生命的起源--"RNA世界论"假说

自具有催化功能的 RNA分子被发现以来 ,主张生命起源于可以携带遗传信息的 RNA的“RNA世界论”受到广泛承认。该假说的关键之处在于要用实验证明“翻译系统”(能生产比 RNA功能更多的蛋白质 )能够在“RNA世界”中产生 ,证明这个“翻译系统”可由特定的 RNA分子组合来构成。为此 ,最近几年来 ,采用试管人工进化法 ( systematic evolution of ligands byexponential enrichment SEL EX法 ) ,在试管内挑选具有上述功能的 RNA分子的研究非常盛行。与此同时 ,解释“翻译系统”的主要结构——核糖体功能构造的研究也不断的有新结果问世…     

细菌非编码小RNA研究进展

细菌非编码小RNA(small non-coding RNA, sRNA)是一类长度在50~500个核苷酸, 不编码蛋白质的RNA。迄今, 在各种细菌中共发现超过150多种sRNA。它们通过碱基配对识别靶标mRNA, 在转录后水平调节基因的表达, 是细菌代谢、毒力和适应环境压力的重要调节因子。细菌sRNA的研究技术主要有基于生物信息学的计算机预测法和基于实验室的检测分析方法。这些方法所得到的sRNA都需要进行实验室确认, 然后再进一步通过各种实验手段研究其功能。     

茶树不同器官组织总RNA提取方法的研究

从茶树组织中提取高质量的总RNA,是开展茶树基因组学、功能基因组学研究的重要前提,而RNase、多酚类物质严重干扰茶树总RNA的分离提取。鉴于茶树组织总RNA提取过程难易不一、总RNA提取质量良莠不齐的现状,现对材料用量、提取液、DNA和蛋白质抽提液、RNA沉淀试剂、多酚氧化抑制剂等进行了比较研究,建立了一种适合茶树各器官组织总RNA提取的简单高效的方法(简易CTAB-LiCl法),并与实验室常用的改良Tri-Reagent法、改良CTAB法进行了比较。核酸定量和琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,简易CTAB-LiCl法从茶树各器官组织中提取到的总RNA质量高、得率高。总RNA的得率是改良CTAB法的1.6-5倍。因此,简易CTAB-LiCl法具有效率高、适用范围广,且操作简单、实验成本低的特点。RT-PCR和cDNA-AFLP实验表明,提取的总RNA能够用于后续的分子生物学研究。     

十字花科黑腐病菌中一个与抗逆有关的小RNA的鉴定

十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pathovar campestris,Xcc),是引起十字花科植物黑腐病的病原菌。Xcc要经历寄生、腐生等多种环境变化,为适应这些环境变化,需要调控相应基因的表达。除蛋白外,小RNA在基因表达调控中也起到关键作用。本实验室前期实验从Xcc 8004中鉴定出数百个小RNA,但是绝大多数小RNA的功能仍然未知。本研究通过构建一个小RNA(sRNA3843)的过量表达株来研究其生物学功能。确定该小RNA过量表达后,对其过量表达株OE3843进行了一系列的表型检测。结果发现,s RNA3843过量表达株OE3843对金属离子Cu^2+、Zn^2+、Cd^2+及蛋白变性剂SDS的耐受能力明显下降,表明s RNA3843与Xcc的抗逆有关。本研究的实验结果为深入研究小RNA在Xcc抗逆中所起的作用及其作用机理打下基础。     

四种副溶血弧菌总RNA提取方法的比较

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种革兰氏阴性嗜盐菌.提取高质量的RNA是研究副溶血弧毒力基因表达与其致病性和环境适应性的基础.本研究分别用SDS法、Trizol法,PureLinkTM RNA Mini Kit和Uniq-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒提取六株副溶血弧菌的总RNA,用普通琼脂糖凝胶电泳和核酸测定仪检测RNA的质量,并用RT-PCR法对四种提取方法进行比较.研究结果表明,Trizol法和PureLinkTM RNA Mini Kit简单快捷,提取的总RNA完整性好,纯度高,可用于后续实验的分子生物学研究;而Trizol法更适用于普通实验室细菌RNA的提取.     

