肝脏移植与肠道微生态变化的研究进展

摘要：肝移植已成为公认的治疗终末期肝疾病的有效手段。由于“肝－肠轴”和“肝脏－微生态轴”的存在,肝移植术后感染和移植肝损伤与肠道微生态变化密切相关。本研究综述了肝脏移植与肠道微生态变化的研究进展,主要包括大鼠肝移植中缺血再灌注损伤与肠道微生态变化、大鼠肝移植后移植排斥损伤与肠道微生态变化、大鼠肝损伤肝移植与肠道微生态变化的互作关系,以及临床肝移植围手术期、术前术后等与肠道微生态变化的研究。同时,指出了临床肝脏移植与肠道微生态变化可能的研究方向,提出了肝移植后微生物标志物的鉴定及潜在的靶向微生物治疗的策略。     

肝移植围手术期肠道微生态变化研究进展

随着医疗技术的不断创新与发展,我国肝移植的数量逐年增加,但术后并发症仍难以控制,导致不良预后,因此肝移植术后并发症逐渐成为关注的焦点。随着“肠－肝轴”的提出,研究发现肝移植围手术期肠道菌群发生了明显变化,干预肠道菌群及其信号通路可能是控制术后并发症的新途径。本文从肠道微生物的定义与生理作用、“肠－肝轴”的病理生理联系在肝移植围手术期的作用及粪菌移植在肝病中的应用３个方面进行综述,列举肝病和肝移植与肠道微生态变化特点的相关研究,以及粪菌移植改善微生态从而达到治疗的相关研究,旨在阐述肝移植患者肠道紊乱的可能机制与菌群的具体变化,并展望应用粪菌移植技术加快肝移植术后恢复的可行性。

     

彩色多普勒超声对原位肝移植术后血流动力学研究

目的：探讨彩色多普勒超声(CDI)在原位肝移植术后对移植肝血流动力学变化的诊断价值。方法：应用CDI连续观察6例原位肝移植患者移植肝脏形态学变化,肝动脉峰值流速(HAmax)、门静脉及肝静脉平均流速(PVmean,HVmean)等指标,并以30例健康成人男性肝脏的血流动力学参数作为正常对照组。结果：在术后2周内肝脏移植组的HAmax低于正常对照组,1周内表现更为明显;术后1周内移植肝脏组的PVmean高于正常对照组,1周后表现不明显;移植肝脏组的Hvmean与正常对照组相比无明显差异。2周后,HA、PV和HV的血流速度基本上趋于正常。结论：CDI技术对了解肝移植术后移植肝的灌注情况,及早发现肝移植术后早期的并发症有重要意义。     

彩色多普勒超声对原位肝移植术后血流动力学研究

目的:探讨彩色多普勒超声(CDI)在原位肝移植术后对移植肝血流动力学变化的诊断价值。方法:应用CDI连续观察6例原位肝移植患者移植肝脏形态学变化,肝动脉峰值流速(HAmax)、门静脉及肝静脉平均流速(PVmean,HVmean)等指标,并以30例健康成人男性肝脏的血流动力学参数作为正常对照组。结果:在术后2周内肝脏移植组的HAmax低于正常对照组,1周内表现更为明显;术后1周内移植肝脏组的PVmean高于正常对照组,1周后表现不明显;移植肝脏组的Hvmean与正常对照组相比无明显差异。2周后,HA、PV和HV的血流速度基本上趋于正常。结论:CDI技术对了解肝移植术后移植肝的灌注情况,及早发现肝移植术后早期的并发症有重要意义。     

肝移植术后营养治疗

近30多年来,肝移植技术已逐步成熟,并迅速发展成为治疗终末期肝病的首选方法。随着肝移植例数的增加,手术经验的积累,手术技巧的提高,与手术相关的并发症逐渐减少。而许多围手术期因素成为影响肝移植成败的关键。适宜的肝移植围手术期营养治疗,可以提高手术成功率,降低术后并发症,促进受体和移植肝功能的恢复,从而改善预后,提高受体与移植肝的近远期存活率。     

