大鼠FMR1同源基因cDNA的克隆、测序与选择剪接的初步分析

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从新生大鼠脑组织总ＲＮＡ扩增大鼠ＦＭＲ１同源基因的ｃＤＮＡ片段,克降至ｐＵＣ１８质粒中进行序列分析．获得从终止密码子起共１６８１ｂｐ的编码序列,尚缺少约２００ｂｐ的５′序列．所克隆的这部分大鼠ＦＭＲ１ｃＤＮＡ,不含有对应于人ＦＭＲ１基因的外显子１２及外显子１７第一和第三剪接受点之间的序列,提示大鼠ＦＭＲ１基因也有选择剪接表达．同源性分析显示,大鼠ＦＭＲ１与小鼠ＦＭＲ１基因的同源性为９７．７％,与人ＦＭＲ１基因的同源性为９４．９％;与小鼠ＦＭＲＰ（ＦＭＲ１蛋白）的氨基酸序列同源性为９８．４％,与人ＦＭＲＰ的氨基酸序列同源性为９７．９％．以大鼠ＦＭＲ１ｃＤＮＡ片段为探针检测到大鼠不同组织中ＦＭＲ１基因的选择剪接表达．上述结果为以大鼠为动物模型深入研究ＦＭＲ１基因功能奠定了基础．     

FMR1基因功能研究的新进展

ＦＭＲ１基因突变引起表达缺乏,导致最常见的遗传性智力低下疾病－脆性Ｘ综合征。ＦＭＲ１基因编码的蛋白与翻译过程的调控。     

大鼠FMR1同源基因cDNA的克隆,测序与选择剪接的初步分析

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法,从新生大鼠脑组织总ＲＮＡ扩增大鼠ＦＭＲ１同源基因的ｃＤＮＡ片段,克降至ｐＵＣ１８质粒中进行序列分析。获得从终止密码子起共１６８１ｂｐ的编码序列,尚缺少约２００ｂｐ的５‘序列。所克隆的这部分大鼠ＦＭＲ１ｃＤＮＡ,不含有对应于人ＦＭＲ１基因的外显子１２及外显子１７第一和第三剪接受点之间的序列,提示大鼠ＦＭＲ１基因也有选择剪接表达。     

野生型p53基因对内皮细胞细胞间粘附分子-1表达的影响

细胞间粘附分子－１（ＩＣＡＭ－１）是介导白细胞与内皮细胞粘附的重要粘附分子．为研究野生型ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响,分别采用流式细胞术和ＲＴ－ＰＣＲ／ＨＰＬＣ方法测定ＩＣＡＭ－１蛋白及ｍＲＮＡ水平．静息状态的内皮细胞表面结构性地表达有少量的ＩＣＡＭ－１,在肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα,１０～１０００Ｕ／ｍｌ）诱导下,其表达呈剂量依赖性增加．将ｐ５３基因导入内皮细胞,则显著抑制ＴＮＦα诱导的内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达．ｐ５３基因的导入对静息状态内皮细胞表面结构性表达的ＩＣＡＭ－１影响较小．ｐ５３基因主要通过降低ＩＣＡＭ－１的ｍＲＮＡ水平而抑制内皮细胞表面ＩＣＡＭ－１的表达,但对蛋白的抑制程度小于对ｍＲＮＡ的抑制程度．提示：ｐ５３基因对内皮细胞ＩＣＡＭ－１表达的影响除转录水平控制外,还存在转录后水平的调控     

FMR1基因结构与功能

ＦＭＲ１基因无时空特异性地表达提示它具有管家基因尾性质,其正常表达对于每个细胞发挥正常的功能都是必不同少的,而与增殖过程和表型发生过程无关。ＦＭＲ１基因在某些组织的时空特异性表达又提示,它也是一种在发育过程起重要作用的调节基因,对于中枢神经系统、生殖系统及其它许多组织的正常发育是必不可少的,可能在细胞的迁移和分化过程中起重要的调探作用。ＦＭＲ１基因表达一种定位于胞浆中的ＲＮＡ结合蛋白ＦＭＲＰ。ＦＭ     

