一种新的免疫—PCR系统的建立和应用研究

把ＰＣＲ技术作为指示系统引入免疫检测中,建立了免疫－ＰＣＲ技术。在本研究中,以ＰＥＩ作交联剂,首次成功地将特异性抗体直接与ＤＮＡ交联,构建了三种Ａｂ－ＤＮＡ基因探针,组成新的免疫－ＰＣＲ检测系统。此三种特异性Ａｂ－ＮＤＡ探针可用于检测三种相应抗原。检测ＨＳＡ抗原的最低含量可达１０＾－１８ｍｇ／ｍｌ,灵敏度比ＥＬＩＳＡ高１０＾６倍。     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲胎蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。以链酶亲合素搭桥将生物素标记的抗体与ＤＮＡ相连建立了免疫ＰＣＲ技术,并将其用于检测甲胎蛋白（ＡＦＰ）,其敏感性比ＥＬＩＳＡ法高１０４。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断     

应用循环逆转录PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA

循环逆转录（ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ,ＣＲＴ）是线性增长逆转录ｃＤＮＡ产量的一种新技术。为了将该技术用于检测ＨＣＶ ＲＮＡ,通过改变ＣＲＴ的循环次数,结合竞争ＰＣＲ,作出标准曲线。采用１６次ＣＲＴ加３４次循环ＰＣＲ检测了１３６例ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ阳性、５４例ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ阴性和１０８例临床可疑病人全血标本,并与逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）和巢式ＰＣＲ（     

表达流行性感冒病毒血凝素蛋白的重组腺病毒的构建

用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增流感病毒血凝素基因,将其克隆到５型腺病毒载体质粒ｐＡＤ５Ｃ中。用此质粒与ＥｃｏＲＩ酶切回收的５型腺病毒基因组片段共转染２９３细胞,通过ＰＣＲ初步筛选得到重组病毒。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳、Ｗｅｓｔ－ｅｒｎ ｂｌｏｔ重组病毒能表达流感病毒的血凝素蛋白。此重组病毒经滴鼻免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠,ＥＬＩＳＡ实验证明能诱导小鼠产生针对流感的循环抗体ＩｇＧ和分泌型抗体ＩｇＡ。本实验证明,利用Ｅ     

免疫聚合酶链反应技术的建立及其对甲脂蛋白的检测

免疫ＰＣＲ是一种新的具高敏感性的抗原检测技术,它类似传统的ＥＬＩＳＡ法,若与抗体连接的酶用ＤＮＡ片段代替,则该ＤＮＡ片段可用于ＰＣＲ扩增。因此,免疫ＰＣＲ有可能作为一种具高敏感性的检测手段用于临床早期诊断。     

植物抗寒剂CR－4在玉米上的应用效果初报

植物抗寒剂ＣＲ－４在玉米上的应用效果初报韦绍力（广西忻城县古蓬种子站,５４６２０６）ＡＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＲＥＳＵＬＴＳＯＦＴＨＥＣＯＬＤ－ＲＥＳＩＳＴＥＲＣＲ－４ＡＰＰＬＩＥＤＴＯＭＡＬＺＥＣＵＬＴＵＲＥ￥ＷｅｉＳｈａｏ－ｌｉ（ＧｕｐｅｎｇＳｅｅ...     

点突变的基因诊断方法的进展

本概述了近年来有关点突变用于疾病诊断的方法的原理和应用，着重介绍有关等位基因特异性扩增（ＡＳＡ）、连接酶链式反应（ＬＣＲ）、ＰＣＲ－ＥＬＩＳＡ法、直接测序法（ＤＳ）等的有关进展，并对各方法之优缺点进行了综合评价分析，以指导合理选用。     

肾综合征出血热病毒基因检测及分型的研究

根据流行于我国的两型ＨＦＲＳＶ代表株汉滩型７６１１８株及汉城型Ｒ２２株Ｍ节段的核酸序列,设计两型共同引物,建立了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法,检测３９株从不同地区、不同宿主分离的ＨＦＲＳＶ感染鼠脑及细胞培养物;同时还建立了捕捉ＥＬＩＳＡ法（ｃＥＬＩＳＡ）,检测了３９株中的３６株,每份样本设复孔,以Ｐ／Ｎ≥２．１０且Ｐ－Ｎ≥０．１０者判为阳性。ＲＴＰＣＲ及ｃＥＬＩＳＡ两法的检出率分别为９７．６％与８２．４％,二者符合率８４．６％。此外,对ＲＴＰＣＲ产物进行酶切分型,３８份扩增产物中的１５份可被ＡｌｕＩ切开。根据所获酶切图谱的差异,可分为汉滩型及汉城型两型,显示了酶切分型的潜在价值     

