抗稻瘟病重组水稻

《日经生物技术》１９９９年４月１２日第１０页报道：日产化工工业公司和东京大学分子细胞生物学研究所小组成功地开发出抗水稻主要病害之一稻瘟病的重组水稻。研究组所使用的基因是独自从水稻花药中克隆出的ＮＡＤＨ依赖性还原酶基因ＹＫ１。目前从玉米中分离出ＮＡＤＨ依赖性ＨＣ毒素还原酶基因。该基因可还原、解毒北方斑点病菌所产生的ＨＣ毒素,并能用于植物抗病性改良。据说将ＮＡＤＨ依赖性还原酶基因导入植物体赋予抗病性大约还是第一次。详细成果４月４日在宇都宫市召开的日本育种学会上发表。对ＹＫ１导入水稻系统进行稻瘟病（レ…     

转基因培育抗除草剂水稻

以ｐＡＨＣ２０（含Ｂａｒ基因）和ｐＷＲＧ１５１５（含ＧＵＳ基因和潮霉素抗性基因）以及含Ｂａｒ基因和雪莲凝集素（ＧＮＡ）基因的ｐＣＡＭＢＩＡ３３００ ＲＧ为供体ＤＮＡ,选用水稻品系８７２０３、上农香糯及鄂宜１０５的成熟胚诱导出的愈伤组织及微不定芽为受体材料,分别采用基因枪和根癌农杆菌（ＬＢＡ４４０４,含ｐＡＬ４４０４）导入法进行基因转化;经抗性筛选、ＧＵＳ检测和ＰＣＲ分析。结果表明,外源基因已通过基     

由反转录病毒载体转移的马立克病毒糖蛋白D基因在感染细胞中的表达

用ＥｃｏＲＩ、ＰｓｔＩ将已分离和克隆的马立克氏病病毒糖蛋白Ｄ基因从重组ｐＭｇＤ１８质粒中切出,克隆进反转录病毒质粒载体（ＲＣＡＳ）的连接质粒载全ＰＵＣＣｌａ１１２Ｎ的相同位点。用ＣｌａＩ再次ｇＤ基因切出,构建于ＲＣＡＳ的ＣｌａＩ位点。通过原位杂交筛选重组ＲＣＡＳ,并结合酶切分析鉴定出ｇＤ插入方向正确的重组ＲＣＡＳ。用磷酸钙沉淀法将ｇＤ重组ＲＣＡＳ转染鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）,转染后第９天收集细胞上     

逆转录病毒载体介导诱导型NO合酶在神经细胞中表达

为了深入研究诱导型一氧化氮合酶基因表达产物在阿片耐受和依赖中作用,采用脂质体介导基因转染技术,将ｉＮＯＳ ｃＤＮＡ重组逆转录病毒载体导入ＮＧ１０８－１５神经细胞,获得Ｇ４１８抗性克隆,命名为ＮＧ－ＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞。ＤＮＡ印迹杂交,ＰＣＲ扩增及ＲＴ－ＰＣＲ和蛋白质免疫印迹杂交分析,证实ＮＧ－ＬＮＣＸｉＮＯＳ细胞有外源ｉＮＯＳ基因整合,转录和表达;ＮＡＤＰＨ黄递酶（ＮＡＤＰＨ ｄｉａｐｈｏｒａｓｅ     

利用花色素苷合成调节基因C1—R作为基因抢转化效果指示的研究

报道了玉米花色素苷合成调节基因Ｃ１－Ｒ在小麦幼胚、玉米愈伤组织、小稻愈伤组织、烟草叶片中的瞬时表达情况。由于调节基因Ｃ１－Ｒ激活了植物体细胞内花色素苷的合成,因此不需任何生色底物,即可活体观察到花色素苷的表达。结果表明,对于目前仍主要通过基因枪法转化的几类主要粮食作物－小麦、玉米、水稻、枪击４８ｈ后,放大２位便清晰可见红色斑点,且其表达强度远高于ＧＵＳ的表达,证明Ｃ１－Ｒ可作为一个很好的衡量打枪效     

