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1.
BrdU被细胞吸收后可结合到染色体DNA
上,由于被BrdU标记的DNA对光极为敏感F91
因此可引起染色体结构的损伤。BrdU 还可抑
制细胞核着酸还原酶的活性,导致细胞死亡11770
尽管如此,有些细胞却能在含高浓度BrdU的培
养基中繁殖传代,其原因可以是细胞缺乏胸营
激酶(TK)活性[[1+1;细胞的BrdU吸收系统有
缺陷(a);细胞因核营酸代谢失去平衡而获得
BrdU 抗性[31。抗性细胞的DNA有的是部
分[701、有的是全部191被BrdU标记。某(些)染
色体的特异性改变是否与BrdU抗性有关?目
前的资料表明,BrdU抗性细胞的染色单体断
裂频率较高[1a1,或染色体数很不稳定[’];但许多
BrdU抗性细胞株染色体平均数等于或略低于
亲本细胞的水平,染色体G一带图样没有明显的
差异131。因此,尚未发现BrdU抗性细胞有染
色体的特异性改变。少数药物抗性细胞蛋白质
合成过量的现象已引起人们很大的兴趣[1a,is7
BrdU抗性细胞是否也会出现蛋白质过量合成
的现象? 我们过去报道了通过高浓度的BrdU
加可见光处理获得4个抗BrdU 亚系[11,本文
报道这4个抗性亚系细胞第17号染色体有极高
的加倍频率,以及某些胞质可溶蛋白过量合成
的现象,这些均未见报道。
姐妹染色单体互换((SCE) 是反映正在进
行复制的染色体损伤和修复过程的一个极为敏
感的指标110,131。由于BrdU抗性细胞长期在含
高浓度BrdU 的培养基中生长,BrdU进人细
胞后便均匀地分布在姐妹染色单体DNA 上,
已达到某种程度的相对平衡状态,因此不可能
出现姐妹染色单体差别染色。本文报道采用特
殊的方法所观察到的BrdU抗性亚系SCE频
率,以及第17号染色体加倍对细胞SCE频率
的影响。除了我们过去报道的一个抗性亚系
SCE[a1外,尚未见其他关于BrdU抗性细胞SCE
的报道。 相似文献
2.
从中国仓鼠细胞株Wg3h中,通过BrdU处理获得了两个抗30μg/ml BrdU和两个抗60μg/ml BrdU的抗性细胞亚系。银染NORs(Ag-NORs)的分析表明,除了一个抗性细胞亚系外,其他3个亚系NORs的活性都明显地被BrdU所抑制,即主要是表现在细胞Ag-NORs数和携带Ag-NORs染色体数的明显减少。不同BrdU抗性亚系NORs活性被抑制的程度可有很大的差异。在培养基里除去BrdU后,抗性细胞被BrdU抑制的NORs活性可以逐步得到恢复,但其恢复的速度显然比Wg3h细胞缓慢得多。抗性细胞NORs活性受抑制,与Wg3h细胞一样,是由于BrdU毒性的缘故。 相似文献
3.
该文采用家蚕Bomoyx mori活体注射BrdU结合FPG(fluorochrome photolyusis Giem-sa)显带方法,以生殖腺为材料,成功显示出家蚕有丝分裂中期染色体复制带。由于处于S-期的细胞有早有晚,且同一细胞DNA各片段的复制亦有先后,因此BrdU掺入DNA合成的时间也有所不同,从而可产生出早、中、晚复制带型。BrdU掺入时间早,则会在家蚕部分染色体上出现大面积浅染带纹的早复制带。每一染色体皆有其独特的带纹特征,据此可初步将它与其它染色体相互区分;随着BrdU掺入时间的推后,染色体上会出现深浅交替、丰富的带纹,即中复制带型;至S-期DNA合成晚期掺入BrdU,最终染色体出现以深染带纹为主,浅染带纹仅出现于少数染色体的中部、近中部或端部的晚复制带。 相似文献
4.
