人血清中肺炎链球菌荚膜多糖IgG抗体定量ELISA的初步验证

目的对肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测进行初步验证。方法以不同生产企业相同型别的12F、19A、22F及33F型荚膜多糖为包被抗原,用肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,对人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体进行定量检测,并对该方法的线性、检测限、检测范围、准确度、精密度、特异性进行初步验证。结果该方法检测13份质控血清的12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的范围分别是0.02~4.38 ng/m L、0.14~34.68 ng/m L、0.10~25.20 ng/m L和0.12~29.78 ng/m L,r2均0.99,最低检测限分别为0.35 ng/m L、0.37 ng/m L、0.44 ng/m L和0.88 ng/m L。准确度为71.15%;试验间CV值均20%;特异性均85%。结论肺炎链球菌荚膜多糖Ig G抗体定量ELISA,用于人血清中12F、19A、22F及33F型Ig G抗体的检测,需对准确度、精密度和特异性进一步验证。     

检测人血清中肺炎球菌10A型荚膜多糖IgG抗体的包被抗原适用性研究

目的 确定用于23价肺炎多糖疫苗免疫后临床血清样本检测的包被用10A型肺炎球菌荚膜多糖(Pn10A)。方法 根据WHO推荐的检测人血清中肺炎球菌荚膜多糖IgG抗体含量的ELISA(PnPSELISA),包被不同来源(ATCC、A公司、B公司、5个公司混合)的10A多糖[Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)、Pn10A(mix)],检测38份血清中Pn10AIgG抗体的几何平均浓度(GMC)和相同样本免疫前、后的阳转率(免疫后/免疫前≥2为阳转),确定用于临床血清检测的包被Pn10A。结果 用Pn10A(ATCC)、Pn10A(A)、Pn10A(B)包被检测38份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9);Pn10A(B)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异有统计学意义(P<0.05),数据一致性差(r<0.8);再以Pn10A(A)、Pn10A(ATCC)、Pn10A(mix)包被检测另46份相同样本免疫前、后血清中Pn10AIgG抗体的GMC和阳转率,Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)包被的检测结果差异无统计学意义(P>0.05),数据一致性好(r>0.9),免疫前、后GMC值相近,阳转率相近,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Pn10A(A)、Pn10A(mix)与Pn10A(ATCC)均可以作为包被多糖用于检测人血清中肺炎球菌Pn10AIgG抗体;但从长久使用相同抗原检测大批量临床样本的需求考虑,Pn10A(mix)更具有足量、经济的优势。     

肺炎链球菌荚膜多糖纯化及质量控制方法的研究现状

肺炎链球菌(简称肺炎球菌)荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)位于肺炎球菌的最外层,是肺炎球菌主要的毒力因子之一,也是有效的保护性抗原.获得高质量的肺炎球菌CPS,是肺炎球菌多糖疫苗(pneumococcal pol-ysaccharide vaccine,PPV)和肺炎球菌结合疫苗(pn...     

18～60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平调查

目的了解18~60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平,为肺炎链球菌性疾病的预防与控制提供参考依据。方法选取甘肃、宁夏健康献浆员为调查对象,分为18~30、31~40、41~50、51~60岁4个年龄组,共调查347人。采用WHO推荐的标准化酶联免疫吸附试验检测12种肺炎链球菌血清型IgG抗体水平,并计算IgG抗体阳性率和几何平均浓度(Geometric mean concentration,GMC)。结果质控血清QC907的IgG抗体浓度均值与参考值之间的误差百分数均未超过±40%,测定值符合其参考值范围,各血清型抗体浓度检测结果的CV均30%。347份血清样品肺炎链球菌IgG抗体总阳性率为64.8%~96.0%,GMC为0.37~2.24μg/m L。不同血清型间IgG抗体GMC差异具有统计学意义(P0.05)。不同年龄组同种血清型IgG抗体阳性率及GMC均无统计学意义(P0.05)。除19F型外,不同地区同种血清型IgG抗体阳性率均有统计学意义(P0.05);除4、7F、14和18C型外,不同地区同种血清型IgG抗体GMC间差异均有统计学意义(P0.05)。结论 18~60岁健康人群肺炎链球菌IgG抗体水平普遍较高,对肺炎链球菌主要流行血清型均具有一定的保护力。     

~1H-NMR用于肺炎链球菌荚膜多糖质量控制的尝试

纯化的6B、18C血清型肺炎链球菌荚膜多糖用生化试验和免疫学试验检测分析后再用一维氢谱核磁共振波谱(1H-NMR)法分析。生化检测其相应多糖的主要化学基团含量是否合格,免疫学检测旨在了解多糖纯化工艺是否影响了多糖的抗原活性,并间接佐证纯化多糖的生化特性是否正确。在此基础上进行1H-NMR分析,可以对纯化多糖的特性有进一步的了解。结果表明,常规的生化检测试验和免疫学检测试验并联合应用1H-NMR分析法后可更好地控制纯化肺炎链球菌荚膜多糖的质量。     

