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猪肝微粒体NADH—细胞色素b5还原酶的纯化及特性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
采用硫酸铵分级分离,Sephadex G-100凝胶过滤,DEAE-纤维素离子交换层析以及5'-AMP-Sepharose 4B亲和层析,从猪肝微粒体中纯化得到可溶性的NADH-细胞色素b5还原酶,提纯倍数为750-800。总回收率为40%左右。纯化的酶呈典型的黄素蛋白吸收光谱,A273/A460比值为5.8.在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳板上呈单一的蛋白质区带,分子量为32kd。NADH和2,6- 相似文献
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以Wistar大鼠肝为材料,确立了一个简便的纯化鼠肝DNA甲基化酶的程序,包括:细胞的超声破碎、去内源核酸、硫酸铵盐析、磷酸纤维素亲和层析、DEAE-SephadexA-50柱层析及SephadexG-150凝胶过滤。用不同浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳和孔梯度凝胶电泳检测,纯化后的酶已达电泳均一,且酶的比活力提高112倍。以聚丙烯酰胺孔梯度凝胶电泳测得其天然酶的分子量为365kD,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得该酶有两种亚基,大亚基为95kD,小亚基为85kD,推测该酶由两个大亚基和两个小亚基组成。 相似文献
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以Wistar大鼠肝为材料,确立了一个简便的纯化鼠肝DNA甲基化酶的程序,包括:细胞的超声破碎,去内源核酸,硫酸铵盐析,磷酸纤维素亲和层析,DEAE-Sephadex A-50柱层析及Sephadex G-150凝胶过滤,用不同浓度聚丙烯酰胺凝胶电泳和孔梯度凝胶电泳检测,纯化后的酶已达电泳均一,且酶的比活力提高112倍,以聚丙烯酰胺孔梯度凝胶电泳测得天然酶的分子量为365kD,以SDS-聚然酰胺凝 相似文献
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人表皮生长因子(EGF)与单核—巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)融合?… 总被引:1,自引:0,他引:1
应用基因工程技术,将EGF,GM-CSF基因克隆到pGEM-3Zf载体的EcoRI,BamHI位点上,再钭重组融合基因亚克隆到表达载体pBV220扔EcoRI,BamHI位点上,在大肠杆菌DH5α中进行表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot表明EG-FGM-CSF融全蛋白获得表达,并且具有EGF,GM-CSF免疫学活活。 相似文献
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地衣芽孢杆菌1Baciuus Licheniformis)BL-306产生的胞外β-甘露聚糖酶经硫酸铵分级盐析,DEAE-纤维素柱层析。Sephadex-G100柱凝胶过滤和DEAE-纤维素柱再层析分离纯化,得到SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)均一样品。用SDS-PAGE测得纯化后β-甘露聚糖酶分子量为26000道尔顿。用凝胶等电聚焦电泳(PAGEIEF)测得等电点PI为5.0。该酶 相似文献
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圆弧青霉碱性脂肪酶的分离纯化的特性 总被引:1,自引:0,他引:1
圆弧青霉突变株PG37发酵液经离心、硫酸铵盐析、疏水层析、阴离子交换层析和凝胶过滤分离纯化得到了比活性为每毫克蛋白质5200u的碱性脂肪酶,纯化倍数16.5,得率33.2%,在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电脉(SDS-PAGE)上均呈现单一 白质条带。SDS-PAGE和凝胶过滤分别测得酶的分子量为27.5kD和29.kD,表明该酶以单体形式存在。N末端10个氨基酸的序列测 相似文献
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SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳纤维蛋白自显影法检测不同分子… 总被引:1,自引:0,他引:1
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)纤维蛋白显影方法是经SDS-PAGE将不同分子量的纤溶酶原激活剂(PA)分开,然后再转溶纤维蛋白板使之产生溶带而检测PA物质活性及分大小的方法,此法与Western印迹方法此具有检测更简便、灵敏、快速的特点,且是活性检测,但其分子量分析精度不如Wwestern印迹法。本研究用SDS-PAGE纤维蛋白自显影方法对本室表达的生组组织型-PA及突体N117Q 相似文献
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在大肠杆菌中表达了人肾液泡型H ̄+-ATPase58kD亚基的基因,利用聚合酶链式反应(PCR)得到了58kD亚基的编码片段.直接将PCR产物连接到PET载体上表达.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白质印迹分析表明58kD亚基的基因得到高效表达.表达产物可达细菌细胞质蛋白的50%. 相似文献
