疾病基因克隆的策略及主要方法

目　　录一、定位克隆 ( ｐｏｓｉｔｉｏｎａｌｃｌｏｎｉｎｇ)策略　 (一 )家系连锁分析法　 (二 )等位基因共占法　 (三 )人群相关分析法　 (四 )ｃＤＮＡ筛选二、消减杂交 (ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ)策略　 (一 )消减杂交法和抑制性消减杂交法　 (二 )差示反转录ＰＣＲ法和差异消减显示法　 (三 )代表性差异分析法和Ｓ1核酸酶介导的缺失基因探针富集法　 (四 )基因组错配扫描法　 (五 )比较基因组杂交法　 (六 )ＤＮＡ微陈列杂交系统三、两类策略的联系基因组全序列测定可望提前完成 ,而以功能鉴定为核心的功能…     

二杠鹿茸与三杈鹿茸中氨基酸含量的比较

通过对二杠鹿茸与三杈鹿茸中氨基酸的测定 ,结果表明 :三杈鹿茸中的氨基酸含量高于二杠鹿茸中氨基酸含量 ,从而为合理利用二杠鹿茸、三杈鹿茸提供科学理论依据。     

云南盈江县不同产地草果氨基酸和矿质营养元素分析

用氨基酸自动分析仪、等离子体发射光谱仪(ICP法)等方法测定云南盈江县三个草果Amomum tsaoko主产乡的草果氨基酸、矿质营养元素等成分。结果显示,不同产地草果中氨基酸和矿质营养元素含量有明显差异。盈江县各地的草果氨基酸含量均比文山产草果低,其中苏典乡劈石村的2号样品(海拔1540 m,土壤pH 6.58)氨基酸含量与文山样品最为接近;微量营养元素总含量则相反,盈江县产草果均高于文山样品。     

“Soh min.G”即复方氨基酸输液的临床应用

一、复方氨基酸输液临床使用价值二、复方氨基酸输液的氨基酸组成 1. L型氨基酸 2.必需氨基酸 3.非必需氨基酸 4.E/N比率 5.辅助成分三、复方氨基酸输液的临床应用     

野猪骨桥蛋白基因表达及与家猪的对比分析

采用RT-PCR法克隆野猪(Sus scrofa)OPN基因,构建其进化树,半定量RT-PCR法结合Western-blot法对其表达进行研究.结果表明,野猪的OPN基因CDS全长909 bp,编码303个氨基酸.特征基序包括(1)第86个氨基酸处有8个连续的天冬氨酸;(2)第153～157氨基酸处有一个与细胞黏附有关的Gly-Arg-Gly-Asp-Ser(GRGDS)序列;(3)第163～164氨基酸处有一个凝血酶酶切位点RS.分子进化树表明,野猪与家猪的亲缘关系最近,与石斑鱼(Danio,rerio)的亲缘关系最远,OPN基因在进化过程中发生过一次大的变异.OPN mRNA在心、胃、肾、卵巢的表达水平较高,在肝、脾、肺、小肠、肌肉、子宫内的表达水平较低.不同组织表达的OPN蛋白大小不同,存在70 ku、70 ku+45 ku和70 ku+45 ku+24 ku这三种模式.     

高效液相色谱法检测大鼠子宫内膜游离氨基酸

本文采用邻苯二甲醛(OPA)和β-巯基乙醇柱前衍生,荧光检测分析大鼠子宫内膜游离氨基酸。50分钟分析18种氨基酸,以TEGD缓冲液[10mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris-HCI),1.5mmol/L 乙二胺四乙酸(EDTA)3mmol/L叠氮钠(NaN_2)、30％甘油Immol/L二硫苏糖醇(DTT)pH为7.4提取氨基酸,平均回收率94.0±5％。各氨基酸保留时间变异系数平均为1.25±0.1％(均值±标准差),峰面积变异系数平均为3.1±0.9％,各氨基酸浓度在10pmol—1.5nmol范围内,线性相关系数为0.979±0.08(均值±标准差)。同时还讨论了影响氨基酸检测的某些色谱条件。     

小肽在猪营养中的研究

蛋白质在消化道中的消化终产物往往大部分是小肽而非游离氨基酸,小肽能完整地被吸收并以二、三肽形式进入血液循环,小肽在蛋白质营养中有着重要的作用。动物为了达到最佳生产性能,必须需要一定数量的小肽,作者就目前国内、外对小肽在猪营养中的研究及应用现状作一综述。随着蛋白质和氨基酸营养研究的深入,人们已逐渐认识到肽营养的重要性。Aga r(1953)观察到,肠道能够完整转运双甘肽。其后Naey(1959)和Smith(1960)首先提出肽可被完全转运的确切证据。最简单的肽是由2个氨基酸组成的二肽,其中含有1个肽键。含有3、4、5个等氨基酸的肽分别被称为三、四、五肽等。由2--10个氨基酸通过     