肝移植术后肝脏淋巴回流淤滞发生的影响因素初步临床分析

目的:分析肝移植术后肝脏淋巴回流淤滞(Intrahepatic lymphatic stasis,IHLS)的影响因素。方法:收集我院自2004~2012年期间行肝移植手术并经增强计算机断层扫描(Computed tomography,CT)和/或磁共振(Magnetic resonance imaging,MRI)确诊的IHLS病人,分析正常肝移植组IHLS阳性率与肝移植术后静脉并发症、胆道并发症、乙肝复发、肝癌复发、动脉并发症、移植排斥、药物性肝损害、转移瘤组IHLS阳性率的差异。结果:正常移植肝组术后IHLS的阳性率分别与术后胆道并发症、静脉并发症、乙肝复发组肝移植术后IHLS的阳性率差异有统计学意义(P0.05),与其他并发症组IHLS的阳性率差异无统计学意义(P0.05)。结论:肝移植术后静脉并发症、胆道并发症及乙肝复发可影响肝移植术后IHLS发生。     

获得诱导性肝细胞样细胞的策略研究

原位肝移植是目前治疗终末期肝衰竭等疾病最有效的办法,但供体来源少、手术费用昂贵等问题使得每年能够接受肝移植的病人非常少.肝细胞移植弥补了整个肝脏移植的不足,成为治疗肝病的最佳方案,但实验证明不论是在二维还是三维培养体系下原代肝细胞均无法在体外大量扩增,这极大地限制了其在临床上的广泛应用.多能干细胞以及肝干细胞可以在体外...     

肝移植术后曲霉的气道定植与侵袭性曲霉病的关系

目的评价肝移植术后曲霉气道的定植及其发生侵袭性感染的风险。方法回顾2003—2004年南京八一医院和上海长征医院56例肝移植患者进行的连续组织学检查和曲霉培养结果。结果24例患者被分离出曲霉,2例发生侵袭性烟曲霉感染。这2例患者在移植后6个月内都有烟曲霉的定植,并且都死亡,占所有移植后死亡的29％。无曲霉定植者都未发生侵袭性曲霉感染。结论肝移植术后的侵袭性曲霉感染较为少见,但常致死,曲霉定植常见但为一过性,由于气管侵袭性曲霉感染只发生在有烟曲霉定植的移植后6个月内的患者,所以在此期间进行预防性的治疗能否有效降低侵袭性曲霉感染值得研究。     

伊班膦酸盐预防肝移植术后骨质疏松症的临床效果观察

目的:观察每月口服伊班膦酸盐、维生素D3及钙剂预防肝移植术后骨质减少及骨质疏松症的临床疗效。方法:选择我院2011年1月至2013年8月收治的50例终末期肝病行尸体原位肝移植的患者,患者肝移植术后每月口服伊班膦酸钠(150mg)、维生素D3(800IE)及钙剂(1g/日),采用双能X线吸收测定法评估移植术后3个月、6个月、1年、2年腰椎及股骨颈的骨密度,同时评估骨的代谢物碱性磷酸酶(BAP)、尿吡啶诺林(PYD)、尿脱氧吡啶诺林(DPYD)的变化。结果:肝移植术后3个月患者的腰椎骨和股骨颈骨密度T值及测量值较移植前均有所下降,在持续治疗后12个月及后上升较为明显,骨密度较基线值的百分比从移植后的3个月到24个月呈稳定的上升趋势,差异有统计学意义(P0.05)。移植术后3个月的骨碱性磷酸酶较移植前明显的下降,在6、12个月时较前增加,但在24个月时再次下降。而移植术后的3、6个月的尿吡啶诺林、尿脱氧吡啶诺林上升,在12、24个月时与移植前比较无明显变化。移植后2年骨折发生率为4%。结论:每月口服1次伊班膦酸盐能显著提高肝移植术后患者第1年及第2年的骨密度,降低骨折的发生率。     

