p53基因mdm2基因在肿瘤细胞中的相互调控作用

ｍｄｍ２（ｍｕｒｉｎｅ－ｄｏｕｂｌｅ ｍｉｎｕｔｅ２）最初是在一种可致瘤的小鼠在纤维细胞中发现的。该基因编码一种锌指蛋白,可与Ｐ５３蛋白酸性活化区结合,抑制Ｐ５３介导的转录活性阻止Ｐ５３诱导凋亡的作用。Ｐ５３基因是一种重要的抑癌基因,该基因编码一种ＤＮＡ结合磷蛋白,在调节细胞增殖和促进细胞凋亡过程中起着重要的作用。Ｐ５３也可调节ｍｄｍ２基因的表达。ｐ５３蛋白水平的升高级相应剌激ＭＤＭ２蛋白水平的升     

人乳腺癌MCF-7细胞系凋亡过程中bcl-2基因的结合蛋白

 Ｍ Ｃ Ｆ ７ 是 ｐ５３ 为野生型的人乳腺癌细胞系．为探讨该细胞系凋亡过程中 ｂｃｌ ２ 基因的下调机制,以 ５ 氟尿嘧啶（５ Ｆｕ）诱导凋亡,用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术扩增出人 ｂｃｌ ２（ｈｂｃｌ ２）基因调控区长度为 ５５８ｂｐ 的片段,经亚克隆后的序列分析证实其准确性．用此 Ｐ Ｃ Ｒ 产物作为探针与 ５ Ｆｕ 刺激 １２ ｈ 后的 Ｍ Ｃ Ｆ ７ 核内蛋白质粗提物进行 Ｓｏｕｔｈｗ ｅｓｔｅｒｎ 印迹及凝胶阻滞（ Ｅ Ｍ Ｓ Ａ）分析．以未用 ５ Ｆｕ 刺激者为对照．结果显示,细胞核内一分子量为 ５３ ｋ Ｄ 的结合蛋白与 ｂｃｌ ２ 调控区的结合信号明显增强,而一种２０ ｋ Ｄ 的 Ｄ Ｎ Ａ 结合蛋白与该区的结合信号明显减弱．这些结果提示ｐ５３ 蛋白有可能是ｂｃｌ ２ 的负转录因子,２０ ｋ Ｄ 的 Ｄ Ｎ Ａ 结合蛋白有可能是ｂｃｌ ２ 的正转录因子．     

利用恒溶氧—补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组人骨形成蛋？…

对表达人骨形成蛋白－２Ａ的重组大肠杆菌ＹＫ５３７／ｐＤＨ－Ｂ２ｍ在５００ｍｌ摇瓶中进行了培养条件的摸索实验,继后用５Ｌ自控发酵罐进行分批培养和分批补料培养,以获取ｒｈＢＭＰ－２Ａ。两种培养方式结果结果比较表明,在培养过程中保持３０％－４０％左右的溶２解氧和限制性流加葡萄糖可以使ＢＭＰ－２Ａ的含量达到２．７８ｇ／Ｌ,最终菌体密度为ＯＤ６００５３,重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的２５％。     

BMP—2和BMP—4基因结构及调控的研究进展

ＢＭＰ－４基因组包括５个外显子,不同组织来源的ＢＭＰ－４ＣＤＮＡ采用不同的启动子,ＢＭＰ－４基因上有ＣＯＵＰ－ＴＦ１的调节作用位点。ＢＭＰ－２基因组有２个外显子,不同组织来源的ＢＭＰ－２ＣＤＮＡ亦采用不同的启动子,ＢＭＰ－２基因上有Ｐ５３的作用位点。     