胰岛素B链中肽段的合成 Ⅱ.苄氧羰白·S-苄基半胱·甘·丝·咪唑-苄基组·白·缬氨酸甲酯的合成

胰岛素B链中B_(6-12)七肽的衍生物,即Cbz·leu·(S-Bz)cys·gly·ser·(im-Bz)his·leu·val·OCH_3曾用DCCI法依(3 4)途径,和叠氮法依(4 3)途径分别合成。两法所得产物的熔点、旋光等数据,完全—致。七肽酯及其中间体自由三肽和自由四肽,均分别用氨肽酶水解,释放出等当量的组成氨基酸,证明并无消旋氨基酸存在。     

板兰根中的氨基酸成份测定及其药用机理的探讨

<正> 板兰根(Isatis indigotica Fort)是一味常用的清热解毒中药,现在又常用其预防和治疗肝脏疾病,但其治疗肝脏疾病的有效成份和作用机理还不清楚。为此我们分析检测了板兰根中的氨基酸成份,并对其对某些疾病的作用机理进行探讨。一、材料、仪器及方法(一)材料板兰根生药,由南京军医总医院提供。(二)仪器日立835-50型高速氨基酸分析仪。(三)样品前处理及测试方法将板兰根生药低温烘干,粉碎,存放冰箱中待测。1.酸水解:称样30mg放入玻璃水解     

一种简易的picomole水平的氨基酸定量测定法

茚三酮显色法,是氨基酸分析仪最早使用和经常使用的检测方法,但是用此法检测,氨基酸分析仪,灵敏度通常限制在nanomole水平。Beckmen 121M和D-500型氨基酸分析仪的比色分析据称能在100p mol水平进行,但这已是灵敏度的极限。随着荧光技术的应用和发展,荧光检测技术与氨基酸分析仪相结合,与高效液相色谱相结合,使氨基酸、多肽和蛋白质的检测灵敏度达到Pmol水平。本文介绍一种简单易行的改进方法,即用邻苯二甲醛/β-巯基乙醇(OPA/ME)试剂代替     

梅花鹿鹿茸不同产品中氨基酸含量的比较

通过对二杠鹿茸、三杈鹿茸、鹿茸片、鹿茸血、鹿角、鹿角盘等鹿茸产品中氨基酸含量的测定研究,结果表明:鹿茸血中氨基酸含量最高,鹿茸片中的氨基酸含量次之,三杈鹿茸中的氨基酸含量高于二杠鹿茸中氨基酸含量,鹿花盘中的含量高于鹿角中的氨基酸含量,从而为鹿茸这一动物性中药材资源的功能评价、药理作用提供科学理论依据。     

新型氨基酸制剂对创伤大鼠血游离氨基酸的影响

观察了富含牛磺酸 (Tau)、谷氨酰胺 (Gln)以及高支链氨基酸 (HBCAA)的新型氨基酸制剂对创伤大鼠血中游离氨基酸浓度的影响。结果表明 ,创伤后三天起 ,血浆游离氨基酸总和均显著降低 ,对照组基本无改变 ;创伤后Tau、BCAA、精氨酸以及天冬氨酸等具有抗氧化和免疫调节作用的氨基酸含量明显降低 ,新处方使用一周后其浓度有效回升 ,且效果好于 17种氨基酸 ,从而有利于机体伤口的愈合。这些结果为进一步阐明复合氨基酸制剂促进创伤愈合的作用及其开发应用提供了理论依据     

猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2中和表位的定位及其免疫反应性分析

猪瘟病毒(CSFV)囊膜结构糖蛋白E2(gp55)是激发保护性免疫应答的主要抗原蛋白。E^ms和E2与细胞表面受体的相互作用介导病毒对细胞的感染过程。采用抗CSFV中和性单克隆抗体c24／10,淘选噬菌体展示的12肽随机肽库,结合噬菌体拟位免疫反应性分析结果,对CSFV E2蛋白中和表位进行定位。结果表明：F2蛋白的SPTTLR基序(832～837位氨基酸)构成CSFV特异性线性中和表位,基序的第一、二、三位氨基酸是表位与单克隆抗体c24／10结合所必需的氨基酸,也是表位的关键性氨基酸。     

北极狐GHR基因cDNA的克隆及序列分析

本文根据狗(AF133835)的GHR基因cDNA编码全序列设计了三对引物,利用RT-PCR方法克隆出北极狐GHR基因编码区全长cDNA序列(GenBank accession No.EU304325)。结果表明,北极狐GHR的ORF为1917bp,编码638个氨基酸的前体蛋白,由18个氨基酸的信号肽和620个氨基酸的成熟肽组成。通过同源性比较发现北极狐与狗的同源性最高,达到98%。另外,利用邻接法(NJ法)构建的分子系统进化树聚类结果表明,北极狐与狗先聚为一类,该聚类结果与传统的物种进化关系基本一致。另外,通过氨基酸对位序列比较发现,北极狐GHR在氨基酸序列上存在明显的特异性,如45和451位分别为A和E,而其它物种均分别为T(大鼠为K)和A(牛羊为V,鼠为T)。     