肝细胞肝癌E-Cadherin蛋白的表达及其对判断肝癌肝移植疗效的意义

目的：探讨E-Cadherin蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达及其对判断肝癌肝移植患者预后的价值。方法：选择肝细胞肝癌行全肝移植患者68例,应用免疫组化方法检测其切除的肝癌组织和癌旁正常肝组织中E-Cadherin蛋白的表达情况,并对患者进行移植术后随访,分析E-Cadherin蛋白表达与肝癌肝移植患者预后的关系。结果：肝癌组织中E-Cadherin蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织（P〈0.01）。经Logrank检验分析显示,E-Cadherin蛋白低表达组移植后的无瘤生存率明显低于E-Cadherin蛋白高表达组（P〈0.01）。多因素Cox回归分析显示,E-Cadherin蛋白表达是影响肝细胞肝癌患者肝移植术后肝癌复发的独立预后因素之一。结论：E-Cadherin蛋白表达是一个预测肝细胞肝癌患者肝移植预后的重要因子。     

肝细胞肝癌E-Cadherin 蛋白的表达及其对判断肝癌肝移植 疗效的意义

目的:探讨E-Cadherin蛋白在肝细胞肝癌组织中的表达及其对判断肝癌肝移植患者预后的价值。方法:选择肝细胞肝癌行全肝移植患者68例,应用免疫组化方法检测其切除的肝癌组织和癌旁正常肝组织中E-Cadherin蛋白的表达情况,并对患者进行移植术后随访,分析E-Cadherin蛋白表达与肝癌肝移植患者预后的关系。结果:肝癌组织中E-Cadherin蛋白阳性表达率明显低于癌旁组织(P<0.01)。经Logrank检验分析显示,E-Cadherin蛋白低表达组移植后的无瘤生存率明显低于E-Cadherin蛋白高表达组(P<0.01)。多因素Cox回归分析显示,E-Cadherin蛋白表达是影响肝细胞肝癌患者肝移植术后肝癌复发的独立预后因素之一。结论:E-Cadherin蛋白表达是一个预测肝细胞肝癌患者肝移植预后的重要因子。     

肝移植后真菌感染易感因素分析

目的 了解肝移植后受体发生真菌感染的特点,分析相关危险因素,并探讨预防措施。方法 回顾性分析我院肝移植中心2003年1月~2005年1月实施的195例肝移植患者发生真菌感染的情况。结果 195例肝移植患者,有25例发生真菌感染,共分离出40株真菌,感染率为12.8%。其中25株为白假丝酵母(62.5%),9株为光滑假丝酵母(22.5%),5株为热带假丝酵母(12.5%),1株为曲霉(2.5%);感染部位以呼吸道为主(占49.0%)。真菌感染与移植前后广谱抗生素应用时间、住院总天数、静脉导管使用天数、术后24h白细胞和中性粒细胞数、术后24h总胆红素、直接胆红素以及输血量有明显相关性(P<0.05)。肝移植真菌感染死亡3例,病死率12%。结论 多种临床易感因素均可导致肝移植术后真菌感染,尽量缩短广谱抗生素使用时间、严格掌握静脉穿刺的适应证、缩短导管留置时间、及时监测血常规和肝功能、控制并发症,是预防肝移植术后真菌感染的重要措施。     

Th17细胞及白细胞介素-17在肝移植急性排斥反应中的意义

目的探讨Th17细胞及相关因子白细胞介素-17（IL-17）在肝移植急性排斥反应中的变化及意义。方法收集2011年1月至2012年12月大连医科大学附属第二医院肝移植手术患者28例,根据移植肝组织穿刺活检病理诊断结果将肝移植的28例患者分为急性排异反应组6例和无排斥反应稳定组22例,15名健康体检者作为对照组。急性排斥组及稳定组在移植术后3 d和7 d,行肝穿刺活检病理检查;同时检测受检者外周血Th17细胞,受检者血清中IL-17水平。结果移植肝穿刺活检病理诊断显示急性排斥组随着移植时间延长,排斥反应逐渐增强。肝组织出现典型的细胞免疫性病理损伤,术后7 d肝脏汇管区、肝实质、小静脉壁、胆管上皮内及小叶间胆管被大量的淋巴细胞及嗜中性粒细胞包绕及浸润,胆管上皮细胞内空泡形成、上皮细胞凋亡。病理改变明显比术后3 d严重;急性排斥组患者术后3 d和7 d外周血Th17细胞比例及血清中IL-17含量较稳定组和对照组均明显增多（P〈0.05）,且Th17细胞及IL-17在术后急性排斥期7 d值均明显高于3 d（P〈0.05）。结论 Th17细胞及IL-17在肝移植急性排斥反应的发生、发展中可能起着促进作用,外周血Th17细胞及IL-17的检测有可能成为肝移植急性排斥反应的早期诊断指标。     

