研制狂犬病病毒疫苗的新途径

由于人们对狂犬病病毒的病原性和免疫原性了解尚不够透彻,因此进一步提高常规疫苗的免疫原性和降低成本还面临着许多问题。例如,干扰素(IFN)在抗狂犬病免疫中有何作用?一旦病毒进入神经系统,抗体是否还具有保护作用?狂犬病毒糖蛋白(Rabies Virus Glycoprotein, R. G)是不是唯一的保护性抗原?暴露前和暴露后两种疫苗的发展前景如何?近年来     

狂犬病病毒糖蛋白表达及纯化及其记忆性B细胞结合能力的分析

表达纯化不同标签、不同大小3个狂犬病病毒糖蛋白,分析其结合功能后,得到具备高亲和力的、可特异性结合记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。本实验通过基因工程的方法,采用不同的原核表达系统分别表达带有不同标签的、全长和膜外区的RVG,纯化蛋白并分析比较其结合功能,荧光标记候选蛋白,结合CD19及CD27的抗体,流式细胞术检测狂犬疫苗免疫后PBMCs中抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞的情况,确认候选蛋白与抗狂犬病毒特异性记忆性B细胞的结合功能。本实验成功构建了3个表达载体pGEX-5X-1-RVG、pET28a-RVG和pET30a-G,优化表达纯化条件成功获得了糖蛋白GST-RVG、His-RVG和His-G。纯化后的GST-RVG、His-RVG和His-G经Western blotting和ELISA鉴定均有抗原特异性;由竞争ELISA法测得3个纯化后糖蛋白与抗狂犬病病毒抗体的亲和力。通过流式细胞术可以检测到狂犬疫苗免疫后阳性志愿者PBMCs中的抗狂犬病病毒特异性记忆性B细胞,从而获得了高亲和力、可用于分选抗原特异性的记忆性B细胞的狂犬病病毒糖蛋白。     

狂犬病病毒保护性抗原与亚单位疫苗的研究进展

本文论述了狂犬病毒糖蛋白,尤其是核蛋白或核糖核蛋白（ＲＮＰ）作为狂犬病重要保护性抗原的特性。鉴于核蛋白诱生狂犬病细胞免疫的重要保护作用,以及脂质体中同时加入核蛋白及糖蛋白后,其保护水平与狂犬病全病毒疫苗相似,故以研制狂犬病双价亚单位疫苗为妥。杆状病毒载体优点多,其表达的狂犬病病毒核蛋白及糖蛋白可制备安全、有效疫苗的大规模使用,乃至口服使用。     

人用精制Vero细胞狂犬病疫苗的保护性试验

用ＣＴＮ－１Ｖ株生产的精制Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗腹腔免疫小鼠后,再用狂犬病毒街毒株ＳＢＤ０７脑内和肌肉攻击,结果表明稀释５倍疫苗的保护率分别为８８．９％和９０％,且５倍稀释疫苗的保护效果与原苗相当,此研究证明ＣＴＮ－１Ｖ株能用来作为疫苗的生产毒株。     

激励和发扬树状细胞的专业精神

人们早就知道抗原提呈细胞(ＡＰＣ)在激发机体细胞,乃至体液免疫响应方面的重要作用。一直在实验研究中用成纤维细胞等细胞作为ＡＰＣ以图激活机体的免疫响应。但是,可能这些细胞缺乏专业精神和合作态度,也可能它们心有余而力不足,很难取得满意的结果。面临着越来越多的与免疫有关的疾病,特别是肿瘤、ＡＩＤＳ、感染病和各种炎症的肆虐,科学家、医务工作者、患者及其家属都在呼唤专业的ＡＰＣ。人们在呼喊:专业的ＡＰＣ,你(你们)在哪里?你知道我们在期盼着你吗?在严格分析了细胞对肿瘤和病毒抗原免疫响应的早期过程之后,人们终于认识树状细…     

基于树突状细胞的肿瘤疫苗研究进展

1973年,Steinman和Cohn在小鼠脾脏发现具有树枝状突起的独特形态细胞,并将之命名为树突状细胞（dendritic cell,DC）。DC作为连接先天性免疫和获得性免疫的桥梁,是机体识别和摄取病原体和肿瘤抗原的关键细胞,具有抗原提呈能力强和激活初始型T细胞的特点。     

精制Vero细胞狂犬病疫苗的灭活和纯化

通过狂犬病病毒灭活和纯化试验,试验精制Vero细胞狂犬病疫苗。疫苗经检测残余小牛血清白蛋白含量,Vero细胞残余DNA含量,疫苗效价,安全试验均能达到WHO规程要求。初步建立了适合大规模生产精制Vero细胞狂犬病疫苗的灭活和纯化工艺。     