斑马鱼高分辨率整胚原位杂交实验方法与流程

整胚原位杂交技术是利用反义RNA探针检测体内mRNA表达的一项技术, 在利用模式动物研究基因时空表达方面有着重要的应用。如何使用该技术得到特异、高敏感度的表达结果, 对每一个使用该技术的实验室来说都很重要。本实验室参照常规的实验方法, 对该技术加以改进, 使之更加灵敏, 结果更加特异。文章主要以斑马鱼为例, 介绍了整胚原位杂交技术的发展历史, 并重点介绍了本实验室所用的整胚原位杂交实验流程, 同时还分析了实验结果不理想的原因及其解决方法。     

关于"观察DNA和RNA在细胞中的分布"实验的改进建议

人教版高中新课标教材“分子与细胞”中“观察 DNA和RNA在细胞中的分布”这一实验效果不理想, 即细胞核内的DNA很难被染料染成实验预期中的绿色。笔者反复重做该实验后得出以下结论:实验失败的关键在于实验前的酸处理对染色效果的影响以及酸对DNA的结构的影响。     

3种破壁方法提取念珠菌总RNA效果的比较

念珠菌是最主要的致病性真菌之一。随着医学分子生物学的发展,有关对念珠菌的致病基因及其表达的研究越来越广泛,进行这些研究的一个关键步骤就是RNA的提取。主要由几丁质组成的真菌的细胞壁厚且坚韧,因此破壁是提取念珠菌RNA的关键。常用破壁方法包括:热酸性酚裂解法破壁酶、液氮破壁、酸洗玻璃珠破壁、微波破壁等[1,2]。酶与细胞的孵育会影响RNA的质量[3],热酸性酚裂解法RNA提取效率不高[4],超声波破壁对实验室设备要求较高。本实验我们设计了国内外常用的液氮研磨、酸洗玻璃珠破壁法来提取RNA。另外,考虑到温度对RNA的影响,还加…     

"唾液淀粉酶对淀粉的肖化作用"一节探索实验课的尝试

如何上好实验课,切实达到培养学生生物学能力,这是生物教师长期以来教改的课题.在实践探索教学中,我尝试运用启发式教学思想,将验证实验改革为探究实验,取得了良好效果. 1.要求学生带着问题走进实验室 探究式实验课,最大的特点是让学生成为学习的主人.因此如果学生没有任何思想准备,不带着问题走进实验室,探究式实验将失去其意义.因此在上实验课之前,教师要充分启发学生提问题,让学生带着问题走进实验室.     

对"植物体内的转氨基作用"实验的改进

“植物体内的转氨基作用”是生物化学的一个基础实验。在多年的实验教学中,我们发现常用的实验方法（参阅赵亚华主编的《生物化学实验技术教程》,有些步骤值得改进,比如沸水浴加热10min、用针线缝合层析纸、用喷雾器喷雾茚三酮丙酮溶液等操作不方便,且比较复杂、费时,还有有毒物质挥发,影响师生身体健康;又如原实验中规定使用的有些实验仪器如层析缸、喷雾器等并非实验室常用仪器,实验室里不一定具备,影响陔实验的进行。为此,我们结合我校的实际,对该实验进行了一些改进,使实验方法简单、易行,取得了良好的实验效果。     

科学出版社科学出版中心生命科学分社新书推介2008-01

本书根据美国冷泉港实验室出版社出版的《RNA世界》第三版译出。本书系统地介绍了RNA在生命起源中的作用和RNA功能，是国际上RNA领域最权威的专业书籍。内容涵盖了RNA的起源、核酶、核糖体、剪接体、核糖开关、RNA蛋白质复合物、snRNP、snoRNP、端粒酶RNA、RNA编辑、RNAi、microRNA、非编码RNA、     

"灵芝的实验室培养"实验设计

对人教版"微生物的实验室培养"的专题实验进行拓展,设计灵芝培养基的配制、菌种的接种、成菌培养等实验教学方案,让学生掌握基本微生物实验操作技术.通过灵芝培养实践,让学生体验科学技术与社会生活的联系.     