利用花色素苷合成调节基因C1-R作为基因枪转化效果指示的研究

报道了玉米花色素苷合成调节基因Ｃ１－Ｒ在小麦幼胚、玉米愈伤组织、水稻愈伤组织、烟草叶片中的瞬时表达情况。由于调节基因Ｃ１－Ｒ激活了植物体细胞内花色素苷的合成,因此不需任何生色底物,即可活体观察到花色素苷的表达。结果表明,对于目前仍主要通过基因枪法转化的几类主要粮食作物──小麦、玉米、水稻、枪击４８ｈ后,放大２倍便清晰可见红色斑点,且其表达强度远高于ＧＵＳ的表达,证明Ｃ１－Ｒ可作为一个很好的衡量打枪效果的指示,同时还证明其在双子叶植物──烟草叶片的基因枪转化瞬时表达体系中也起同样的作用。     

将菜豆几丁酶基因导入苹果砧木的研究

以苹果砧木八楞海棠（Ｍａｌｕｓｍｉｃｒｏｍａｌｕｓ）为实验材料,用微束激光穿刺法将菜豆几丁酶基因导入苹果叶片,成功地获得了转基因植株。实验结果表明,以苗龄２６天的小苗上部刚展开的叶片再生频率可达１００％。经高渗缓冲液预处理后用激光微束穿刺导入外源ＤＮＡ可得到较高的转化频率。在１５０个再生叶片中经卡那霉素筛选得到２５株绿苗,经ＰＣＲ扩增检测,３株呈阳性结果,表明外源几丁酶基因已整合到苹果的基因组ＤＮＡ中。     

组织培养与普通小麦异源易位系选育

以中国春小麦品种中８６０１、澳大利亚栽培小麦品种Ｓｕｎｓｔａｒ、Ｍｉｌｌｅｗａ作母本,与抗大麦黄矮病毒病（ＢａｒｌｅｙＹｅｌｌｏｗＤｗａｒｆＶｉｒｕｓ,简称ＢＹＤＶ）的小麦－中间偃麦草异附加系Ｌ１杂交,取杂种的幼胚和幼穗作离体培养,获得大量再生植株。经酶联免疫吸附分析（ＥＬＩＳＡ）、限制性内切酶长度多态性分析（ＲＦＬＰ）、染色体数目的检查和田间抗性鉴定,在再生植株回交后代中获得了抗ＢＹＤＶ的杂合易位株,经自交和花药培养纯合,选育出Ｄ１０９１、Ｄ１０９４、Ｄ１６５８、ＴＣ５、ＴＣ６、ＴＣ７等一批抗性稳定或基本稳定的普通小麦选系。以白黑麦６Ｒ二体附加系为抗源,与严重感染白粉病的陕７８５９杂交,经幼胚培养在再生植株回交后代中筛选到白粉病免疫的普通小麦杂合易位系。研究结果表明：在小麦远缘杂交中,组织培养可以作为导入外源基因产生易位的手段之一加以利用。     

葡萄抗病无核胚挽救育种及分子标记辅助选择

以欧洲葡萄无核品种为母本,中国野生葡萄双优、欧山杂种北醇及8个欧洲葡萄品种为父本共进行了16个组合的杂交,通过胚挽救技术获得胚挽救苗55个株系。利用无核基因特异引物GSLP1、抗黑痘病和抗炭疽病基因RAPD标记对杂种株系进行分子检测,杂种中检测出拥有无核基因RAPD标记的22株、拥有抗黑痘病基因RAPD标记的16株、拥有抗炭疽病基因RAPD标记的9株。在这些胚挽救杂种苗中,同时拥有无核、抗黑痘病、抗炭疽病基因RAPD标记的胚挽救苗4株,同时拥有无核和抗黑痘病基因RAPD标记的胚挽救苗9株,同时拥有无核、抗炭疽病基因RAPD标记的胚挽救苗1株。     

水稻HDAR细胞胚胎学研究─—不定胚的发生和发育

对水稻ＨＤＡＲ胚胎发育过程的进一步研究表明,水稻ＨＤＡＲ中有２．７２％（１７／４３４）的不定胚发生和发育,其不定胚起源于胚珠内的球心细胞,不定胚起始细胞启动分裂时,胚囊发育至２核或４核时期,８核胚囊时期胚珠内已形成多细胞不定胚结构,随后不定胚细胞不断分裂并逐渐挤进胚囊,开花传粉后,不定胚利用胚乳提供的营养可以继续发育和分化,不定胚可以和合子胚一起发育,有时合子胚败育,不定胚继续发育并分化。讨论了水     

葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ外壳蛋白基因的克隆

根据美国报道的葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ（ＣＬＲａＶ－３）ＣＰ基因序列,设计并合成一对引物,用ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲ对ＧＬＲａＶ－３进行检测,琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将其ＣＰ基因克隆到ｐＧＥＭ－３ｚｆ（＋）中,经双酶切和序列分析表明所克隆的是ＧＬＲａＶ－３ ＣＰ基因,它与美国分离物相应序列同源性为９４．１％。     