转基因烟草表达霍乱毒素B亚单位的研究

将霍乱毒素Ｂ亚单位（ＣＴＢ）基因克隆到质粒ｐＢｉｎ４３８中,分别构建植物表达载体ｐＢＩ－ＣＴＢ、ｐＢＩ－ＳＰＣＴＢ和ｐＢＩ－ＣＴＢＥＲ。采用叶盘法分别转化烟草Ｋ３２６,各表达载体得到了一批较基因植株。转基因烟草的ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ分析表明ＣＴＢ基因整合到了烟草基因组中。转基因植株的ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析表明ｐＢＩ－ＳＰＣＴＢ和ｐＢＩ－ＣＴＢＥＲ的转基因植株能有效表     

球形幽门螺杆菌分子生物学研究

为研究幽门螺杆菌（ＨＰ）球形变异本质,作者通过延期培养和采用亚抑菌浓度抗生素,使３株ＨＰ发生球形变异,对弯曲形和球形ＨＰ作了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、免疫印迹及４个毒力基因片段ＰＣＲ和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱显示球形ＨＰ分子量在７４×１０４以上的蛋白含量减少,免疫印迹显示球形ＨＰ１２５×１０４蛋白条带反应减弱,而抗生素诱变的球形ＨＰ分子量为１１×１０４和６３×１０４的蛋白条带反应增强。ＰＣＲ及ＰＣＲ－ＳＳＣＰ结果表明球形ＨＰ的ｈｐａＡ,ＶａｃＡ,ＣａｇＡ和ＵｒｅＡ４个毒力基因片段未发生缺失,但在ｈｐａＡ或ＶａｃＡ基因中存在点突变     

网箱养鲤高产技术研究初报

网箱养鲤高产技术研究初报郭大民,卢自银,于仕彬,季荣岭（北京市水产总公司,１０１５１２）关键词网箱养鲤,高产技术ＰＲＥＬＩＭＩＮＡＲＹＲＥＰＯＲＴＯＮＨＩＧＨ－ＹＩＥＬＤＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳＯＦＣＡＲＰＣＡＧＥＣＵＬＴＵＲＥ￥ＧｕｏＤａｍｉｎ;ＬｕＺ...     

河南紫荆属订正

河南紫荆属订正朱长山，李学德（河南农业大学，郑州４５０００２）（郑州师范学校，郑州４５００５２）ＡＲＥＶＩＳＩＯＮＯＦＣＥＲＣＩＳＦＲＯＭＨＥＮＡＮ￥ＺＨＵＣｈａｎｇ－Ｓｈａｎ；ＬＩＸｕｅ－Ｄｅ（ＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ...     

植物抗寒剂的不同使用方式在早稻和晚稻上的应用效果

植物抗寒剂的不同使用方式在早稻和晚稻上的应用效果李志高（湖北省洪湖市农科所,４３３２００）ＴＨＥＥＦＦＥＣＴＳｏＦＴＨＥＣＯＬＤ－ＲＥＳＩＳＴＥＲＡＰＰＬＩＥＤＩＮＥＡＲＬＹ－ＲＩＣＥＡＮＤＬＡＴＥ－ＲＩＣＥＣＵＬＴＵＲＥＷＩＴＨＤＩＦＦＥＲＥＮＴＭ...     

用毛细管电泳技术检测DNA点突变

毛细管电泳(ＣＥ)是90年代初发展起来的新技术,具有分辨率高、重现性好、灵敏度高、快速和易于实现自动化的特点。后来又发展了激光诱导荧光检测器(ＬＩＦ),大大提高了分析灵敏度,对微量样品如单细胞分析等,具有很大的优势。通常,利用ＣＥ技术可以在20ｍｉｎ内分析完成几千个碱基的ＤＮＡ片段。ＣＥ可以应用于ＤＮＡ点突变的检测,目前在ＰＣＲ基础上利用ＣＥ技术对ＤＮＡ已知点突变及未知点突变的检测发展十分迅速。1.已知点突变的检测1.1　扩增抗拒突变系统ＰＣＲ(ＡＲＭＳＰＣＲ)和短串联重复ＰＣＲ(ＳＴＲＰＣＲ)　　ＡＲＭＳＰＣＲ和Ｓ…     

