌噬菌体,所以应对原始菌种、主菌种和工作菌种及大量生产时的发酵液作大肠杆菌噬菌体检测。用大肠杆菌噬菌体VCSM13为标准噬菌体株,对大肠杆菌C3000和DH-5α分别作噬菌斑检测和pfu值计算,验证并确定以VCSM13作为标准噬菌体株,C3000作为检测菌株,对龋齿DNA疫苗原始菌种、主菌种(第一代)、工作菌种(2007001)和其发酵液(200703)分别作噬菌体检测,并建立了检测大肠杆菌噬菌体的直接噬菌斑法。结果显示VCSM13在DH-5α的噬菌斑计数为76,pfu/ml为7.6×1013,C3000的噬菌斑计数为81,pfu/ml为8.1×1013,龋齿DNA疫苗的原始菌种、主菌种、工作菌种和发酵液,噬菌斑计数全部为0。Pfu也为0。阳性对照为74,pfu/ml是7.4×1013,阴性对照为0。通过对阳性对照样本作增殖法试验及挑斑接种验证后,证明此法操作简单,灵敏度高。     

布氏菌噬菌体SA对各种布氏菌的裂解活性

布氏菌噬菌体SA是从猪种布氏菌培养物中分离到的。其裂解活性当菌液浓度为10^-4时,对光滑型猪种菌1、3型,牛种菌1、3、6型和沙林鼠种菌可产生混合性裂解,产生噬菌斑直径3—4mm。噬菌体SA原液或稀释浓度为10^-1、10^-2时,对羊种菌1、3型不裂解。对羊种菌2型、粗糙型牛种菌45/20、犬种菌和绵羊附睾菌产生混合性裂解或噬菌斑,噬菌斑为1—2mm或更小。     

一株粘质沙雷氏菌烈性噬菌体污水分离及特性

[目的]以粘质沙雷氏菌(8039)为宿主菌从医院污水中分离噬菌体并对其基本生物学特点进行研究.[方法]四步法污水分离噬菌体;单、双层平板噬菌斑实验筛选烈性噬菌体并观察噬菌斑形态;纯化后2%磷钨酸染色电镜观察;手工法提取噬菌体核酸酶切后琼脂糖凝胶电泳分析;利用双层平板噬菌斑实验测定最佳感染复数和完成一步生长实验.[结果]从医院污水中成功分离出粘质沙雷氏菌烈性噬菌体一株(SM701),该噬菌体有一个正多面体立体对称的头部,头径约64nm,无囊膜,有一长尾,无收缩尾鞘,尾长约143nm;基因组核酸能被双链DNA内切酶BamH Ⅰ及Hind Ⅲ切开,大小约57kb;噬菌斑圆形透明,直径1mm左右(培养12h,),边界清楚;当感染复数(multiplicity of infection,MOI)为10时,子代噬菌体滴度较高;按照一步生长实验结果绘制出一步生长曲线,可知感染宿主菌的潜伏期是约为30min,爆发期约100min,平均爆发量约为630[结论]按照国际病毒分类委员会分类标准,该噬菌体属于长尾噬菌体科(siphoviridae)烈性噬菌体,按照Bradley和Ackermann形态分类法属于B1亚群;噬菌斑与周围红色细菌生长区,颜色差异明显,非常便于观察和计数;噬菌体头部大小和形态与呼吸道病毒中的呼肠病毒和腺病毒最为接近;国内尚未见粘质沙雷氏菌噬菌体相关报道.     

大肠杆菌VT2噬菌体的分离与溶源转染

本试验利用指示菌MC1061,经双层琼脂法纯化和PCR扩增vt2基因,分别从大肠杆菌O157菌株、牛粪、鸡粪和污水中分离获得5株含vt2基因的噬菌体.这些噬菌斑透明,直径为0.5-2 mm,对指示菌的感染效价均在109PFU/mL以上,抵抗氯仿和56℃C30min的作用.将噬菌体分离株SHφW1感染MC1061后,经PCR鉴定获得一株溶源菌株(MC1061/SHφW1).溶源株的LB培养滤液对Vero细胞产生了显著的病变效应,而MC1061在同等条件下培养的滤液无细胞病变,表明VT2噬菌体通过溶源将vt2毒力基因水平转移,证实了VT2噬菌体的转染与细菌毒力相关.     