扁蓿豆体细胞胚的诱导和植株再生

扁蓿豆实生苗的根、下胚轴、子叶、叶片和叶柄外植体,在含２,４—Ｄ２—０．２５ｍｇＬ－１与ＫＴ０．２５－２ｍｇＬ－１及２,４—Ｄ０．５ｍｇＬ－１与ＺＴ０．５ｍｇＬ－１或ＢＡＰ０．５ｍｇＬ－１与ＮＡＡ０．０５ｍｇＬ－１的ＭＳ琼脂培养基上均可产生愈伤组织．愈伤组织在含２,４—Ｄ０．５—０．１ｍｇＬ－１与ＫＴ０．５—０．１ｍｇＬ－１或ＢＡＰ０．２５＋ＮＡＡ０．０５ｍｇＬ－１的ＭＳ培养基上可诱导分化出体细胞胚．体细胞胚在无激素的培养基上发育成完整植株．用海藻酸钠包襄体细胞胚制成人工种子,其发芽率和植株转换率分别为９５％和５３％．     

兔2‘,5’—寡聚腺苷酸合成酶的诱导形成

通过对兔血细胞内２‘,５’－寡聚腺苷酸合成酶诱导形成的研究,发现聚肌苷酸与聚胞苷酸双链复合物只能诱导单核型细胞产生２‘,５－ＯＡＳＥ,而新城疫病毒（ＮＤＶ）、红细胞生成素（ＥＰＯ）可同时刺激ＰＢＭＣ和总红细胞中２’,５‘－ＯＡＳＥ的上升。实验证明总红细胞中２’－５‘－ＯＡＳＥ定位于网织细胞中,苯肼、ＮＤＶ和ＥＰＯ引起总红细胞中２’,５‘－ＯＡＳＥ活性的增加与外周血中网织细胞的增加有直接关系。注射ｐ     

乳酸脱氢酶C4的精子免疫荧光定位特性

用１４个抗小鼠ＬＤＨ－Ｃ４的单克隆抗体对小鼠、树鼯和人精子的ＬＤＨ－Ｃ４进行了间接免疫荧光定位。结果显示：不同的单抗可以结合到小鼠精子表面不同的位置，其中ＰＡ１（Ｋ０２１）在尾部，ＰＡ２（Ｋ０２２）、ＰＡ４和ＰＡ５（Ｋ０２３）在中段和尾部，ＳＭ１、ＳＭ２和ＰＧ２的中段，ＳＭ３和ＳＭ４在顶体，ＳＭ５在顶体和赤道板。人和树鼯精子表面的ＬＤＨ－Ｃ４也呈现类似的情况。这些研究表明精子表面的ＬＤＨ－Ｃ４呈现     

GST融合蛋白在杆状病毒系统中表达的可溶性研究

将构建好的可表达ＧＳＴ融合蛋白的重组病毒ＡｃＭＮＰＶ－ＯＣＣ＾－－ＧＳＴ－６ｘＨｉｓ－Ｅｔｐ２８感染Ｓｆ９细胞,一定时间后取感染了病毒的细胞裂解物上清液进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,结果显示５３ｋＤａ的融合蛋白（ＧＳＴ－６ｘＨｉｓ－Ｅｔｐ２８）呈不溶状态。在原有裂解液的基础上,加固体十二烷基肌氨酸钠致终浓度１．５％,并将Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ－１００的比例由１％提高到２％。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示至少有１／     

小鼠成纤维细胞凋亡过程中P53与bcl-2表达的时序性

为探讨细胞凋亡过程中,ｂｃｌ－２与Ｐ５３,这两种凋亡关键性基因的相互关系,用５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）诱导小鼠正常与恶性转化的成纤维细胞的凋亡,观察了这两种基因在凋亡过程中表达变化的时序．经流式细胞计检测,这两种细胞在５－Ｆｕ作用２４ｈ均出现了凋亡峰,细胞存活率随之下降,ＤＮＡ电泳显现梯状断裂．Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果显示,在５－Ｆｕ作用６ｈ后两种细胞Ｐ５３ｍＲＮＡ水平已明显增高,而ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ水平则在作用１２ｈ方明显降低．Ｐ５３上调与ｂｃｌ－２下调的明显时序性,说明Ｐ５３具备作为ｂｃｌ－２基因负调控转录因子的条件．由此,为进一步了解凋亡过程的ｂｃｌ－２基因下调机理提供了线索     