质控血清09CS中13个肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG含量检测范围的确定

目的 建立09CS作为质控血清用于13价肺炎球菌多糖蛋白结合疫苗(13PCV)临床血清样本检测中的检测值范围。方法 用WHO推荐的检测人血清中抗肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG的定量ELISA,以国际人肺炎球菌标准血清007sp为标准,将09CS作为待测血清,检测其在13个血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、23F型)中抗荚膜多糖抗体IgG含量的值。连续检测09CS血清100余次,计算99%置信区间的各血清型几何平均抗体浓度、标准偏差(SD)和变异系数(CV)。结果 检测得到09C中13个血清型抗荚膜多糖IgG抗体含量以及在99%置信区间(CI)下±2.58倍SD的检测值范围;13个血清型检测结果的CV分别为10.86%、12.52%、13.96%、14.98%、28.77%、11.16%、14.96%、9.31%、10.43%、7.28%、10.86%、12.52%、13.96%,除6A型外,各型CV均低于15%,表明试验间精密度良好;检测次数异常率低于10%。结论 09CS可作为质控血清,用于13价肺炎球菌结合疫苗临床血清中抗荚膜多糖抗体IgG含量的ELISA检测。     

人肺炎球菌参考血清09CS中11个血清型抗荚膜多糖的抗体IgG含量的定值

对人肺炎球菌参考血清09CS中11个肺炎球菌血清型(2、8、9N、10A、11A、12F、15B、17F、20、22F、33F)的抗荚膜多糖抗体IgG含量进行定值。方法用WHO推荐的标准检测人血清中抗肺炎球菌荚膜多糖抗体IgG定量ELISA方法,以国际标准血清89SF为标准,对此11个血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量进行定值;以暂定的09CS的定值为标准检测12份WHO校正血清、16份兰州生物制品研究所有限责任公司(LIBP)质控血清和89SF,对定值的准确性进一步验证。结果以09CS的定值为标准检测的12份WHO校正血清和16份LIBP质控血清的11个血清型抗荚膜多糖抗体结果,与以89SF为标准检测的结果,均具有良好的直线相关关系(r≈1.00,P0.05);以09CS的定值为标准检测的89SF的11个血清型抗荚膜多糖抗体的新值与其原定值比较,各血清型的误差均20%。结论实验完成了人肺炎球菌参考血清09CS中的11个血清型抗荚膜多糖抗体IgG含量的准确定值。     

肺炎支原体ELISA检测试剂盒的临床应用

目的评价肺炎支原体ELISA检测试剂盒在临床应用的效果。方法用肺炎支原体ELISA检测试剂盒检测呼吸道感染患儿的咽拭子标本,并以肺炎支原体快速检测培养基试剂做同步盲法对照试验,分析该试剂盒的准确性及批内、批间产品的稳定性。结果在100例呼吸道感染患儿咽拭子标本中,肺炎支原体ELISA检测法阳性率为38%,肺炎支原体快速检测培养基法阳性率为37%,两种方法阳性结果符合率为97%。同步盲法试验结果显示,肺炎支原体ELISA检测试剂盒批内、批间产品阳性结果的一致率均为100%。结论该试剂盒具有较好的准确度和特异性,并且操作简便、快速,临床可推广应用。     

硫酸-咔唑微孔板法检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量

目的利用微孔板检测肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,并对该方法进行验证及初步应用。方法以微孔板为反应容器,对常规硫酸-咔唑法的咔唑质量浓度和加热时间进行优化;并对建立的方法进行线性范围、精密度以及准确度的验证及初步应用。结果最佳的咔唑质量浓度为0.10 mg/m L,加热时间为20 min。标准品D-葡萄糖醛酸在4~40μg/m L范围内,其质量浓度与校正后吸光值呈良好的线性关系,r2>0.99;批内及批间CV值分别为1.54%~3.02%及4.53%~7.75%;加入5μg/m L、10μg/m L、20μg/m LD-葡萄糖醛酸的8-160502、9V-160102、22F-160103荚膜多糖,D-葡萄糖醛酸的回收率为92.21%~110.47%。微孔板法校正前与常规方法在测定肺炎链球菌荚膜多糖中糖醛酸含量时差异无统计学意义(P>0.05),与校正后结果差异有统计学意义(P<0.05)。微孔板法测定分子质量分布与常规方法有较好的一致性。结论硫酸-咔唑微孔板法可有效检测肺炎球菌荚膜多糖中糖醛酸含量,操作简便快捷,精密度和准确度良好,可用于肺炎链球菌荚膜多糖疫苗的质量控制。     