FMRP蛋白6种异构体与FXR1蛋白间的相互作用

脆性Ｘ综合征是最常见的遗传性智力低下疾病,其致病基因ＦＭＲ１存在复杂的选择剪接．ＦＭＲ１基因的功能及其选择剪接的生物学意义尚未阐明．ＦＭＲ１蛋白（ＦＭＲＰ）与脆性Ｘ相关蛋白１（ＦＸＲ１）可形成异源二聚体．采用酵母双杂交体系研究了由ＦＭＲ１第１２、１４、１５外显子不同选择剪接方式产生的６种ＦＭＲＰ异构体与ＦＸＲ１蛋白的相互作用,以期从蛋白质相互作用的角度探讨ＦＭＲ１基因选择剪接表达的生物学意义．结果表明各种异构体与ＦＸＲ１相互作用的强度随异构体蛋白肽链长度的增长而减弱．外显子１２、１４、１５的选择剪接虽然不能开关式控制ＦＭＲＰ与ＦＸＲ１的相互作用,但其Ｃ端亲水区在一定程度上影响相互作用的强弱．提示选择剪接对ＦＭＲＰ与ＦＸＲ１异源二聚体的稳定性产生影响．     

可降解淀粉和产生酒精的酵母工程菌的构建

采用基因重组技术将黑曲酶糖化酶ＧＡＩ ｃＤＮＡ与ＭＦ－α１因子的启动子－信号序列及ＰＧＫ基因的转录终止位点重组进大肠杆菌－酵母穿梭质粒构建酵母表达载体ＹｅｐＭＧＴ２０,用原生质体转化法引入酒酵母ＧＲＦ１８,在酵母ＭＦ－α１启动子－信号序列及ＰＧＫ终止位点的调控下,实现糖化酶的高表达,９９％的酶活力分泌至胞外,构建的酿酒酵母ＧＲＦ１８（ＹＥｐＭＧＴ２０）在１０％淀粉的培养基中培养４８ｈ,淀粉水解率达     

FEN—1基因反义阻断细胞株（FL—FEN—1^—）的建立

ＦＥＮ－１是一咱结构特异性核酸酶,它在ＤＮＡ复制和修复过程中都起着重要的作用。将ＦＥＮ－１基因的ＮｃｏＩ－ＢａｍＨＩ片段反向克隆到哺乳动物细胞重组表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ＾－中,得到ＦＥＮ－１反义表达质粒ｐＭＡＭｎｅｏＡｍｐ＾－ＦＮＢ＾－,并转染ＦＬ细胞,经Ｇ４１８筛选后,获得ＦＥＮ－１基因表达被阻断的哺乳动物细胞ＦＬ－ＦＥＮ－１＾－。对细胞生长曲线的测定发现,ＦＬ－ＦＥＮ－１＾－在地塞米松的     

VEGF受体Flt—1在大肠杆菌中的高效融合表达

鉴于Ｆｌｔ－１有肿瘤及其他由于病理血管生成而导致的多种疾病中的核心作用,本文通过ＰＣＲ扩增出的ＶＥＧＦ受体Ｆｌｔ－１Ｎ端１－３个ＩｇＧ样ｌｏｏｐ基因,经过基因重组实现了Ｆｌｔ－１在原核表达体系５Ｘ－１的融合表达。     

猪生殖-呼吸道综合征病毒(PRRSV)E蛋白基因真核表达质粒的构建

新近发现的ＰＲＲＳＶ是单股ＲＮＡ病毒,属于不久前成立的动脉炎病毒科。其基因组包括８个开放阅读框架（ＯＲＦ）,其中ＯＲＦ５编码糖基化的囊膜（Ｅ）蛋白,是病毒的主要免疫保护性抗原之一。为了研制ＰＲＲＳ基因疫苗,扩增并克隆了ＰＲＲＳＶ－１ａ株ＯＲＦ５,并将其亚克隆至真核表达载体ｐＣＲ３－Ｕｎｉ的ＣＭＶ启动子下游,构建成真核表达质粒,为ＰＲＲＳ基因免疫奠定基础     