细菌的噬菌体感染抗性机制

噬菌体广泛存在于生态环境中。细菌在与噬菌体长期的共进化过程中,衍化出了多种针对噬茵体感染的抗性机制。我们从宿主菌的抑制吸附、阻止噬菌体DNA注入、切断噬菌体DNA和影响其功能及流产感染等方面,对宿主菌抵抗噬菌体感染的机制进行了综述。     

大肠杆菌VT2噬菌体的分离与溶源转染

本试验利用指示菌MC1061。经双层琼脂法纯化和PCR扩增vt2基因,分别从大肠杆菌0157菌株、牛粪、鸡粪和污水中分离获得5株含vt2基因的噬菌体。这些噬菌斑透明,直径为0．5-2min,对指示菌的感染效价均在10^9PFU／mL以上,抵抗氯仿和56℃30min的作用。将噬菌体分离株SHφWl感染MC1061后。经PCR鉴定获得一株溶源菌株(MC1061／SHφW1)。溶源株的LB培养滤液对Vero细胞产生了显著的病变效应,而MC1061在同等条件下培养的滤液无细胞病变,表明VT2噬菌体通过溶源将vt2毒力基因水平转移,证实了VT2噬菌体的转染与细菌毒力相关。     

一株粪肠球菌噬菌体的分离及其生物学特性研究

目的:利用临床耐药粪肠球菌分离裂解性噬菌体,为应用噬菌体治疗耐药粪肠球菌感染提供基础。方法:利用噬菌斑实验分离噬菌体并观察噬菌斑形态;双层平板培养法测定噬菌体效价、最佳感染复数及一步生长曲线;负染法电镜观察噬菌体形态;蛋白酶K/SDS法提取噬菌体基因组,酶切处理后琼脂糖凝胶电泳分析。结果:分离出一株噬菌体IME-EF1,该噬菌体能裂解多株临床分离的粪肠球菌;电镜观察呈蝌蚪形,最佳感染复数为1;通过绘制一步生长曲线,证明该噬菌体感染后的潜伏期为25 min,爆发期为35 min,裂解量为60 pfu。结论:研究结果表明利用临床分离的耐药粪肠球菌分离裂解性噬菌体是可行的,有望为耐药粪肠球菌的抗生素替代疗法奠定基础。     

黏质沙雷菌短尾噬菌体中国分离株的鉴定

以黏质沙雷菌jn01株为宿主菌,从环境污水中分离噬菌体,经反复挑取噬菌斑,获得1株纯化的噬菌体,定名为SmPjn。SmPjn在双层琼脂平板上可形成直径约2mm,圆形、透明的噬菌斑,边缘清晰。透射电镜观察,该噬菌体有一短尾,长（7± 1.25）nm,头部长、宽分别为（58± 2.16）nm×（55±0.47）nm,属短尾噬菌体科（Podoviridae）。可裂解jn01以外的2株黏质沙雷菌;与宿主菌共培养4h后的最佳感染复数为1;一步生长曲线表明该噬菌体的潜伏期约为50min,平均爆发量约为1125pfu/cell。基因组为大于27 kb的DNA,可分别被HindⅢ、EcoRⅠ切成11和9个电泳片段。本报道为国内首次分离黏质沙雷菌短尾噬菌体。     