人巨细胞病毒IgG抗体(ELISA)检测试剂盒稳定性观察

目的观察人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)IgG抗体(ELISA)检测试剂盒的稳定性。方法将HCMV IgG抗体(ELISA)检测试剂盒分别以不同时间放置于2~8℃和37℃,检测试剂盒的外观、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、重复性和检测限,并对其进行稳定性(实时稳定性、加速破坏稳定性、开瓶稳定性、运输稳定性)的观察及初步应用。结果 3批实验用试剂盒实时稳定性和3批试生产试剂盒加速破坏稳定性、开瓶稳定性、运输稳定性试验中,外观均合格,阴性参考品符合率及阳性参考品符合率均为100%,最低检出限参考品均能检出。3批实验用试剂盒实时稳定性检测重复性良好,CV值均≤15.00%。3批试生产试剂盒在37℃条件下放置6 d后,CV值分别为7.94%、7.16%、4.66%;开瓶后分别置于2~8℃冰箱0w、1w、2w、3w、4w,CV值均≤1 5.00%;运输至上海,CV值分别为2.59%、3.12%、2.37%;运输至海南,CV值分别为4.89%、2.65%、2.33%。样品反复冻融5次后,试剂盒检测稳定性良好。结论 HCMV IgG抗体(ELISA)检测试剂盒具有良好的稳定性,在2~8℃条件下至少可保存15个月。     

人血清中Hib荚膜多糖抗体定量的ELISA方法建立及初步验证

目的比较两种不同活化方法制备的酪胺化Hib荚膜多糖(PRP-Ty)的特性,分别作为包被抗原建立测定人血清中Hib荚膜多糖特异抗体含量的ELISA方法。比较并确定包被抗原,对建立的ELISA方法进行初步验证。方法分别用CNBr和CDAP作为活化剂制备PRP-Ty,经Sepharose CL-4B层析分析相对分子质量分布范围,并确定适宜PRP-Ty抗原包被浓度的间接ELISA方法,以人Hib荚膜多糖IgG抗体定量标准品作为阳性标准,通过四参数非线性拟合计算人血清Hib荚膜多糖IgG抗体含量。结果 CNBr活化法制备的酪胺化Hib荚膜多糖(PRP-TyCNBr)较天然Hib荚膜多糖相对分子质量向小相对分子质量方向偏移,而CDAP活化法制备的酪胺化Hib荚膜多糖(PRP-TyC DAP)较天然Hib荚膜多糖相对分子质量分布无显著变化;两种PRP-Ty在0.65～2.00μg/mL的包被浓度范围内均有良好的包被活性,方法的灵敏度均达到0.02μg/mL IgG抗体检测水平。结论 PRP-TyC DAP作为包被物的ELISA测定方法可以更加真实可靠地反映人血清IgG抗体水平。     

百日咳抗体酶联检测试剂盒的研制及其应用

为了研制百日咳抗体酶联检测试剂盒以调查吉林省2~8岁儿童百日咳、白喉及破伤风抗体水平。采用百日咳菌液经硫酸铵盐析、PBS溶液浸提及蔗糖密度梯度离心提取的PT和FHA作为包被抗原,辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗人IgG,作为抗体制备ELISA试剂盒。并经敏感性、特异性、重复性试验考查该试剂盒质量。结果显示,试剂盒敏感性可达0.0036 IU/m l;重复性较好,CV<4%。试剂盒置于37℃3d敏感性无明显变化。吉林省2~8岁儿童白喉、破伤风的抗体水平较高,百日咳的抗体水平相对较低。此方法制备的百日咳抗体酶联检测试剂盒的质量符合要求,可应用于临床检验与流行病学监测。     

ELISA检测抗-HIV室内质控血清的制备和应用

为了提高抗-HIV的检测质量,进行室内质控以鉴别诊断试剂的质量和控制操作误差,试制了抗-HIV室内质控血清,收集抗-HIV诊断试剂盒中阳性对照血清,采用不同品牌、不同批号的诊断试剂检测后,稀释、分装成低值弱阳性,即为室内质控血清,将质控血清放不同温度下保存,考核其稳定性和精密性,并应用于两厂家各3批试剂的检测,结果试制的室内质控血清在-20℃条件下存放5个月,在4℃条件下存放29天稳定性良好,检测结果稳定,该质控血清适宜作抗-HIV检测室内质控使用。     

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antisperm antibodies in horse serum

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed and evaluated to detect equine antisperm antibodies (ASA) in horse serum. Six maiden mares between 12 and 18 mo of age were immunized with stallion sperm cells (SC group, N=2), seminal plasma (SP group, N=2), or phosphate-buffered saline (PBS) as a control (C group, N=2). Horses received a second injection of the same antigen 2 wk after the first. Blood was collected weekly for 10 wk after initial immunization and again at Week 15. Serum ASA levels (IgG and IgA) were measured by ELISA using two assay systems, one containing stallion SC as the plate antigen and another containing SP.