湖南尖吻蝮蛇毒两个出血毒素的纯化和理化性质

经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶过滤,ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－５０和ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－２５离子交换层析的步骤,从湖南产尖吻蝮（Ｄｉｅｎａｇｋｉｓｔｒｏｄｏｎａｃｕｔｕｓ）蛇毒中纯化出两个出血毒素（ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２）．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得分子量均为２３．５ｋＤ,ＩＥＦ－ＰＡＧＥ测得等电点分别为５．６和５．２,两者具有相似的氨基酸组成,其中酸性氨基酸（Ａｓｘ,Ｇｌｘ）分别占２３％和２４％,ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最小出血剂量（ＭＨＤ）分别为０．５μｇ和０．８μｇ。都具蛋白水解酶活性,无对ＴＡＭＥ,ＢＡＥＥ的水解活性和ＰＬＡ２酶活性．两者的蛋白水解酶活力与出血活性并非正相关．ＤａＨＴ－１和ＤａＨＴ－２的最适温度分别为３５℃和４０℃,最适ｐＨ为６－９,对热均不稳定,温度高于６０℃活性完全丧失。金属离子的分析显示每摩尔毒素蛋白约含０．５ｍｏｌ的Ｚｎ,１ｍｏｌ的Ｃａ,较多的Ｎａ、Ｋ、Ｍｇ,不含Ｃｏ。     

脑星形胶质瘤基因表达及其与临床病理的关系

采用原癌基因Ｂｃｌ－２、Ｐ２１及抑癌基因Ｐ５３、Ｒｂ蛋白４种抗体,用ＡＢＣ免疫组织化学方法对４０例脑星形胶质瘤组织作免疫组化染色．结果发现：Ｂｃｌ－２及Ｐ５３基因表达在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中阳性率有显著性差异,而且染色强度也有明显差异．Ｐ２１、Ｒｂ基因表达在Ⅰ～Ⅳ级胶质瘤中呈上升趋势,但仅在Ⅰ～Ⅲ级、Ⅰ～Ⅳ级之间有明显差异．可以认为：Ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｐ２１、Ｒｂ在胶质瘤的发生中发挥一定的作用,尤其是Ｂｃｌ－２、Ｐ５３基因,这些基因蛋白的表达与胶质瘤恶性程度有关．测定胶质瘤中的Ｂｃｌ－２、Ｐ５３、Ｐ２１、Ｒｂ蛋白对于胶质瘤的诊断、鉴别诊断以及判断肿瘤的恶性程度与预后均有一定意义．     

小麦高分子量麦谷蛋白亚基分离方法的研究

小麦高分子量麦谷蛋白亚基（ＨＭＷ－ＧＳ）与小麦面包烘烤质量和面粉的加工特性密切相关,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ是其常用的分离方法之一。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ方法一般分为２类：第一类采用１１％和５％浓度的胶,后者用于分离２亚基和２＾＊亚基,该种方法常使用碱性提取液,需要２次电泳过程,且在５％浓度的胶中ＨＭＷ－ＧＳ易于和麦醇蛋白混淆;另外一类ＳＤＳ－ＰＡＧＥ采用梯度胶,配合使用银染方法,制梯度胶则使用梯度仪及磁力搅拌     

p53和c-myc异常表达与胃癌细胞多药耐药性关系的研究

应用ＳＡＢＣ免疫组织化学方法研究６７例胃标本中ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ的表达与多药耐药性（ＭＤＲ）的关系。结果显示本组胃癌中ｐ５３阳性３２例,阳性率４７．８％;ｃ－ｍｙｃ阳性３７例,阳性率５５．２％;Ｐ－ｇｐ阳性３９例,阳性率５８．２％。ｐ５３的异常表达与ｍｄｒ－１基因表达呈显著正相关（ｒ＝０．６３,Ｐ＜０．０５）,而ｃ－ｍｙｃ和ｍｄｒ－１的表达无明显相关。提示ｐ５３异常表达可增加ｍｄｒ－１基因的表达,从而使胃癌细胞获得ＭＤＲ表型     

