水杉愈伤组织诱导及植株再生

通过愈伤组织诱导器官发生途径, 建立了水杉(Metasequoia glyptostroboides)的植株再生体系, 探讨了不同外植体 (种胚、幼叶切块、茎段、根段)和植物生长调节剂对不定芽直接再生和愈伤组织诱导器官发生的影响。结果表明: 以种胚、无菌苗叶片、茎段和根作为外植体, 在MS补加2,4-D、NAA和6-BA不同组合的培养基上都能诱导得到愈伤组织, 其中种胚诱导愈伤组织效果最好, 诱导率可达100%, 茎诱导效果次之, 诱导率为97.1%。诱导愈伤组织效果较好的培养基有:MS+1.0 mg·L^–1 2,4-D + 0.5 mg·L^–1 6-BA、MS + 0.1 mg·L^–1 6-BA + 1.0 mg·L^–1 NAA、MS + 0.5 mg·L^–1 6-BA+1.0 mg·L^–1 NAA、MS+1.0 mg·L^–1 6-BA+1.0 mg·L^–1 NAA、MS+0.5 mg·L^–1 6-BA+2.0 mg·L^–1 NAA、MS+1.0 mg·L^–1 6-BA + 2.0 mg·L^–1 NAA和MS + 0.5 mg·L^–1 2,4-D + 0.5 mg·L^–1 NAA。以愈伤组织在MS培养基上植株再生效果最好, 再生率为62.5%。     

药用植物栀子的组织培养

栀子(Gardenia jasminoides)为药用木本植物。以栀子果皮、种子团和种子为外植体, 研究不同激素配比及不同培养方式对愈伤组织诱导和芽分化的影响。研究结果表明, 培养基成分为MS+0.5 mg·L^–12,4-D+0.25 mg·L^–16-BA较适宜果皮和种子愈伤组织的诱导, 诱导率分别为83.3%和88.5%; 培养基成分为MS+1.0 mg·L^–12,4-D+1.0 mg·L^–16-BA较适宜种子团愈伤组织的诱导, 诱导率为78.1%。3种外植体诱导的愈伤组织中, 只有种子愈伤组织能通过液体培养分化出芽; TDZ对芽分化有明显的促进作用; 最佳的芽分化培养基为MS+0.05 mg·L^–1NAA+0.10 mg·L^–1TDZ, 其愈伤组织分化率为8.75%。该研究以栀子种子为外植体, 并获得了再生植株, 为药用植物栀子转基因体系的建立奠定了基础。     

微型月季愈伤组织诱导及植株再生

选取微型月季(Rosa hybrida)幼嫩离体叶片(叶龄12天)为外植体, 以MS为基本培养基, 研究不同配比的植物生长调节剂对愈伤组织诱导、不定芽诱导和生根培养的影响。结果表明: (1) 诱导愈伤组织的最佳培养基配比为1.0 mg·L^–16-BA+3.0 mg·L^–12,4-D, 诱导率为100%; (2) 6-BA在微型月季不定芽诱导中起着关键作用, 诱导不定芽产生的植物生长调节剂配比为1.0 mg·L^–16-BA +(0.05–0.5) mg·L^–1NAA+(0.02–0.2) mg·L^–1TDZ, 其中最适配比1.0 mg·L^–16-BA+0.1 mg·L^–1NAA+0.02 mg·L^–1TDZ的愈伤组织再分化率达到92.6%; (3) 生长素对微型月季的生根有重要影响, 以1/4MS+0.1 mg·L^–1NAA为生根培养基可获得100%的生根率。实验最终建立了微型月季组织培养和高频离体再生体系。     