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中脑黑质是中缝核5-HT神经元最早期的靶组织之一。为了分析神经元对其靶细胞的作用是受某种特异性蛋白或神经营养因子的影响,本文用中缝核提取液作用于体外培养的中脑黑质神经元,证明了该提取液能促进中脑黑质神经元的存活和生长,其活性部分是分子量大于30kD的组份,经SDS-聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳,呈现一条主带,分子量在43kD左右。 相似文献
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牛心肌钙蛋白T的纯化 总被引:1,自引:1,他引:0
以小牛心肌为原料,用匀浆提取、热处理、硫酸铵沉淀、DEAE—纤维素柱层析纯化了牛心肌钙蛋白T(cTnT)。纯化的蛋白在SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳上为一条带,分子量为37,000道尔顿。用TroponinT快速半定量试纸条测定该蛋白,呈现强阳性反应。这说明我们纯化的蛋白为牛心肌钙蛋白T。 相似文献
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红苋P104种子谷蛋白的电泳分析 总被引:2,自引:0,他引:2
通过单向不平变性聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦(IEF)、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向电泳(IEF×SDS-PAGE)分析了红苋R104种子谷蛋白的亚基组成,亚其分子量和等电点分布。谷蛋白的双向电泳图谱可分辨出100多个亚基成分,其主要亚基为:54kD(pI7.15);33kD(pI5.82);31kD(pI6.92;pI6.70;pI6.65);22kD(pI8.34);2 相似文献
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纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示一条蛋自带,其亚基分子量为39.8kD。用SephacrylS-200凝胶过滤测得全酶的分子量为79.4kD,该酶由两个相同亚基组成。其表观Km为12mmol/L,Vmax为99.5mg还原糖mg-1proteinh-1。 相似文献
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甘薯叶片蔗糖酶的分离纯化及其部分性质 总被引:11,自引:0,他引:11
纯化酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示单一蛋白带,SDS-PAGE显示一条蛋白带,其亚基分子量为39.8kD。用Sephacryl S-200凝胶过滤测得全酶的分子量为79.4kD,该酶由两个相同亚基组成。其表观Km为12mmol/L,Vmax为99.5mg还原糖mg^-1protein h^-1。 相似文献
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应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫转印技术对流行性出血热患才血清中免疫合物组分进行了分析。流行性出血热循环免疫复合物经SDS-PAGE分离,考马斯亮兰染色,显色主要有7条带,分子量分别为23kD,50kD,52kD,65kD,72kD,80kD及100kD。采用该病毒特异性抗血清、单克隆抗体以及人免疫球蛋白、补体成分抗血清识别,在其特环免疫复合物中可检出特异性病毒抗在及相应的免疫球状蛋白和补体成 相似文献
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大鼠,小鼠胰蛋白酶的分离纯化及动力学性质 总被引:1,自引:0,他引:1
采用ST1-Sepharose 4B亲和层析的方法,从鼠新鲜胰脏中分离得到纯的胰蛋白酶。大鼠胰蛋白酶的比活为24615BAEEU/mg蛋白,总活性回收率47%;小鼠胰蛋白酶的比活为32768BAEEU/mg蛋白,总活性回收率55%。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,二者的等电点均匀呈现单一蛋白带,两者的分子量都是24kD。用等电聚焦电泳测定。二者的等电点均为pI9.5以上,对它们的动力学性质作了研 相似文献
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利用PEG分级,DEAE离子交换层析,Bhue Sepharose拟亲和层析,MonoQ离子交换层析等手段,分离纯化直二氏藻甘油三磷酸(G-3-P)脱氢酶(EC1.1.1.8)得到比活为12.6u/mg的电泳纯的酶,并对此酶的生化特性进行了研究。4-20%非变性聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳测得全酶分子量约为270kD,SDS-PAGE表明该酶只有一种分子量约为65kD的亚基,据此推测该酶应为同四聚体。酶 相似文献
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本文合成了一种聚脯氨酸亲和层析凝胶,并用这种凝胶纯化了猪血小板外廓蛋白。纯化的外廓蛋白在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单一蛋白带,分子量14kD;在体外能显著抑制肌动蛋白聚合。 相似文献