嗜热芽孢杆菌噬菌体的分离及特征研究

目的：从腾冲热海温泉中分离嗜热芽孢杆菌噬菌体,并初步分析其特征。方法：采用双层平板法分离纯化嗜热芽孢杆菌噬菌体,对分离得到的噬菌体进行电镜形态观察,按照感染复数（MOI）分别为0．01、0．1、1．0、10和100加入噬菌体纯培养液和宿主菌,55℃、160r／min培养8h后测定噬菌体滴度,并进行噬菌体的热稳定性和pH稳定性分析。结果：从腾冲热海温泉中分离得到的噬菌体为二十面体型;其感染宿主菌NHH4形成清晰的噬菌斑,最适MOI为1．0,最适感染温度为55℃,最适感染pH值为7．5。将这株噬菌体命名为TBIP1。结论：从腾冲热海温泉中分离得到的噬菌体TBIP1为典型的二十面体型,当MOI为1．0时,TBIP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高。     

CA16滴度微量检测方法的建立及其验证

目的建立用Vero细胞检测柯萨奇病毒A组16型(CA16)滴度的方法,并对其适用性进行初步验证。方法通过对细胞种类的选择、细胞接种浓度和细胞病变判定时间的优化,建立测定CA16滴度的半数细胞感染剂量法(CCID50法),并对其进行初步验证。结果通过对病毒感染后细胞病变情况的观察,确定了以Vero细胞作为CA16病毒滴度检定用细胞。Vero细胞的最佳接种浓度和结果判定时间分别为5×104~1×105细胞/mL(即96孔板内每孔加入的最终细胞量为5×103~1×104细胞)和7 d。由4组人员对6批CA16病毒液进行重复检测,实验结果表明不同实验人员测定结果的变异系数(CV)在1.739%~4.974%之间,说明该方法测定结果重复性好,准确度高。结论该法简便、稳定,可以灵敏、准确地检测CA16病毒的滴度,可用于相关疫苗生产过程中的质量控制。     

鼠疫耶尔森菌rV抗原单抗系统及其ELISA检测方法的建立

目的建立ELISA双抗体夹心法,测定重组毒力因子rV抗原含量。方法采用杂交瘤技术,制备鼠疫菌rV抗原的鼠单克隆抗体,对抗原表位和单抗特异性进行分析及鉴定,建立ELISA双抗体夹心法,并验证方法的专属性、准确性、精密度和线性范围。结果成功组建了鼠疫菌rV抗原诊断试剂,灵敏度最低检测值为10 ng/mL。结论该方法可用于免疫学检测鼠疫组分疫苗原液rV抗原含量及制备过程中抗原活性,是鼠疫组分疫苗制备中一种重要的质量控制手段,也为进一步开发鼠疫诊断试剂盒及其他相关研究奠定了基础。     

Rapid identification and antibiotic susceptibility testing of Yersinia pestis using bioluminescent reporter phage

The rapid identification and antibiotic susceptibility testing of Yersinia pestis is paramount for a positive prognosis. We previously engineered a Y. pestis-specific 'bioluminescent' reporter phage for the identification of Y. pestis. In this study, we generated an improved reporter phage and evaluated the ability of this phage to provide direct and rapid susceptibility testing. Compared to the first generation reporter, the second generation reporter exhibited a 100-fold increase in signal strength, leading to a 10-fold increase in assay sensitivity. Y. pestis antimicrobial testing in the presence of the reporter elicited bioluminescent signals that were drug concentration-dependent, and produced susceptibility profiles that mirrored the standard CLSI method. The phage-generated susceptibility profiles, however, were obtained within hours in contrast to days with the conventional method.     

肺炎球菌1型荚膜多糖多克隆抗体制备与夹心ELISA法建立及其在多糖浓度测定中的应用

目的：利用肺炎球菌1型全菌体制备多克隆抗体,并且利用该抗体建立肺炎1型荚膜多糖夹心酶联免疫吸附分析法（ Enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA）,用于检测发酵和纯化过程中的多糖浓度。方法用灭活的1型肺炎链球菌免疫家兔6周,获得高滴度的抗多糖血清,经过亲和层析纯化,获得高纯度的兔抗肺炎1型多糖抗体IgG。以纯化IgG作为包被抗体,加入多糖样品,再以生物素化的抗体作为检测抗体,建立夹心ELISA法检测肺炎1型多糖浓度。确定标准曲线的最佳线性范围,并对该方法进行特异性、准确性和精密度验证。结果兔免疫血清经过双向免疫扩散检测抗体滴度可达1∶32;该方法的线性检测范围为1．56～50 ng/mL;最低检测限为3．13 ng/mL。在标准品中混入其他型别多糖或培养基,回收率分别为102％和108％;该方法批内精密度和批间精密度分别为6．08％和7．01％。结论建立的夹心ELISA方法,其特异性、准确性和精密度均良好,可以特异地检测肺炎球菌1型多糖浓度。     