三种蜂王浆蛋白质的营养评价

采用国际上通用的营养价值评价方法,全面评价了中蜂王浆、意蜂王浆和卡蜂王浆蛋白质的营养价值。三种王浆的必需氨基酸含量分别占其氨基酸总量的42.88%,40.98%和42.72%,含硫氨基酸为第一限制氨基酸。蛋白质的化学评分(CS)、氨基酸评分(AAS)、必需氨基酸指数(EAAI)、生物价(BV)、营养指数(NI)和氨基酸比值系数分(SRCAA)计算结果表明,三种蜂王浆都是良好的蛋白源,但中蜂王浆蛋白质的营养价值高于意蜂王浆和卡蜂王浆,明显与常规品质评价指标10-HDA的含量高低顺序不同。     

其它药剂

881206使用偶联的转氨酶生产氨基酸〔专,英〕/Rozzell,J.D.IPCT Patent Appl.WO 8701727 Pub.26.03.87.APPI.US779157,filed 23.09.85〔译自CBA,1987,(6),2582〕 该发明提供了生产所需的a氨基酸或其衍生物的一种方法。使一种a氨基酸与二种a一酮酸在有二种转氨酶存在时产生反应,产生所需的a氨基酸和第三种a一酮酸。持续地从反应混合物中清除所产生的a一酮酸,使整个反应过程进行到底。(戴顺志)加1207绿脓杆菌E87Ag抗原、其单克隆抗体和杂交瘤[专,英〕/sawada,5.…了Eu.roPeanP。、tent人ppl.EP 0215131.Pub.25.03.87.入ppl.Jf〕46…     

鸭毛梗制备复合氨基酸工艺条件的研究

采用正交试验方法 ,研究了鸭毛梗水解制备复合氨基酸的工艺条件 ,结果表明 :温度 /压力是影响氨基酸转化率最主要的因素。鸭毛梗水解制备的复合氨基酸转化率盐酸法最高 (82 .36 % ) ,氢氧化钠法最低 (5 8.4 6 % ) ,硫酸法与盐酸法接近(79.4 4 % )。硫酸法产率较高 ,操作方便 ,环境污染和设备腐蚀均小 ,适合大量生产 ,确定为水解制备复合氨基酸介质 ,其最佳工艺条件为 :水解时间 8.0h ,硫酸浓度 3.0mol·L-1,水解温度 12 5℃。氨基酸分析表明 ,水解液中均含有 18种以上氨基酸。     

多刺蚁属细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ序列变异及其进化关系

从Gen Bank下载多刺蚁属26个不同种的细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ(COXⅡ)蛋白部分氨基酸序列进行分析,研究多刺蚁细胞色素C氧化酶亚基Ⅱ的氨基酸序列变异和系统进化关系。多刺蚁属种间存在氨基酸变异位点84个,占总氨基酸数目的 36%,而N端跨膜螺旋区氨基酸保守性最高。采用MEGA 4.0构建的邻接法(NJ)系统发育树表明:佛瑞尔刺蚁(Polyrhachis foreli)和甲胄刺蚁(Polyrhachis andromache)聚为一枝,双钩刺蚁(Polyrhachis bihamata)和叉形刺蚁(Polyrhachis ypsilon)聚为一枝,麦凯刺蚁(Polyrhachis mackayi)、澳洲刺蚁(Polyrhachis australis)和软毛刺蚁(Polyrhachis pilosa)三个种聚为一枝,这些种间亲缘关系较近;基于COXⅡ蛋白序列的系统发育关系分析与基于细胞色素b蛋白的系统发育关系既存在一致性,也存在一定的差异。多刺蚁属中序列变异度最大的4个种的COXⅡ对应的3D结构在螺旋和折叠排列方式上完全相同,表明多刺蚁属内COXⅡ序列变异并不影响其结构的形成。     

酵母 tRNA~(ala)密码子GpCpU的酶促合成

tRNA主要有两种生物学功能:一是接受(相应的氨基酸。二是将此氨基酸转移到多肽链中。在后一功能中,tRNA通过其反密码子同mRNA上相应的密码子形成互补碱基间的氢键配对,从而使氨基酸转移到由mRNA碱基顺序决定的多肽序列中。本工作合成酵母tRNA~(ala)密码子GpCpU,将用于测验该tRNA的转移活性,即检查该tRNA能否通过其反密码子3＇CpGpI5＇同已结合在核糖体上的密码子5＇GpCpU3＇形成氢键配对而实现转移丙氨酸的功能。迄今报道的关于制备寡核苷酸的方法,主要有三种:化学合成、酶解天然核酸和酶促合成。本工作用最后一种方法,用RN_(ase)N_1和     

氨基酸输液的临床选择

<正> 氨基酸输液的品种繁多,各种品种在临床上用途有所不同,如果使用不当,可能导致毒副反应。为了能正确使用、本文从临床角度综述讨论氨基酸输液的选择。把国产和国内使用的几种进口氨基酸输液分为:一、营养用氨基酸注射液;二、代血浆氨基酸注射液;三、肝病甲氨基酸注射液;四、肾病用氨基酸注射液;五、止血用氨基酸注射液;六、小儿用氨基酸注射液等六类进行讨论。并对氨基酸注射液的命名作一简单介绍。