胸腺嘧啶类似物5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记技术是一种研究DNA复制、修复等生命过程的有效手段。由于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中缺少胸腺嘧啶核苷酸补救途径,胞外BrdU不能有效的渗入到基因组中,使该技术在酿酒酵母中的应用受到极大制约。通过在基因组中引入单纯疱疹病毒胞苷激酶(HSV-TK)和人类平衡核苷转运蛋白(hENT1)基因,工作建立了BrdU标记酵母基因组DNA的方法。在生长对数中期加入0.2mg/ml BrdU,离体检测法检测发现,标记3h的荧光信号较1h、5h时强;胞内检测法结果显示,标记3h时55.3%的基因组DNA中能够渗入BrdU。该工作为酿酒酵母DNA复制、修复等方面提供了直接有效的研究方法。 相似文献
5.
6.
FLT3配基在人骨髓基质细胞系中的基因转移与表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究逆转录病毒介导的FL在骨髓基质细胞系HFCL中的表达。方法:采用脂质体法将重组质粒pLF-SN/HFCL和空载体pLXSN/HFCL转染包装细胞PA317,G418筛选抗性克隆,用抗性克隆上清液感染HFCL。RT-PCR和基因组DNA-PCR检测外源基因mRNA水平的表达及染色体的整合,小鼠CFU-GM集落法检测FL生物学活性。结果:在mRNA水平上有FL的表达,染色体基因组中整合有标记neo基因和FL基因。活性测试结果显示转染的骨髓基质细胞分泌FL。结论:提示骨髓基质细胞可作为基因治疗的靶细胞。 相似文献
7.
一、前言 所谓DNA探针是指能识别特异碱基序列(基因)的有标记的一小段单链DNA分子,即是一段与被测定的核苷酸序列(靶序列),互补的带标记的单股脱氧核糖核苷酸。 相似文献
8.
艾菲的咔啉(aphidicolin)能抑制真核生物细胞核内的a-多聚酶,同时还能诱导中国仓鼠细胞核内DNA分子的内复制,由此形成的双份染色体经5-溴脱氧尿苷(BrdU)标记,单股BrdU替换的染色单体总是位于双份染色体的内侧,而双股BrdU替换的染色单体总是位于双份染色体的外侧。DNA分子在内复制的过程中,经交换重组,表现在双份染色体上为姐妹染色单体内的交换和非姐妹染色单体间的交换。双份染色体中的4条染色单体在有丝分裂中前期,从三维空间构型变为平面构型时,在引力和张力的相互作用下,致使染色单体在交换处发生扭曲,成形染色单体间的交叉,从而使有直接亲缘关系的染色单体仍成对联系在一起呈规则分布状态。 相似文献
9.
本文的目的在于探索一个简便而准确地测定单个染色体DNA含量的方法。作者选用蚕豆(Vicia faba,2n=12)根尖细胞做材料。第一步用Feulgen染色及显微吸收光度术测得该品种二倍体胞核DNA含量力36.15皮克(微微克,第二步用DNA特异性荧光染料——DAPI标记该细胞的染色体,然后在UNIVAR显微荧光计上测量各条染色体的荧光强度。经简单换算和统计学处理求得六对染色体DNA分布:9.27、5.03、4.71、4.47、4.26、3.91皮克(微微克)。 相似文献
10.
X染色体发生X染色体失活 ,但是Xp基因有 30 %表现为逃逸 ,而Xq仅不到 3%。为了研究X染色体基因失活和表达逃逸发生和维持的分子机制 ,比较了Xq和XpDNA序列的RNA模拟结合强度。X染色体的核苷酸序列被分为 5 0kb一段 ,对每一段DNA做 7碱基 (7nt)字符串组合分析 (共有 4 7=16 384种组合 ) ,记录每段 5 0kbDNA中每种 7nt字符串的频率。选择生发中心B细胞中的 12 0个高表达基因 ,计算这些基因的内含子 7nt字符串的出现频率 ,称为intron 7nt,以此作为RNAs(RNA群 ,模拟细胞中RNA在小片段的总和 )。已知一段DNA序列的 7nt频率值和intron 7nt,即可以计算该DNA段与intron 7nt的结合强度。每段 5 0kbDNA与intron 7nt的结合强度取决于该DNA段与intron 7nt互补核苷酸的频率 ,互补的核苷酸序列越多 ,结合强度就越大。DNA段与intron 7nt的模拟结合强度称为RNA结合强度 ,试图模拟该段DNA可以结合的RNA小片段的总量。之所以采用 7nt字符串组合分析是考虑到连续 7个核苷酸互补则可以形成相对稳定的结合。研究发现 :1)Xp各DNA段的RNA结合强度均值显著大于Xq (P <0 0 0 1) ;2 )Xp上高结合RNA的DNA段数目显著高于Xq (P <0 0 0 1) ;3)RNA高结合DNA段形成的簇与X染色体基因表达逃逸区关联。有证据表明 ,RNA可以通过改变染色质 相似文献
11.