胎肝造血干细胞在扩散盒培养条件下移植特性的变化

经体内扩散盒培养6d 后的 LACA 小鼠胎肝细胞移植给照射的同系成年小鼠,造血干细胞在受体脾脏和骨髓中的有效植入率比正常胎肝细胞明显提高。但这种效果在同种异基因受体小鼠中则完全消失。实验结果表明,个体发育屏障和移植免疫屏障是决定同种胎肝移植能否成功的两个重要因素。胎肝细胞经体内或体外培养后可以模拟造血干细胞在体内的发育成熟,从而增强对成年造血微环境的适应性。用短期体内培养的方法,可以改变胎肝造血干细胞的某些生理特性,从而减弱个体发育屏障,但不能克服胎肝同种移植中的免疫性抗力。为了保证同种胎肝移植的成功,必须进一步同时克服两种屏障。     

肝细胞癌肝移植患者血清miR-221检测及其临床意义

目的:探讨肝癌患者肝移植手术前后血清中miR-221的表达变化及其临床意义.方法:选择2009年6月至2011年8月在我院行肝移植手术的42例肝癌患者、26例肝良性疾病患者和40例正常对照组人员为研究对象,采用实时荧光定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)对比检测移植前后患者血清中miR-221的表达水平.根据肝移植术前患者血清miR-221表达水平的平均值作为划分标准,将36例患者分为高表达组和低表达组.分析miR-221的表达与移植术后肿瘤复发和转移的关系.结果:原发性肝癌患者血清miR-221表达水平明显高于正常对照组(P＜0.05).移植术后患者血清miR-221的表达显著降低(P＜0.01).术前血清miR-221水平与肝移植术后HCC转移/复发情况密切相关.高表达组肝移植患者术后肝癌转移/复发率明显高于低表达组患者(P＜0.05);术后6月内肝癌复发患者血清miR-221水平显著高于未复发者(P＜0.05).结论:血清miR-221表达水平与肝癌肝移植术后肿瘤复发和转移密切相关,有可能成为肝癌肝移植预后的评估指标.     

胎肝造血干细胞的移植特性

胚胎发育中,肝脏是一个重要的造血器官。近年来胎肝移植的临床应用重新引起了人们的关注。本文应用染色体的 C-带染色法研究了小鼠骨髓和胎肝造血干细胞在照射受体小鼠中的增殖能力与相互间的竞争作用。实验结果表明胎肝造血干细胞在成年骨髓中的植入率比较同样条件下的成年骨髓造血干细胞低,但胎肝造血干细胞比较成年骨髓造血干细胞具有更强的自我更新或增殖能力。在同种胎肝造血干细胞移植中,为了降低同种移植抗力,提高移植的胎肝造血干细胞在受体中的耐受性,移植前对受体作适当的免疫抑制处理是必要的。因此,克服个体发育屏障和移植免疫屏障是提高同种胎肝造血干细胞移植效果中两个重要的研究课题。     

大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立与评价

目的：建立大鼠肝脏移植急性排斥反应模型,并对所建模型进行评价。方法：采用改良Kamada“二袖套”法,以近交系大鼠Dark Agouti（DA）为供体、Lewis（LEW）为受体（A组）建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型,通过观察手术情况、生存情况及肝功能和病理学检查对此模型进行评价,同时以LEW→LEW作为对照组（B组）。结果：手术成功率为91.3%;手术时间为（90.70±5.68）min;无肝期时间（9.96±1.19）min;平均存活时间A组为（12.44±3.43）d,B组超过100d;A组血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶及血清总胆红素术后不断升高,在第10～14d最为明显,血清白蛋白在术后第3d开始逐渐降低,在相同时相点,与B组相比差异显著;A组移植肝脏病理检查有明显的排斥反应,而B组没有。结论：DA→LEW为稳定、强烈的大鼠肝移植急排模型,是研究肝移植排斥及免疫耐受的理想动物模型。     