大鼠诱导型一氧化氮合酶基因转录调控区的克隆与鉴定

采用单特异引物ＰＣＲ克隆法,得到大鼠诱导型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）基因转录调控区ＤＮＡ片段。核酸序列分析证实,大鼠ｉＮＯＳ基因的５＇－侧翼区含有ＩＦＮ－γ和ＴＮＦ－α应答元件及ＮＦ－ｋＢ结合位点的保守序列。这些保守序列的位置及排列显区别于人和小鼠的ｉＮＯＳ基因。电泳迁移率改变分析（ＥＭＳＡ）表达,ＶＳＭＣ受ＩＬ－１和ＩＦＮ－γ刺激后,细胞核内产生某种可与ｉＮＯＳ基因５＇－侧翼区特异结合的核蛋白因     

显微注射法制备转基因小鼠模型的研究

将外源基因ＭＴ０ＬＭＰ,ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（Ｘ１）－ＬＭＰ及ＨＬＡ－ＤＲα分别注入昆明小鼠受精卵雄原核中,结果得到有这三种外源基因整合的三个转基因小鼠系,导入基因的整合率分别为８％,８０％骸６６．７％,它们的子一代及子二代（Ｆ２）基因中也均有外源基因整合,并且导入ｐＺｉｐ－ＮｅｏＳＶ９Ｘ１）－ＬＭＰ基因后经反转录聚合酶链反应,检测ｍＲＮＡ发现有该基因的表达,说明本法制备转基因小鼠是可行的。应用荧光     

萝卜抗真菌蛋白1（Rs—AFP1）在大肠杆菌中的融合表达及其对大丽轮 …

利用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）获得了萝卜（Ｒａｑｈａｎｕｓ ｓａｔｉｖｕｓ Ｌ．）抗真菌蛋白１（Ｒｓ－ＡＦＰ１）基因编码区核苷酸序列。将整个阅读框架片段和云除了Ｎ－端信号肽序列的片段分别装入原核表达载体ｐＥＴ－３２ｇ（＋）中,在大肠杆菌中表达,发现带有信号 的Ｒｓ－ＡＦＰ１不能在大肠杆菌中表达,而当这一序列去除后,表达出约２７ｋＤ的Ｒｓ－ＡＦＰ１的融合蛋白。用凝血酶处理融合蛋白以云除Ｎ－端Ｈｉｓ．ｔ     

高秆突变体Mh—1的株高遗传研究

Ｍｈ－１是从矮秆品种桂朝２号辐射诱变后代中产生的高秆突变体。用Ｍｈ－１与ｓｄ－１矮秆、非ｓｄ－１矮秆和普通高秆材料杂交,通过对Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３等世代以及测交后代的株高进行遗传分析,结果表明,Ｍｈ－１的高秆特性是由１对隐性抑制基因控制的,该抑制基因能调节ｓｄ－１基因的表达,而对由非ｓｄ－１基因控制的矮秆没有抑制作用,这一隐性抑制基因暂时被定名为ｉ－ｓｄ－１（ｔ）。还讨论了该基因的遗传学意义和可能的育     

Epstein-Barr病毒BNLF-1基因的克隆及其在PA317细胞中的表达

本文报道以人Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒的潜伏膜蛋白基因ＢＮＬＦ－１作为目标基因,插入至逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）的克隆位点上,由此获得重组逆转录病毒载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ＬＭＰ及其反义载体ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（ｘ）－ａｎｔｉ－ＬＭＰ,通过质粒ＤＮＡ的电转染和Ｇ４１８培养基筛选,然后对１０个抗性克隆进行基因整合分析,获得６个含ＭＬＶ－ＬＴＲ／ＢＮＬＦ－１融合基因的阳性克隆,采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹证明,在克隆细胞中表达了２．６ｋｂ的ｍＲＮＡ片段及相应的蛋白质分子,这是由ＢＮＬＦ－１基因的ＥＤＬ１启动子表达的产物。     