用BrdU标记DNA的ABC免疫细胞化学方法,观察雌性蒙古百灵端脑神经前体细胞的产生和分布特点,并与白腰文鸟作比较。结果如下:1.在百灵和白腰文鸟胸肌注射BrdU短时程组(存活1天),在端脑室带区外侧壁(LVZ)有大量的标记细胞,新生神经细胞起源于端脑室带区(VZ)中的增殖细胞层,并在纹状体腹侧的VZ形成标记细胞增殖热点,如在百灵和白腰文鸟靠近中缝线处的外侧纹状体(LSt)与内侧纹状体(MSt)腹侧的LVZ形成标记最多的‘第1增殖热点’区;在靠近中缝线处LVZ的头端形成密集的新生标记细胞,形成‘第2增殖热点’区;在百灵LSt尾端的LVZ标记细胞形成‘第3增殖热点’,但白腰文鸟此脑区的标记细胞较少。2.在百灵胸肌注射BrdU长时程组中5天起,大量的LVZ的标记细胞开始迁移,存活5-30天期间在高级发声中枢(HVc)和高位发声运动中枢-古纹状体栎核(RA)有新生标记细胞,在端脑靠近LVZ的区域有较多的标记细胞。但在雌性白腰文鸟胸肌注射BrdU存活30天期间,在HVC、RA内未见到标记细胞。结果提示雌百灵端脑HVc和RA不断地产生新生神经细胞,这可能与雌性需要不断地感知、识别雄百灵鸣唱的新语句有关,而白腰文鸟不需要这种功能。 相似文献
12.
为了在细胞世代中保持其稳定性,染色体起码应具备3个结构要素,那就是有一个DNA复制起点;一个着丝粒(ccntromere)使细胞分裂时两个姊妹染色单体能平均分配到子细胞里;最后,在染色体的两个末端必须有端粒(telomere),使DNA能完成复制。近年来人们采用分子克隆技术把真核细咆染色体的复制起点、着丝粒和端粒的DNA片段分别克隆成功。并且把它们互相搭配或改造而构成所谓“人造微小染色体”(aftificial minichromosomes),以研究这3种成分的结构与功能。 一、染色体复制起点 大肠杆菌质粒pBR322不能转化酵母细胞,因为pBR322上的DNA复制起点不能被酵母系统所识别,DNA不能复制。1979年Stinchcomb和Carbon实验室分别把带有遗传标记,例如Trp~+的酵母DNA的EcoRI片段插入pBR322,用来转化trp~-酵母,获得了带有质粒并能传代的Trp~+细胞。它们所含的质 相似文献
13.
染色体畸变是恶性肿瘤细胞的重要遗传学特征, 文章旨在应用BAC DNA克隆鉴定食管癌细胞中的染色体臂和染色体区段的畸变。针对染色体各区段选取5~10个1 Mb BAC DNA, 分别混合制备成特定染色体区段的BAC DNA混合克隆, 然后将染色体臂上覆盖所有区段的上述混合克隆进一步混合制备成特定染色体臂BAC DNA混合克隆。利用简并寡核苷酸引物聚合酶链反应(Degenerate oligonucleotide primed PCR, DOP-PCR)标记染色体臂探针, 利用切口平移法(Nick translation)标记染色体区段探针, 并对食管癌细胞中期染色体进行荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization, FISH)分析。正常人外周血淋巴细胞中期染色体FISH结果显示, 上述方法标记的探针具有较高的特异性。进一步利用染色体臂混合探针, 确定了多个食管癌细胞中的染色体重排所涉及的特定染色体臂; 利用染色体区段混合探针, 鉴定出KYSE140的t(1q;7q)衍生染色体中1q上的断点范围位于1q32-q41。文章成功建立了1 Mb BAC DNA混合克隆探针标记技术, 并鉴定出多个食管癌细胞中的染色体臂和染色体区段畸变, 不仅为利用M-FISH技术鉴定肿瘤细胞中的染色体畸变提供了更为准确的方法, 而且还可能进一步将该法推广应用于恶性血液病的核型分析以及产前诊断。 相似文献
14.