应用稀土调控藏红花胚性愈伤组织的生长与分化

为提高藏红花(Crocus sativus)胚性愈伤组织的繁殖系数与出芽率, 以建立藏红花离体快繁体系, 解决其资源短缺问题, 采用两步法, 用稀土调控其胚性愈伤组织的生长与分化。结果表明, 在添加了0.25 mg·L^–1 NAA、3 mg·L^–1 6-BA和400 mg·L^–1 CH的B₅固体培养基中, 0.04 mmol·L^–1 La³⁺促进胚性愈伤组织生长的效果最佳, 繁殖系数为12, 是不添加稀土处理组的1.48倍; 在添加了0.25 mg·L^–1 NAA、3 mg·L^–1 6-BA和400 mg·L^–1 CH的1/2 B₅固体培养基中, 0.06 mmol·L^–1 Ce³⁺促进胚性愈伤组织分化出芽的效果最佳, 出芽率高达84.5%, 是不添加稀土处理组的1.81倍, 且高于国外报道的出芽率(40%)。初步解决了藏红花胚性愈伤组织生长慢和出芽率低等问题, 为建立高效稳定的藏红花离体快繁体系奠定了基础。     

桂林小花苣苔离体快速繁殖技术

对抗结核植物桂林小花苣苔(Chiritopsis repanda var. guilinensis)进行离体培养与快速繁殖技术研究。结果表明: 桂林小花苣苔叶片外植体的最适初代诱导培养基为MS+0.5 mg·L^–16-BA+0.05 mg·L^–1IBA, pH8.0; 最适继代增殖培养基为 MS+0.1 mg·L^–16-BA+0.05 mg·L^–1IBA, pH6.0, 繁殖系数7.0/35天; 最适生根培养基为1/2MS+0.2 mg·L^–1NAA, pH6.0, 生根率为93.6%。模拟桂林小花苣苔自然生境, 在春季对生根试管苗进行大棚移栽, 成活率达90%。根据上述快繁技术, 理论上每株试管苗每年可繁殖桂林小花苣苔种苗46万株。     

多肉植物劳尔的组织培养

以多肉植物劳尔(Sedum clavatum)叶片为外植体, 通过诱导愈伤组织、愈伤组织分化新芽、芽生根和无菌苗移栽等步骤建立劳尔无菌苗快速繁殖体系。研究结果表明, 诱导劳尔叶片愈伤组织的最佳培养基为MS+3.0 mg·L^–1 6-BA+0.1mg·L^–1 NAA+1 mg·L^–1 KT, 诱导率达95.7%; 愈伤组织诱导分化新芽的最佳培养基为3/4MS+3.0 mg·L^–1 6-BA+0.3 mg·L^–1NAA, 分化率达80%; 芽生根的最佳培养基为1/2MS+0.03 mg·L^–1 NAA, 生根率可达94.89%; 采用珍珠岩:蛭石(1:2)作为基质移栽培养生根苗, 成活率达90%以上。实验成功建立了劳尔快速繁殖体系。     

马蔺幼胚高效再生体系的建立

以马蔺(Iris lacteal var. chinensis)幼胚为外植体,探究不同时期幼胚及不同植物生长调节剂对愈伤组织、体胚和不定芽诱导的影响。结果表明：在本试验条件下最佳取材时间为授粉后35～45 d,此时,幼胚发育完全但胚乳尚未完全硬化,幼胚剥取容易;愈伤组织最适诱导培养基为MS+1.0 mg·L^-1 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)+0.2 mg·L^-1 6-苄氨基嘌呤(6-BA),诱导率为83.33%;最适体胚诱导培养基为MS+0.25 mg·L^-1 2,4-D+0.05 mg·L^-16-BA,诱导率71.67%;最佳不定芽诱导和增殖培养基为MS+1.0 mg·L^-1噻苯隆(TDZ)+0.2 mg·L^-1萘乙酸(NAA),诱导率为78.33%,增殖系数为3.65;在添加0.1 mg·L^-1 NAA的MS培养基上诱导生根,4周后的生根率达95%以上;生根培养4周的植株清洗掉根部培养基后,移栽至经高温消毒的蛭石中培养,成活...     