PNAS发表我科学家最新研究成果

由中国科学院昆明植物研究所植物化学与西部植物资源持续利用国家重点实验室、微生物研究所植物基因组学国家重点实验、中国疾病预防控制中心病毒病预防控研究所和云南省农业科学院生物技术研究所联合研究,首次发现双裂孕烷甾体glaucogenin C及其苷类化合物有选择性地抑制-正链RNA病毒,     

反义及正义表达癌基因c-Ha-ras重组质粒的构建

c-Ha-ras癌基因通过其产物p21蛋白的点突变或过量表达使细胞恶变。国外一些实验室的初步研究表明,导入一段与c-Ha-ras基因转录出的mRNA(sense RNA,正义RNA)顺序互补的RNA(anti-sense RNA,反义RNA),有可能通过阻断DNA复制,RNA转录或蛋白质翻译等过程,减少p21蛋白的合成,从而使转化细胞逆转。为了进一步系统研究反义c-Ha-ras RNA在转化细胞逆转中的     

一种简捷提取植物总RNA的准备和操作方法

提取RNA是分子生物学实验中的常用技术。而RNA酶抑制程度成为提取RNA的主要决定因素。准备和操作不当造成的RNA酶污染是实验失败的重要原因。介绍一种简捷的“烧、烤”提取植物总RNA的准备和操作方法,可以有效地抑制外源RNA酶的污染,提取的RNA成功率很高。     

装载RNA"病毒样"纳米颗粒表面巯基化表达载体的构建及荧光修饰

以本实验室构建的能够装载外源RNA片段的MS2噬菌体“病毒样”颗粒表达载体为基础,利用定点突变技术将衣壳蛋白基因的第15位密码子由编码苏氨酸突变为胱氨酸。表达产物在35％蔗糖密度梯度处有一目的产物,目的产物在透射电镜下呈球形,直径大小约为27nm。用马来酰亚胺-5’-荧光素对表达产物进行化学修饰,经光谱分析、SDS-PAGE分析和MALDI-TOF MS鉴定,证明巯基在表达产物的外表面,并能与马来酰亚胺-5＇-荧光素进行反应。这种携带外源RNA片段的荧光修饰的天然纳米颗粒为制备各种功能性纳米材料提供了新途径。     

Northern印迹检测小RNA

<正>Northern印迹是一种常用的RNA定性和定量分析方法。与mRNA等大分子RNA类似,microRNA等小分子RNA也可以通过电泳级分、转膜、杂交等Northern印迹操作进行定性、定量的分析。下面与大家分享我们实验室小RNA Northern印迹的一些经验。     

对"观察细胞质流动"实验的改进

“用高倍显微镜观察叶绿体和细胞质流动”是高中《生物》(必修)教材中的重要实验之一。在辅导学生实验的过程中,我们发现,学生往往只看到叶绿体,难以观察到细胞质流动,这里面有学生自身操作的原因,也与材料和实验方法有关。如何让全体学生都能在实验室观察到细胞质流动现象,笔者对该实验进行了一些改进。     

基于荧光染料Cy5.5标记的引物延伸法鉴定细菌RNA剪切加工位点

【背景】传统引物延伸法常与放射性标记结合使用,但由于放射性元素半衰期短、危害人体健康及严格的操作要求等限制了其在一般实验室的广泛使用。因此,开发新型非放射性引物延伸法成为当前研究的热点。【目的】建立非放射性的引物延伸法,并利用该方法实现对细菌RNA剪切加工位点的鉴定。【方法】将包含RNA剪切位点的序列克隆至双荧光报告系统,然后利用荧光染料Cy5.5标记的特异性靶向mcherry寡核苷酸引物进行延伸,并辅以Northern blotting、RT-qPCR等技术,确定RNA剪切加工的精确位点。【结果】鉴定了来自解纤维梭菌cip-cel mRNA中的2个剪切加工位点均位于颈环结构下游的单链区域,且在剪切位点附近未发现保守序列。【结论】基于Cy5.5标记的引物延伸法能够精确鉴定RNA剪切加工位点,且与传统的放射性引物延伸法相比,该方法具有更高的安全性和更快的检测速度,能够满足一般实验室的实验要求。