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人肝金属硫蛋白-I_A基因在鱼腥藻中的克隆与表达 总被引:2,自引:0,他引:2
将人工合成的人肝金属硫蛋白(metalothionein,简称MT)-IA基因插入至中间载体pRL-439上强启动子psbA后,再将其与穿梭载体pKT-210相连,得到大肠杆菌-蓝藻穿梭表达载体pKT-MT,用三亲接合转移法将pKT-MT转入丝状体蓝藻-鱼腥藻7120,经链霉素筛选,得到了稳定的转人肝MT-IA基因鱼腥藻.纯化单藻落,液体扩大培养.从鱼腥藻中提取的质粒经Southern印迹分析,确定人肝MT-IA基因已转入鱼腥藻7120中,Western印迹分析表明,金属硫蛋白在转人肝MT-IA基因鱼腥藻中得到了表达.经原子吸收光谱法测定表达量约为700μgMT/g鲜藻,重金属耐受性实验表明,得到了能耐受重金属-镉的转人肝MT-IA基因鱼腥藻,它将在清除水域中重金属污染和医药研究方面发挥重要作用. 相似文献
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TAI系列I中的冰草染色体与小麦部分同源关系的同工酶研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本文分析了TAI系列I及其亲本的胚乳氧化物酶,苹果酸脱氢酶,醇脱氢酶,酸性磷酸酶和碱性磷酸酶的酶谱表型。把冰草同工酶结构基因Mdh-Ag^i2定位一TAI-13,基因Cpxe-Ag^i2定位到TAI-14,基因Adh-AG^I1,Acph-Ag^i2和Phe-Ag^i2定位到TAI-16中的冰草染色体上。根据这些基因定位和我们以前的研究工作,结合植株表型分析,推测TAI-11,TAI-12,TAI 相似文献
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用PCR方法从pPAIJ.7中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)基因,与pPUC18重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人PAI-2基因.PAI-2基因与表达载体pPIC9重组,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115宿主菌,经表型筛选和PCR扩增筛选阳性克隆,用甲醇诱导表达,重组PAI-2以分泌型表达,占分泌总蛋白的30%,具PAI-2抗原性,与低分子量尿激酶形成了抗SDS复合物,具抑制纤溶的活性(91.4AIU/ml).对培养条件也进行了探讨. 相似文献
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HLA—A2分子生物学研究进展 总被引:8,自引:0,他引:8
任素萍 《国外医学:分子生物学分册》1999,21(3):170-174
HLA-A2是发现最早、在人群中携带频率最高、呈高度多态性的I类分子。目前已发现有30个基因亚型。现已弄清了HLA-A2的立体结构,属于免疫球蛋白基因超家族成员,通过与抗原肽、TCR、KIR、CD8等多种分子相互作用,参与复杂的免疫应答及调控。本文就HLA-A2的多态性、分布、结构及功能等方面的最新研究进展加以综述。 相似文献
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载脂蛋白多基因家族分子进化的研究 总被引:2,自引:2,他引:0
与脂质运输有关的载脂蛋白基因构成一个复杂的多基因家族。为探讨这种演化时间长的基因家族的进化规律,本文首先建立了一种在非均衡进化速率条件下计算系统发生树中任意分支长度的简易方法,并可在此基础上算出无根分支系统树中分歧年代的期望值。进一步对本文科10个种属共26种载脂蛋白的系统演作作了实际分析,结果提示:①ApoA-I'ApoA-IV,ApoE及ApoA-II的共同祖先可能在奥陶纪水生脊椎动物中就已存 相似文献
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载脂蛋白A-I是一种重要的血浆蛋白,其基因表达具有明显的组织特异性、种属特异性和发育阶段桃煨浴ApoA-I基因5’调控区的肝细胞特异性增强子等顺式作用元件同ARP-1、HNF-4、RXRa等反式作用因子相作用,调控该基因的特异性表达。 相似文献
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马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗gag基因的序列测定及分析 总被引:2,自引:0,他引:2
以马传染性贫血病毒(ELAV)驴白细胞弱毒疫苗株(DLA)病毒基因组RNA为材料,用RT-PCR方法扩增出EIAV gag基因,以平端针其克隆到质粒载体pUC19中,由于疫苗不是克隆株,因此通过5次单独克隆与测序,推导出EIAV-DLA gag基因的优势序列。gag基因全长1458个碱基,编码一486个氨基酸残基的前体蛋白。与美国EIAV Wyoming1369株比较,核苷酸同源性为80%,氨基酸 相似文献
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人I型胶原基因第一内含子调节转录的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
人I型胶原α1(I)链(COLIA1)基因内含子序列在不同细胞内有不同的转录调节活性,报道了含人COLIA1基因内含子I不同区段(+544~+855和+820~+1093)的重组质粒pSCEP-CAT和pSCIP-CAT的构建并转染人胚肌腱成纤维细胞和Tca8113舌癌细胞,地高辛标记抗CAT-ELISA检测结果显示:pSCEP-CAT在两种细胞均获表达;pSCIP-CAT在人成纤维细胞未表达,但 相似文献
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鲑鱼胰岛素样生长因子I cDNA在镜鲤中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
通过显微注射技术,将冠以鲤鱼β-肌动蛋白基因(CA)启动调控顺序的鲑鱼胰岛素样生长因子I(sIGF-I)的cDNA,即CAsIGFc注入镜鲤受精卵内,经聚合酶链式反应(PCR)技术检测,受本胚胎发育各期均携有外源基因拷贝。 相似文献