In horses immunized with SC, peak IgG levels were detected by ELISA during Wk 2 and 3 after first injection using either plate antigen. The antibody levels persisted through Week 5 and then slowly declined until Week 15. Horses immunized with SP had IgG levels that did not differ from control horses using either ELISA plate antigen. The only significant elevation in serum IgA ASA occured during Week 5 after initial immunization and only in mares immunized with SC as detected by ELISA using SC as the plate antigen. Attachment of ASA to stallion spermatozoa was confirmed by an indirect immunofluorescence assay.     

肺炎球菌1型荚膜多糖多克隆抗体制备与夹心ELISA法建立及其在多糖浓度测定中的应用

目的：利用肺炎球菌1型全菌体制备多克隆抗体,并且利用该抗体建立肺炎1型荚膜多糖夹心酶联免疫吸附分析法（ Enzyme-linked immunosorbent assay ,ELISA）,用于检测发酵和纯化过程中的多糖浓度。方法用灭活的1型肺炎链球菌免疫家兔6周,获得高滴度的抗多糖血清,经过亲和层析纯化,获得高纯度的兔抗肺炎1型多糖抗体IgG。以纯化IgG作为包被抗体,加入多糖样品,再以生物素化的抗体作为检测抗体,建立夹心ELISA法检测肺炎1型多糖浓度。确定标准曲线的最佳线性范围,并对该方法进行特异性、准确性和精密度验证。结果兔免疫血清经过双向免疫扩散检测抗体滴度可达1∶32;该方法的线性检测范围为1．56～50 ng/mL;最低检测限为3．13 ng/mL。在标准品中混入其他型别多糖或培养基,回收率分别为102％和108％;该方法批内精密度和批间精密度分别为6．08％和7．01％。结论建立的夹心ELISA方法,其特异性、准确性和精密度均良好,可以特异地检测肺炎球菌1型多糖浓度。     

检测四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量ELISA法的建立

目的建立双抗体夹心ELISA法,对A群流脑多糖抗原进行特异性定量测定。方法制备抗A群多糖的特异性多克隆抗体,所得抗血清经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法制备辣根过氧化物酶标记多克隆抗体。分别以抗A群多糖多克隆抗体作为包被抗体及酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对A群多糖抗原进行特异性定量测定。结果一系列验证试验表明,该法特异性较好,未检出与C、Y、W135群多糖的交叉反应;1.25～20 ng/mL多糖浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.98,经实验内10次及不同试验间以16、84、ng/mL测定3次A群多糖中的含量,变异系数在6.3%～11.5%间,回收率在91.8%～105.9%之间,符合常规质控要求,检测限量为4 ng/mL。采用该法测定3批ACYW135群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖含量、分子大小及回收率的结果均符合规程草案质量标准。结论建立的双抗体夹心ELISA法可尝试用于ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗中A群多糖的关键质量指标的检测。     

The solid phase attachment of fungal hyphae in an ELISA to screen for antifungal antibodies

A method to immobilize fungal hyphae onto the wells of 96-well microplates for use in an in-direct ELISA to screen for antifungal antibodies in sera and cell culture supernatants is described. The hyphae from three genera (Penicillium, Eurotium andFusarium) were successfully attached by overnight drying onto wells precoated with poly-L-lysine and glutaraldehyde. Microscopy revealed that the hyphae remained attached to the wells throughout the ELISA and antiserum titrations showed that the attached hyphae were uniformly coated and remained reactive. Background absorbances were low and the plates could be stored at –20 °C without loss of reactivity.     

ELISA法检测鸡胚中抗生素残留量的研究及其应用

用ELISA法测定氨苄青霉素、氯霉素在流感疫苗生产用海兰白鸡鸡胚中的残留。实验通过比较空白组0d龄全鸡胚和给药组0d龄全鸡胚中氨苄青霉素、氯霉素的残留量,说明了饮水给药的方法能够建立抗生素残留的动物模型。通过比较10d龄鸡胚尿囊液、卵黄中氨苄青霉素、氯霉素的残留量,说明尿囊液中的残留量明显高于卵黄。通过绘制残留曲线,可以看出氨苄青霉素、氯霉素在海兰白鸡体内蓄积迅速,却消除缓慢。通过实验初步摸索出了氨苄青霉素和氯霉素在鸡胚中的分布、代谢及残留规律,获得了部分生产用鸡胚尿囊液的抗生素残留量数据,为进一步控制流感疫苗生产用鸡胚质量提供技术保障。