HIF-1α的表达在肝移植后肝癌复发与转移中的意义

目的:探讨肝癌组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达与肝癌行肝移植治疗后肿瘤复发与转移之间的关系.方法:选择肝癌行全肝移植患者45例,应用免疫组化方法检测其切除的肝癌组织、癌旁组织中HIF-1α的表达,分析其表达与移植后肝癌复发与转移之间的关系和意义.结果:肝癌组织中HIF-1α阳性表达率明显高于癌旁组织(X<'2>=6.39,P<0.01).HIF-1α在肝癌组织中的表达与肿瘤直径、TNM分期、有无淋巴结转移、有无门静脉癌栓及肿瘤播散灶密切相关(P<0.01).复发转移组和未复发转移组HIF-1α阳性表达率比较,差异存在显著性(X<'2>=8.46,P<0.01).Cox回归多因素分析表明HIF-1α高表达是影响肝癌患者肝移植后肿瘤复发和转移的独立预后因素(P<0.01).结论:HIF-1α蛋白有望成为一个预测肝癌患者肝移植后复发和转移的重要指标.     

壳聚糖纳米基因载体介导IL-10和HGF基因重组体在大鼠活体肝移植中的研究

目的：研究hIL-10和HGF重组体对大鼠活体肝移植术后急性排斥反应的抑制作用。方法：以DA大鼠（RT1a）为供体．Lewis大鼠（RT11）为受体建立异种肝移植鼠模型,实验组于移植后1天及7天,腹腔内注射T—HGF和T-hIL-10重组体（100μg／ml）100μl,对照组注射等量生理盐水。移植后1,7,10,20天取大鼠尾静脉血,ELISA法测定血清HGF、IL-10水平,RT-PCR测定肝细胞HGF、IL-10m RNA的表达水平,常规肝功能测定,活体肝移植动物生存期观测。结果：实验组鼠肝细胞有HGF和IL-10 mRNA表达,对照组肝细胞未见表达。对照组大鼠HGF和IL-10水平一直维持在较低水平,实验组大鼠HGF和IL-10水平明显高于对照组（P〈0．05）。注射重组体的实验组平均生存时间为（19±0．9）天,20天时存活只数为6只,存活率75％;对照组平均生存时间为（8．6±0．5）天,20天时存活只数为2只,存活率75％（P〈0．05）。对照组未注射重组体,ALT和AST值持续升高,注射重组体后ALT和AST值亦有升高,但明显低于对照组（p〈0．05）。结论：活体肝移植大鼠导入IL—10和HGF基因重组体后可抑制移植术后急性排斥反应．     

壳聚糖纳米基冈载体介导IL-10和HGF基因重组体在大鼠活体肝移植中的研究

目的:研究hIL-10和HGF重组体对大鼠活体肝移植术后急性排斥反应的抑制作用.方法:以DA大鼠(RTla)为供体,Lewis大鼠(RTll)为受体建立异种肝移植鼠模型,实验组于移植后1天及7天,腹腔内注射T-HGF和T-hIL-10重组体(100μg/ml)100μl,对照组注射等量生理盐水.移植后1,7,10,20天取大鼠尾静脉血,ELISA法测定血清HGF、IL-10水平,RT-PCR测定肝细胞HGF、IL-10mRNA的表达水平,常规肝功能测定,活体肝移植动物生存期观测.结果:实验组鼠肝细胞有HGF和IL-10mRNA表达,对照组肝细胞未见表达.对照组大鼠HGF和IL-10水平一直维持在较低水平,实验组大鼠HGF和IL-10水平明显高于对照组(P＜0.05).注射重组体的实验组平均生存时间为(19+0.9)天,20天时存活只数为6只.存活率75%;对照组平均生存时间为(8.6±0.5)天,20天时存活只数为2只,存活率75%(P＜0.05).对照组未注射重组体,ALT和AST值持续升高,注射重组体后ALT和AST值亦有升高,但明显低于对照组(p＜0.05).结论:活体肝移植大鼠导入IL-10和HGF基因重组体后可抑制移植术后急性排斥反应.