The design of a diagnostic test system based on magnetic sorbents and liposomes

The results obtained in the study of the possibility of using magnetic sorbents for the construction of a diagnostic assay system based on the antigen-antibody interaction are presented. As a model, Yersinia pestis capsular antigen and immunoglobulins to it have been used. A solid-phase immunofluorescent liposomal assay method has been developed; this method can be used for the detection of biopolymers in the sample under study and for the determination of their activity.     

Ⅰ型禽腺病毒AV208株在鸡肝癌细胞中增殖规律的研究

【目的】摸索鸡肝癌细胞系(LMH)培养条件,并采用LMH细胞系对Ⅰ型禽腺病毒AV208株(FAVⅠ-AV208)进行增殖规律的研究。【方法】细胞以不同血清浓度培养并以不同接种比例传代。观察最佳感染复数下的细胞病变和病毒增殖情况,并研究病毒接种物浓度与蚀斑形成数量之间的关系。【结果】LMH细胞系的最适培养条件为,以10%FBS的培养基以1:5比例传代培养。FAVⅠ-AV208毒株可以在LMH细胞中良好增殖并达到较高的滴度(107.5TCID50/0.1 mL)。在最佳感染复数(MOI)为0.01时,72 h细胞即出现明显的细胞病变(CPE),特征为细胞变大变圆,集聚成不规则的葡萄串状。病毒接种物浓度与蚀斑形成数量间呈线性相关。【结论】LMH细胞是FAVⅠ较合适的病毒培养系统,为研制禽腺病毒重组疫苗提供了有利工具。     

Interaction of Yersinia pestis bacteria with bacteriophage mu

Yersinia pestis cells are shown to be sensitive to bacteriophage Mu cts62 infection. Lysis of bacteria has been shown to be more efficient on solid nutrient medium than in LB broth. 10(-5) pfu per ml is the maximal concentration of bacteriophage particles yielded from the broth cultures of bacteria. Moi 0.1 has been used to obtain such yields of bacteriophage. Lysogenization of Yersinia pestis cells has not been achieved when the standard methods of bacteriophage infection have been used. It was accomplished by the conjugal transfer of plasmid RP4::MU cts62 to Yersinia pestis from Escherichia coli. The deficiency of Yersinia pestis in producing bacteriophage Mu cts62 mature particles during the lytic cycle of bacteriophage is discussed.     

环介导等温扩增技术检测鼠疫耶尔森菌的敏感性和特异性研究

为观察环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术能否适用于我国不同疫源地鼠疫耶尔森菌所有基因组型的检测,本研究建立了一种基于3a靶序列设计特异性引物快速检测鼠疫耶尔森菌的LAMP方法.选择分离自我国11个鼠疫自然疫源地的65株野生代表性鼠疫耶尔森菌株,同...     

The lytic activity of Yersinia pestis phage P 3d serovar

The lytic activity of plague phage II, serovar 3, with respect to 1,800 bacterial strains has been studied: 760 Yersinia pestis strains, 262 Y. pseudotuberculosis strains, 252 Y. enterocolitica strains, 166 Escherichia coli strains, 90 Shigella strains and 270 strains of other species. The phage has been found to lyse 81.8% of Y. pestis strains, 1 Y. pseudotuberculosis strain and 1 Y. enterocolitica strain. The representatives of other 19 bacterial species have proved to be resistant to the phage. Though having a wide range of action within Y. pestis, the phage does not lyse most of the strains of the causative agent of plague, isolated in certain natural foci. This fact offers promise for using the phage for the differentiation of Y. pestis.