将水稻壳质酶基因导入烟草确认抗白粉病特性

农林水产省的农业生物资源研究所规划调整部规划科科长日比忠明和该研究所机能开发部微生物机能利用研究室西泽洋子等将从水稻分离的壳质酶基因导入烟草,烟草就获得白粉病抗性。打算明年开始封闭式温室实验。     

小麦抗白粉病基因Pm21的分子鉴定和标记辅助选择

利用小麦抗白粉病基因Ｐｍ２１的ＲＡＰＤ标记、ＳＣＡＲ标记和荧光源位杂交技术对小麦抗病育种材料中的抗白粉病Ｐｍ２１基因进行了分子鉴定和标记辅助选择。     

葡萄再生系统研究进展

综述近年来葡萄再生系统的研究进展及存在问题。葡萄器官发生型再生途径易产生不定芽 ,但嵌合体的比例较高 ,胚状体再生途径诱导胚状体较困难 ,仅有少部分葡萄品种能成功。今后葡萄遗传转化的重点是高效再生途径的研究。     

利用微束激光穿刺法将抗真菌基因导入棉花的研究初报

以棉花感受态萌动种胚作为外源基因转化的受体,用激光微束穿刺法将β-1,3-葡聚糖酶及几丁质酶双价基因导入棉花,所构建的植物表达载体pB IBGC携带有筛选标记npt-Ⅱ(新霉素磷酸转移酶)基因。激光转化处理的种胚经卡那霉素筛选,已经获得抗性小植株。研究了微束激光转化法用于棉花感受态萌动胚转化预培养的时间、高渗液对材料的处理等。研究表明:用微束激光转化处理种胚是一种操作简便、重复性好的转化方法,用该法可将外源基因导入植物感受态萌动胚,避开植株离体再生的困难。     

抗真菌的有益重组葡萄的开发

法国Moet Hennessy Louis Vuiton公司(MHLV公司)成功地开发出重组葡萄(这种重组葡萄耐真菌且可酿制有益于健康的葡萄酒)。 该公司所开发的是导入了乙烯合成酶基因的重组葡萄。导入该酶基因,目的是增加葡萄酒中的抗氧化物质、白藜芦醇含量。试管实验证明这种物质由于其抗氧化作用不仅能促进健康,而且还可使葡萄抗真菌。     

水稻几丁质酶基因RCH8创伤导转录及启动子功能分析

高等植物几丁质酶基因受病害侵染、真菌激发子、乙烯、机械创伤等诱导转录。我们已经测定过水稻Ⅰ类几丁质酶基因ＲＣＨ８的ＤＮＡ序列。为了研究水稻中与防卫反应有关的几丁质酶基因启动子的活怀、功能和表达调控。我们以ＲＣＨ８几丁质酶基因保守的编码区序烈 探讨针,分别在创伤处理２－２４ｈ后提取水稻叶片的总ＲＮＡ作Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交,发现创伤处理６ｈ可以检测到几丁质酶基因的表达,１２ｈ表达水平最高。合成了一个与     

云南松成熟胚的不定芽诱导及植株再生（简报）

诱导云南松不定芽的最佳基本培养基为ＤＣＲ,３ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ和０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ组合的ＤＣＲ培养基能有效地诱导不定芽,幼苗用含５ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的液体培养基浸泡２４－ｈ,能长根形成完整植株。     

抗菌肽B基因导入水稻及转基因植株的鉴定

构建了一个适合在水稻中表达的含有抗菌肽B基因的转化载体(pCB1),应用基因枪转化法将其导入水稻未成熟胚,获得了一些转基因水和植株.Basta抗性鉴定,抗菌肽B基因PCR扩增分析,点渍印迹和Southern印迹分析结果表明,选择标记基因(bar)和抗菌肽B基因都已整合入转化水稻基因组中,Northern印迹分析证实了抗菌肽B基因在RNA水平上的表达.转基因水稻植株增强了对水稻白叶枯病和细条病的抗性.     

用基因重组法育成抗条纹叶枯病水稻

日本农水省农研中心育种工程研究室大??义昭室长和农业生物资源研究所的研究人员,应用基因重组方法,成功地育成了抗条纹叶枯病的水稻.将目标基因导入水稻在世界上尚属首创,从而使基因重组技术的应用得到了很大的发展.该项研究成果于一九九○年