人胃癌细胞系中P53抑癌基因变异的检测及其序列分析

Ｐ５３抑癌基因由于点突变,缺失或易位等方式而丧失活性是多种瘤发生发展的重要机理之一。本文应用聚合酶链式反应－－单链构锡多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）方法,对四种人胃癌细胞系ＭＧＣ８０３,ＢＧＣ８２３,ＧＣ７９０１和ＰＡＭＣ－８２中Ｐ５３基因的第５、６、７、８四个外显子进行检测,结果发现,ＰＡＭＣ－８２的第５第第８外显子,ＧＣ７９０１的第６外显子存在突变,ＰＣＲ－直接测序证明,它们分别在１７４位、２     

DAKO-M1在胃癌组织表达的免疫组织化学研究

对９５例胃癌组织进行ＤＡＫＯ－Ｍ１（ＤＡＫＯ－ＣＤ１５）表达的免疫组织化学研究。结果发现,ＤＡＫＯ－Ｍ１在胃癌中的阳性率（８６．３％）显著高于癌旁粘膜和正常胃粘膜（Ｐ＜０．０５和０．００５）。其定位分布有３种类型：即腺腔缘型（Ａ型）、胞膜型（Ｍ型）和胞浆型（Ｃ型）。胃非肿瘤性粘膜组织仅为Ａ型。胃癌３型兼有,高分化癌Ａ型（１８．２％）和Ｍ型（６１．４％）均显著高于低分化癌（Ｐ值均＜０．００５）;低分化癌和粘液癌Ｃ型（各占７２．０％和５３．８％）均显著高于高分化癌（２０．５％）,Ｐ＜０．００５和０．０２５。ＤＡＫＯ－Ｍ１Ｃ型和Ｍ型淋巴结转移率（分别为９７．１％和６９．２％）均显著高于Ａ型（３３．３％）者,Ｐ＜０．００５和０．０５。结果提示,ＤＡＫＯ－Ｍ１是判断胃癌分化水平、恶性程度及预测淋巴结转移的一种有用标志物     

TGF—β家族信号的细胞内传导蛋白：MAD蛋白家族

ＳＭＡＤｓ是新近发现的参与ＴＧＦ－β超家族的信号在细胞内声望地的一族蛋白,包括８个成员,分别称ＳＭＡＤ１－８。ＳＭＡＤ１、２、３、５和８属于一类,它们被ＴＧＦ－β的受体或ＢＭＰ的受体激活而磷酸化,称为受体调节ＳＭＡＤ,传导下ＴＧＦ－β或ＢＭＰ的信号。ＳＭＡＤ６和７属于另一类,它们抑制制受体调节ＳＭＡＤ的信号传导。ＳＭＡＤ４是第三类,它是受体调节ＳＭＡＤ传导信号的伴侣。受体调节ＳＭＡＤ传导信号必须先     

重组人骨形态发生蛋白－2成熟肽在大肠杆菌中的表达及其诱导成骨活性

报告了人骨形态发生蛋白－２（ＢＭＰ－２）成熟肽的基因克隆,及其在大肠杆菌中的表达。用ＡｆｌⅡ酶剪除ＢＭＰ－２ｃＤＮＡ中的信号肽及前肽部分的序列,将编码成熟肽的ｃＤＮＡ３′端０．３６ｋｂ基因片段克隆于大肠杆菌表达载体ｐＭＸ－１质粒的ＡＴＧ下游,受控于ＰＬＰＲ启动子。重组子以大肠杆菌ＤＨ５α为宿主细胞进行温度诱导表达。工程菌经４２℃６ｈ诱导后,在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上出现一条新蛋白带,分子量约为１２ｋＤ,约占菌体总蛋白的２０％。主要以包涵体形式存在的表达产物经初步纯化后,可获得纯度较高的重组人骨形态发生蛋白－２成熟肽（ｒｈＢＭＰ－２ｍ）。小鼠肌肉植入试验发现。ｒｈＢＭＰ－２ｍ植入后的不同时间,在局部出现间质细胞的聚集和增生、软骨细胞及软骨基质的生成和硬质骨的形成,证明ｒｈＢＭＰ－２ｍ具有明显的诱导新骨形成的作用。     