宜昌百合胚性愈伤组织诱导及植株再生体系的研究

采用L₉（3⁴）正交试验等方法,以野生宜昌百合（Lilium leucanthum）鳞片为外植体,分别在光照和黑暗培养条件下,研究了TDZ、NAA、2,4-D不同浓度配比对宜昌百合的胚性愈伤组织诱导效果的影响,并采用石蜡切片技术对愈伤组织进行了的组织学观察。在此基础上,探讨了NAA对体胚苗壮苗生根的影响。结果表明：在光照条件下诱导胚性愈伤组织的最佳培养基为MS+TDZ 0.5 mg·L^-1+NAA 1.0 mg·L^-1+2,4-D 0.05 mg·L^-1,诱导率为62.690%;黑暗条件下诱导胚性愈伤组织的最佳培养基为MS+TDZ 0.5 mg·L^-1+NAA 1.5 mg·L^-1+2,4-D 0.1 mg·L^-1,诱导率为59.423%。胚性愈伤组织黄绿色或深绿色,颗粒状明显;非胚性愈伤组织松散易碎、呈水渍状,经石蜡切片观察可观察到胚性愈伤组织细胞核大、胞质浓,且细胞内含丰富淀粉粒,细胞直径为50~80 μm。非胚性愈伤组织细胞较大,未见明显细胞核,直径约为100~180 μm。体胚苗壮苗生根的最适宜培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg·L^-1+AC 1 g·L^-1,培养60 d后,幼苗移至草炭：蛭石：珍珠岩=1：1：1基质中,成活率为90%。本试验成功建立了宜昌百合鳞片胚性愈伤组织的再生体系,为宜昌百合利用胚状体进行无性育种以及种质资源的创新奠定了基础。     

黑木相思愈伤组织诱导及植株再生

以黑木相思(Acacia melanoxylon)优良单株(AMY12004)的当年新生枝条带腋芽茎段为外植体, 灭菌后接入MS培养基上培养, 以其无菌萌芽的叶片、茎段和叶柄为实验材料, 通过间接器官发生途径建立黑木相思愈伤组织诱导及高频植株再生体系。研究结果表明, 诱导愈伤组织的最佳外植体为茎段; 愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+1.5 mg·L–16-BA+0.2 mg·L–1NAA+3%蔗糖, 诱导率为93.33%; 愈伤组织再分化的最佳培养基为MS+2.0 mg·L^–16-BA+0.5 mg·L^–1NAA+3%蔗糖, 分化率为79.17%, 再生系数为9.58; 再生芽生根的最佳培养基为MS+0.5 mg·L^–1IBA+0.5 mg·L^–1NAA+4%蔗糖, 生根率为96.05%, 移栽存活率为81.40%。     

萝卜带柄子叶高频再生体系的建立

以11份萝卜(Raphanus sativus)基因型为材料进行子叶离体培养研究, 筛选出具有较高再生率的基因型进行实验, 考察基因型、外植体类型、激素配比和苗龄等因素对萝卜再生的影响。结果表明: 萝卜离体再生的最佳外植体为全子叶-叶柄, 最适苗龄为4天, 最适培养基为MS+6 mg·L^–16-BA+0.05 mg·L^–1NAA, 再生率高达86.95%, 再生系数为1.80。该研究为进行萝卜遗传转化实验奠定了良好基础。     

Regeneration of tepals,stamens and ovules in explants from perianth of Hyacinthus orientalis L. importance of explant age and exogenous hormones

Regeneration of tepals, stamens and ovules from perianth explants of Hyacinthus orientalis L. in different developmental stages could be controlled by means of exogenous hormones. Perianth explants in a relatively early stage of development were competent for differentiation of tepals on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with 2 mg·1^-1 N⁶-benzylaminopurine (BAP) or zeatin and 0.1 mg·1^-1 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). Perianth explants in a later stage of development regenerated stamens and ovules, and marked difference was observed in the activity of BAP and zeatin in this regard. Zeatin stimulated more strongly stamen formation, while BAP enhanced ovule formation. Thus, stamens were formed when the explants were cultured for four months on medium with 2 mg·1^-1 BAP and 0.1 mg·1^-1 2,4-D and then transferred to medium with 0.2 mg·1^-1 zeatin and 0.005 mg·1^-1 1-naphthaleneacetic acid. On the other hand, differentiation of ovules occured in explants cultured for two weeks on the former medium and then transferred to medium with 0.1 mg·1^-1 BAP and 0.01 mg·1^-1 2,4-D. Although ovule formation could also be obtained with 2 mg·1^-1 BAP alone, it was substantially enhanced by the presence of 0.1 mg·1^-1 2,4-D in the medium in the early stages of culture. The results demonstrate the importance of both the developmental stage of the source organ from which explants are excised and of the hormone composition of the medium for the regeneration of different floral organs by perianth explants of Hyacinthus.Abbreviations BAP N⁶-benzylaminopurine - 2,4-D dichlorophenoxyacetic acid - NAA 1-naphthaleneacetic acid     