目的 以标记在人巨细胞病毒(HCMV)DNA上的BrdU为示踪剂,研究病毒在受染HEL细胞中的移动过程;同时结合病毒蛋白pp65的表达探讨病毒复制、增殖的过程。方法 以BrdU标记的HCMV(MOI=4)感染HEL细胞,分别选取感染后2h、4h、6h、24h及48h 5个时间点的细胞,用抗BrdU单克隆抗体,研究病毒核酸的胞内定位;同时用抗HCMV蛋白pp65的单克隆抗体检测此蛋白的表达及分布。结果 免疫细胞荧光染色结果提示:在感染5个时间点,病毒DNA依次位于胞质、胞核及同时位于胞核和胞质;蛋白pp65的表达及分布规律为:胞内无表达、胞核分布、胞核与胞质同时分布及巨细胞和融合细胞内分布。结论 以BrdU为标记物标记双链DNA病毒核酸不仅为研究HCMV.的胞内移动提供了良好的模型,同时也为其他病毒的研究提供了良好的工具;本实验结合HCMV蛋白pp65的表达和分布直观地反应了HCMV感染HEL细胞并在其中复制、增殖的过程。 相似文献
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16.
专利为鉴别和分离真核寄主基因库中目标DNA的同源重组法(Ⅰ),包括:(a)制备真核细胞DNA基因库,其中可发生导入DNA与寄主细胞现有DNA间的重组;(b)导入在真核寄主细胞中可复制并含选择性标记基因,与目标DNA部分同源的DNA序列的目标DNA载体质粒YIp;(c)重组;和(d)选择转化体。专利还包括:(1)用(Ⅰ)分离到的哺乳动物、人或植物DNA或基因;(2)带至少缺失1个选择性标记染色体的酿酒酵母TD7-16d、IV-16d和MGD131-10;(3)质粒p184DLARG及其功能性等同物;(4)在 相似文献
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18.
荧光原位杂交技术在染色体结构研究中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
1969年 Gall和 Pardue首先用同位素标记的 RNA探针定位特定的靶 DNA序列 ,开创了原位杂交技术 ,但同位素探针的高背景限制了它对靶序列的精确定位 ,随后发展了一系列非同位素方法 ,最初有生物素探针 ,用荧光素标记亲合素 ,酶联反应或胶体金检测 ,其他包括乙酰氨基荧光素 ( AAF) ,汞 ,地高辛 ( DIG)和 2 -三硝基酚等。荧光原位杂交 ( fluorescence in situ hybridiza-tion FISH)技术就是指将 DNA探针用特殊修饰的核苷酸分子标记 ,通过原位杂交与靶染色体或 DNA上特定的序列结合的方法学 ,靶染色体通常固定在载玻片上 ,杂交结果用荧… 相似文献
19.
BrdU-Hoechst-Giemsa方法的进一步改进以及青鱼和草鱼复制带核型的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
对BrdU-Hoechst-Giemsa方法进行了一定的改进和补充;并将它应用于青鱼和草鱼的核型研究中。实验进一步阐明,BrdU-Hoechst-Giemsa方法的关键性步骤之一是要先测算实验鱼的细胞周期;BrdU、AMD、Hoechst 33258,EB和AO虽都有抑制鱼类染色体浓缩、促进染色体分带的作用,但其中以DNA碱基特异性给合物BrdU、AMD和Hoechst 33258较佳,特别用AMD和Hoechst 33258同时处理活细胞的分带效果最好。 相似文献
20.
当培养基中BrdU浓度提高至9—30μg/ml时,会使中国仓鼠二倍体细胞和细胞株wg3h的银染NORs(Ag-NORs)总数明显减少。不同浓度的BrdU对中国仓鼠细胞NORs活性影响的研究表明,中国仓鼠细胞NORs活性受抑制的程度随培养基中BrdU浓度的提高而加强,还与BrdU处理的时间有密切的关系。这些细胞在无BrdU的培养基里继续生长30小时后,它们的NORs活性可以得到恢复。BrdU对中国仓鼠细胞NORs活性的抑制作用很可能是一种毒性效应。本文还对BrdU抑制中国仓鼠细胞NORs活性的机制进行了初步的讨论。 相似文献