抗寒剂CR－4在桂北地区早稻育秧中的应用试验

抗寒剂ＣＲ－４在桂北地区早稻育秧中的应用试验陈宏彬,秦佑次,徐年德（桂林市郊区农牧渔业局５４１００１）ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＴＨＥＣＯＬＤ－ＲＥＳＩＳＴＥＲＣＲ－４ＡＰＰＬＩＥＤＦＯＲＥＡＲＬＹ－ＲＩＣＥＳＥＥＤＬＩＮＧＣＵＬＴＵＲＥＩＮＴＨＥＮＯＲＴＨ...     

西藏禾本科植物新分类群与新记录种

西藏禾本科植物新分类群与新记录种赵南先,李名非（安徽省生物研究所,合肥２３００３１）ＮＥＷＴＡＸＡＡＮＤＮＥＷＲＥＣＯＲＤＩＮＧＳＰＥＣＩＥＳＯＦＧＲＡＭＩＮＥＡＥＦＲＯＭＴＩＢＥＴ￥ＺＨＡＯＮａｎ－Ｘｉａｎ;ＬＩＭｉｎｇ－Ｆｅｉ（ＡｎｈｕｉＩｎｓｔ...     

PCR—ELISA在检测血清中丙型肝炎病毒上的应用

建立了一个替代目前使用的套式ＰＣＲ的血清中丙型肝炎病毒ＲＮＡ检测的新方法,该方法只需经过一次ＰＣＲ扩增,即可通过对掺入标记物的ＰＣＲ产物的ＥＬＩＳＡ检测得到与套式ＰＣＲ相同的结果。与套式ＰＣＲ相比,该方法具有耗时少、易操作、较少产生假阳性等特点。     

r－干扰素对喉癌细胞系HEP－2HLA－DR抗原和增殖细胞核抗原表达的影响

本实验用人重组ｒ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ）作用ＨＥＰ－２细胞后ＨＬＡ－ＤＲ抗原和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的检测来探讨ｒ－干扰素对ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体ＣＲ３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ）和Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ）。以链霉素一生物素技术（ＬＳＡＢ）检测ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原和ＰＣＮＡ表达,结果显示：ｒ－ＩＥＮ诱导ＨＬＡ－ＤＲ抗原和抑制ＰＣＮＡ表达其强弱与ｒ－ＩＦＮ剂量有关。资料提示：ｒ－ＩＦＮ不仅对ＨＥＰ－２细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。     

人GM—CSF cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达

从诱导的人胚肺细胞ＨＦＬ株中提取总ＲＮＡ．经ＲＴ－ＰＣＲ反应获取了人ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ,ＤＮＡ序列测定表明其顺序与文献报道完全一致。为了获得高效表达,应用ＰＣＲ改造了人ＧＭ－ＣＳＦ的ｃＤＮＡ５’端核苷酸序列,并将改造的人ＧＭ－ＣＳＦ基因插入含Ｔ７启动子的质粒ｐＥＴ－１１ｄ构建成表达质粒ｐＥＴＣ－５,将此质粒转化大肠杆菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）得到表达菌株ＢＬＥＣ４。表达菌株用０．５ｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导２小时后,产生大量重组蛋白并形成包涵体。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳图谱扫描结果表明,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ产量占菌体总蛋白量的１６％。ＥＬＩＳＡ和ＴＦ－１细胞培养测定表明,初步纯化和复性的ｒｈＧＭ－ＣＳＦ具有天然的ｈＧＭ－ＣＳＦ生物活性。     

水稻草矮病毒血清学和分子检测方法的比较

将间接ＥＬＩＳＡ、非放射性分子杂交和ＲＴ－ＰＣＲ三种方法应用于水稻草矮病毒（ＲＧＳＶ）的检测。结果表明,利用自制的融合蛋白ＧＳＴ－ＮＣ的抗血清检测ＲＧＳＶ的灵敏度为１ｍｇ鲜重的病株叶片或８４ｎｇ提纯病毒,利用地高辛（ＤＩＧ）标记的ＤＮＡ探针ＮＣ的点杂交方法检测ＲＧＳＶ的灵敏度为５０μｇ病叶或６ｎｇ病毒,而ＲＴ－ＰＣＲ的检测灵敏度则为１０μｇ病叶或２ｎｇ的病毒,对上述三种方法的灵敏度和可操作性也进行