一种与受精有关的人精子膜蛋白（BS—17）的分离纯化

本文盐分级分离,Ｍｏｎｏ Ｑ ＦＰＬＣ及ＳＤＳ－聚烯酰胺胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）等方法从人精子ＣＨＡＰＳ抽提液中分离纯化出一种与不育病血清中抗精子抗体发生特异反应的ＢＳ－１７人精子膜蛋白。该蛋白为一糖蛋白,分子量为１７．５５±２．１５ｋＤ,等电点为５．６５,中性己糖含是为１６．６７％。在人精子上主要分布于顶体区域,不同于已有报导的人精子膜蛋白。在体外实验中抗ＢＳ－１７多克隆血清可以显著影响人精子     

甲基单胞菌Methylomonas sp.GYJ3中甲烷单加氧酶还原酶组分的纯化和性质

Ｍｅｔｙｌｏｍｏｎａｓｓｐ．ＧＹＪ３菌的甲烷单加氧酶（ＭＭＯ）粗酶提取液经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析、ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤层析和ＤＥＡＥ－ＴＳＫｇｅｌＨＰＬＣ分离纯化出ＭＭＯ还原酶组分．经ＨＰＬＣ分析,纯度大于９５％,纯化倍数为４．４,加入至ＭＭＯ羟基化酶和调节蛋白Ｂ的体系中表现比活为２２８ｎｍｏｌ环氧丙烷每分钟毫克蛋白．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳表明还原酶由一种亚基组成,分子量４２ｋＤ．ＩＣＰ－ＡＥＳ测定还原酶的Ｆｅ含量为１．８３ｍｏｌＦｅ每ｍｏｌ蛋白．ＵＶ－Ｖｉｓ光谱表明还原酶除２８０ｎｍ蛋白质特征峰外在４６０ｎｍ有最大吸收峰,且Ａ２８０ｎｍ／Ａ４６０ｎｍ为２．５０,与其它黄素一铁硫蛋白相似,推测还原酶可能含一个ＦＡＤ辅基和Ｆｅ２Ｓ２中心．在厌氧条件下,还原酶能够和ＮＡＤＨ作用,ＵＶ－Ｖｉｓ光谱分析表明还原酶４６０ｎｍ处特征吸收峰消失,说明在ＭＭＯ催化过程中还原酶接受ＮＡＤＨ的电子．ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ阴离子交换层析分离出调节蛋白Ｂ,部分纯化的调节蛋白Ｂ的分子量大约在２０ｋＤ,它能够提高ＭＭＯ比活性４０倍,ＭＭＯ还原酶和调节蛋白Ｂ单独存在时不具有ＭＭＯ     

高等植物Rubisco的组装及其中间产物的鉴定

将新鲜制备的不含Ｒｕｂｉｓｃｏ的水稻叶片低分子量蛋白组分在离体条件下于室温保温４８ｈ,ＮＤ－ＰＡＧＥ分析发现在ＡＴＰ ５ｍｍｏｌ／Ｌ和Ｍｇ＾２＋ ５ｍｍｏｌ／Ｌ的作用条件下,在分子量为５６０ｋＤ位置上有一蛋白带生成。高浓度的Ｋ拓一定程度上抑制它的形成,在保温介质中没有ＡＴＰ存在时,不能产生５６０ｋＤ分子量的条带,但有一更高分子量（约６００ｋＤ）蛋白条带的产生,这一条带能在ＡＴＰ和Ｍｇ＾２＋作用下发