微载体培养Vero细胞精制狂犬病疫苗的研究

自本世纪70年代狂犬病二倍体疫苗研制成功并批量应用以来,各种细胞疫苗相继研制成功并投入生产和应用,已在许多国家代替了传统的脑组织疫苗。我们对Vero细胞微载体培养的狂犬病疫苗作了初步研究,为大规模生产提供依据。1材料与试剂1．IVere细胞由中国药品生物制品检定所提供Vero细胞125代种子细胞。1．2病毒株狂犬病毒Vero细胞适应株CTN＊。由检定所提供,毒力为7．lfogLfy。／Inl。我们对病毒株进行了适应性传代,毒力达到8．24logLfy。／Inl,高于国内发表材料4aG．Fluav．Inp株［’,到的满度。1．3生物反应器CeligenplusN哪沿…     

T细胞苗的研究进展

近年来有关ＣＤ４＋和ＣＤ８＋Ｔ细胞识别的抗原研究，扩大了制备有效Ｔ细胞疫苗新的途径，在Ｔ细胞疫苗的研究上也有了新的进展。这些研究进展在诱发针对细胞内寄生病原体的保护性免疫以及自身免疫病、过敏反庆性疾病和癌症的免疫治疗上，都有其理论和实际意义。     

应用流行性出血热病毒抗NP和G1,G2单抗检测感染细胞和疫苗…

应用出血热病毒的抗核蛋白和糖蛋白（Ｇ１、Ｇ２）单克隆抗体的ＥＬＩＳＡ夹心法对感染细胞培养物和灭活疫苗内的ＮＰ和Ｇ１、Ｇ２抗原成分进行检测。结果表明感染Ｖｅｒｏ－Ｅ６细胞内ＮＰ和Ｇ１、Ｇ２含量均高于细胞外培养液上清,前者的抗原滴度分别为≥５１２和２５６,后者仅为６４和１６。     

病毒样颗粒疫苗的研究进展

病毒样颗粒(VLPs)由病毒结构蛋白组装而成,形态上与真正病毒粒子相似,大小介于15~400 nm之间,因缺乏病毒基因组而不能自主复制,相比单独的抗原蛋白和多肽,VLPs表现出与天然病毒更相似的构象表位,因此具有更强的免疫原性和生物学     

人类免疫缺陷病毒重组载体疫苗的研究进展

重组载体疫苗是目前人类免疫缺陷病毒疫苗的研究热点,近几年来不仅在病毒载体和细菌载体选用的种类方面有了新的突破,而且对载体疫苗的组合免疫策略和最佳免疫的选用方面已有全新的认识。本文就用于该病毒重组疫苗的病毒载体(包括痘病毒、α病毒、仙台病毒、甲型流感病毒、腺病毒、狂犬病病毒、疱疹性口炎病毒和单纯疱疹病毒载体)以及细菌载体(包括卡介苗、李斯特单胞茵、沙门茵和布氏杆菌载体)等的研究进展进行综述。     

人用精制Vero细胞狂犬病疫苗纯化方法选择

人用精制Ｖｅｒｏ细胞狂犬病疫苗为一种安全、有效的新型疫苗,我们在研制该种疫苗时首先比较了密度梯度离心法和凝胶过滤柱层析法,并发现后者最佳。我们选择了以Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ＦＦ为介质的凝胶过滤柱层析的工艺,并对该方法的上样量、流速等指标进行了选择,确定了最佳方法,并在研制中使纯化疫苗的杂蛋白去除率达到９９．８％以上,为大规模生产提供了工艺方法。     

柱层析法纯化人用地鼠肾细胞狂犬病疫苗

用Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－６Ｂ凝胶层析法纯化原代地鼠肾细胞狂犬病苗,可去除绝大部分杂蛋白,总蛋白含量减少９９．４％以上,纯化后抗原比活性提高２１０倍,单位疫苗剂量中牛血清含量降低１８．７倍以上。方法简单,价廉,适合于工业生产     

防治和根除狂犬病的新途径

灭活的完整狂犬病毒(RV)颗粒是最安全和最有效的抗原,适合用作狂犬病的免疫治疗;灭活RV疫苗,例如HDCV疫苗,仍然是金标准。但是若干种正在研究的实验性疫苗(如以G蛋白为基础的DNA和重组疫苗),也有可能替代灭活病毒。为了达到可与金标准疫苗相当的效力,在这些新型疫苗中的G蛋白必须以与在完整病毒颗粒中相似的方式出现,即是锚定在膜上并有很高的密度。     

确定病毒B细胞抗原表位的策略

抗原表位是诱生免疫反应的抗原最基本单位,根据其功能的不同,可大致分为Ｂ细胞、Ｔｈ细胞及Ｔｃ细胞抗原表位。如何确立这些抗原表位是近年分子免疫学研究的热点。本文综述了有关确立病毒Ｂ细胞抗原表位的方法及策略,并评价了这些方法的优缺点及适用范围。     

精制原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗灭活工艺的改进

为了提高精制原代地鼠肾细胞狂犬病疫苗（ＰＰＨＫＲＶ）的质量,在甲醛浓度,温度和时间相同的条件下,对静置法和转瓶法灭活狂犬病毒后制成的疫苗进行了效力测定比较,结果表明采用转瓶灭活的ＰＰＨＫＲＶ效力高于静置灭活法。