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为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAL-1抗性的新型t-PA溶栓剂,利用基因重组及定位突变技术构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44~Ser50置换为纤粘蛋白Ⅰ型F区间连接序列GluSerLysProGluAlaGluGlu的t-PA组合突变体FrGGI,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达。对表达产物的生物学特性分析表明,FrGGI在大鼠血浆中的半衰期延长了15倍,并获得了PAI-1抗性,是一株很有希望的新型溶栓剂候选株。 相似文献
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为了获得半衰期延长,特异活性提高及具有PAI-1抗性的新型t-PA溶性剂,利用基因重组及定位突变技术构建了t-PA的K1、K2区糖基化位点消除,PAI-1结合位点缺失,F与E区连接序列His44 ̄Ser50置换为纤粘蛋白I型F区间连接序列Glu Ser Lys Pro Glu Ala Glu Glu的t-PA组合突变体FrGGI,并在中国仓鼠卵巢细胞中获得了高效表达,对表达产物的生物学特性分析表明 相似文献
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利用人工全合成人胰岛素样生长因子工(hIGF-I)基因,构建了分别以β-半乳糖苷醇(β-gal)的三种即含590、310、280个氨基酸序列片段和一种以ProteinA的B、C结构域(PABC)为载体蛋白的融合型表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达了以上各种hIGF-I的融合蛋白产物。通过对羟胺裂解前后的hIGF-I产物进行放射免疫结合测定分析,结果显示以β-Gal690、310、280为载体蛋白,均严重影响与其融合的hIGF-I的免疫原性结构形成,但在PABC-hIGF-I融合蛋白中,载体蛋白PABC无明显的影响作用。这表明在高融合表达低分子量蛋白或肽段中,需选择适宜的载体蛋白,以利于目的产物的功能性结构形成。 相似文献
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细胞因子基因导入人肿瘤细胞的方法及鉴定 总被引:5,自引:0,他引:5
从人外周血单核细胞中抽提总RNA为模板,分别用5‘含EcoRⅠ3含BamHI限制性酶切位点的细胞因子基因特异引物成含信号肽全长IL-2,γ-IFN及α-TNFcDNA。然后将这些细胞因子cDNA分别重组入含筛选标记基因Neo逆转录病毒载体LXSN中,采用磷酸钙共沉淀法转染逆转录病毒包装细胞系PA317。分别收集到含IFN-γ,TNF-α和IL-2基因的缺陷型逆转录病毒上清及只具空白载体质粒pLXS 相似文献
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鸡传染性支气管炎病毒免疫原基因cDNA的克隆和序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
从含有鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的鸡胚尿囊液中快速提取病毒RNA,得到约23kb全长IBV RNA。运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)得到1.72kb编码全长IBV免疫原糖蛋白S1的基因片段。进一步将此基因片段插入到质粒pUC19中,进行全长片段的序列分析。结果表明,IBV北京株和Beaudette株的核酸同源性为97.8%,与M41株的核酸同源性达98.5%。 相似文献
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胆固醇逆转运相关蛋白基因在骨骼肌的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
构建载脂蛋白AI(apoAI)、载脂蛋白E(apoE)和卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的病毒或非病毒载体,分别转染离体成肌细胞或直接注入小鼠骨骼肌,观察其表达程序及分泌人血等情况,探讨借用骨骼肌异源表达这些在胆固醇逆转运中起关键作用的重要候选基因,进而发展一种简易安全基因治疗方法的可能性。结果显示,质粒表达载体pCMVapoE3和重组腺病毒载体Ad-RSV-apoAI在原代培养小鼠成肌细胞和成 相似文献
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纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)是组织型纤溶酶原激活物(t-PA)和尿型纤溶酶原激活物(u-PA)的特异性抑制剂。对PAI-1分子的结构与功能的认识,有助于了解PAI-1作用的机理。本综述了近年来对PAI-1蛋白分子结构与功能研究的进展,介绍了PAI-1分子中一些区域的作用以及影响PAI-1抑制活性的一些因子。 相似文献
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本文报道用抗PAI-1单克隆抗体(McAb)亲和层析建立了纯化PAI-1的简便方法。经免疫亲和层析,SephacrylS200凝胶过滤,从HepG2细胞培液中分离到糖基化和非糖基化两种形式的PAI-1,回收率为84%,PAI-1比活性6.1×104IU/mg。糖基化PAI-1分子量为50kD,比活性5.8×104IU/mg。非糖基化PAI-1分子量43kD,占总PAI-130%,仍具有PAI-1活性。用ConA-Sepharose亲和层析进一步纯化得到SDS-PAGE纯的糖基化PAI-1。 相似文献
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t—PA cDNA基因转移与基因治疗 总被引:2,自引:0,他引:2
组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)能够特异、高效地溶解血栓,在纤溶系统中起着重要作用,t-PA与其抑制物(PAI)平衡失调,可导致多种疾病的发生。基因转移技术使外源t-PA cDNA成功地在血管内皮细胞中得以表达,为防治以血栓形成为主要病理变化的血管性疾病开辟了广阔的前景。 相似文献