人NMT的表达,纯化和活性研究

利用ＰＣＲ技术并进行ＤＮＡ序列测定,从人脑ｃＤＮＡ库中扩增得到人豆蔻酰ＣｏＡ蛋白Ｎ端豆蔻酰转移酶的编码基因,构建其在Ｔ７启动子控制下的成熟型和Ｈｉｓ６融合型的表达质粒ｐＭＦ－ｈＮＭＴ３和ｐＭＦＨＴ－ｈＮＭＴ２。转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）,进行ＩＰＴＧ诱导表达研究。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析结果显示,在３７℃条件下表达的各种重组ｈＮＭＲ几乎全是不溶性产物,但在较低温度条件下表达的Ｈｉｓ６－ｈＮＭＲ绝大     

分子遗传学研究的新焦点：动态突变与脆性X综合征

近年来,对脆性位点分子生生物学的研究已取得突破性进展,脆性Ｘ综合征智力低候选基因ＦＭＲ－１已被克隆,其５＇端外显子是由一段不稳定的微随体序列ｎ组成,该ｎ重复序列拷贝数的遗传是不稳定的,其扩增长度的变化与脆性与点的表达,ＣｐＧ岛的甲基化,ＦＭＲ－１基因的功能,临床表型具有相关性,分子遗传学上把 这种独特的遗传形式称为“动态突变”。这一发现,为脆性Ｘ综合征及其它与动态突变有关的遗传病的研究提供了重要的     

鱼类HGPRT缺陷型细胞的诱变和筛选

草鱼卵巢细胞ＧＣＧ经乙基甲磺酸（ＥＭＳ）诱变,稳定表达３代以后,采取逐步提高培养基中６－疏基嘌呤（６－ＭＰ）的方法,获得对６－ＭＰ稳定抗性的细胞,暂定名ＦＭＲ－１．本文比较了ＧＣＧ细胞及ＦＭＲ－１细胞在含６－ＭＰ（２０μｇ／ｍｌ）和不含６－ＭＰ的培养基中生长曲线的特点,并对上述两种细胞的染色体数目和葡萄糖－６－磷酸脱氢酶电泳图谱进行了比较分析。最后对两种细胞在ＨＡＴ培养基中的生长特点进行了平行对照实验,根据实验结果,可以判定ＦＭＲ－１细胞为草鱼ＨＧＰＲＴ缺陷型细胞。本义还讨论了进一步研究草鱼ＨＧＰＲＴ缺陷型细胞的途径及草鱼ＨＧＰＲＴ缺陷型细胞在鱼类细胞遗传学上的应用前景。     

nifH—gfp表达载体的构建及其在Enterobacter gergoviae 57—7中的表达

采用ＰＣＲ技术,从ＧＦＰｍｕｔ２中扩增得到三位点突变的报告基因ｇｆｐＳ６５Ｔ、Ｖ６８Ｌ、Ｓ７２Ａ片段,并将它和肺炎克氏杆菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ（Ｓｃｈｒｏｅｅｔｅｒ）Ｔｒｅｖｉｓａｎ）Ｍ５ａ１的固氮酶结构基因ｎｉｆＨ的启动子和其起始密码子相融合,获得ｎｉｆＨ－ｇｆｐ表达载体ｐＭＧＦＰ２;再在ｐＭＧＦＰ２上插入卡那霉素抗性基因,获得可在日勾维肠杆菌（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ     

用RT—PCR和RFLP对禽传染性支气管炎病毒中国分离株的分型

用ＲＴ－ＰＣＲ方法获取了禽传染性支气管病毒标准毒株Ｍ４１,Ｈ５２,Ａ５９６８和国内分离株Ｄ４１,Ｆ,Ｇ的Ｓ１基因,对它们做ＲＦＬＦ分析,发现Ｄ４１,Ｆ株属于马萨诸塞血清型,Ｇ株为变异株。对用ＲＴ－ＰＣＲ和ＲＦＬＰ来区分ＩＢＶ的分型方法的应用理论和前景进行了论述。