In vitro hormone-regulated growth and floral induction of <Emphasis Type="Italic">Cuscuta reflexa</Emphasis>: a parasitic angiosperm

The role of different growth regulators in callus induction, shoot regeneration, floral induction and chlorophyll content of the obligatory parasitic plant Cuscuta reflexa has been studied. Callus development was excellent from the nodal part of the shoot explants in modified Murashige and Skoog (MMS) media supplemented with 2 mg L⁻¹ benzyl adenine (MMS1c). Supplementation of 2 mg L⁻¹ naphthalene acetic acid (NAA) along with MMS1c (MMS2c) was responsible for estimable shoot induction and development in callus. 2,4-Dichloro acetic acid (2,4-D) played a crucial role in the floral induction of C. reflexa in vitro. MMS supplemented with 2 mg L⁻¹ NAA and 2 mg L⁻¹ 2,4-D (MMS3b) supported floral induction after shooting in vitro. MMS supplemented with 3 mg L⁻¹ 2,4-D (MMS4a) rapidly induced flower directly from the stem explants without showing any elongation of shoot. MMS1c along with MMS3b (MMS5a) showed callus proliferation followed by shoot elongation and floral induction. In vitro MMS5a grown plants show a sharp increase in the chlorophyll contents. Cytokinin treatment further increases the chlorophyll level of the plant.     

马兜铃不含腋芽茎段不定芽的诱导

为建立马兜铃(Aristolochia debilis Sieb.et Zucc)不含腋芽茎段的不定芽诱导体系,采用正交设计方法研究植物生长调节剂、预培养方式和AgNO3对不定芽诱导的影响。结果表明:植物生长调节物质对不定芽诱导的影响以TDZ6-BAIAA,其中TDZ的影响极显著(P0.01),6-BA的影响显著(P0.05)。不定芽诱导的最适培养基为MS+0.5 mg L–1 TDZ+0.1 mg L–1IAA+0.5 mg L–1 6-BA+2 mg L–1 AgNO3+3%蔗糖+0.6%琼脂(pH 5.8);预培养方式为在MS+0.1 mg L–1 2,4-D+3%蔗糖+0.6%琼脂培养基上暗培养2 d。马兜铃不含腋芽茎段的不定芽诱导率最高可达37.5%。     

培养基成分和培养时间对匍匐翦股颖植株再生的影响

以匍匐翦股颖成熟种子为外植体,研究了培养基2,4-D浓度、2,4-D和6-BA组合配比、蔗糖浓度对匍匐翦股颖愈伤组织诱导的影响以及愈伤组织再生过程中继代时间、6-BA浓度、蔗糖浓度对愈伤组织分化的影响。结果表明:在MS培养基上,2 mg·L^-1 2,4-D和0.1 mg·L^-1 6-BA的组合最利于愈伤组织的诱导,诱导率高达94%。蔗糖浓度为30 g·L^-1时愈伤组织诱导率最高,为82%; 在再生过程中,当6-BA浓度为1 mg·L^-1时分化率最高(62%),蔗糖浓度为40 g·L^-1时,愈伤组织分化率最高(52%)。经过2次继代培养的愈伤组织(外植体放到培养基后40天)的分化率为最高(71%),随着继代次数增多,分化率逐渐降低,在经过5次继代后(培养100 d)分化率仅有18%。     

催吐萝芙木离体培养和植株再生体系的建立

为建立催吐萝芙木(Rauvolfia vomitoria Afzel.)的快繁再生体系,以茎段为外植体,比较了植物生长调节剂对其愈伤组织诱导、分化及生根的影响。结果表明,诱导愈伤组织的适宜培养基为MS+2,4-D 1.0 mg L~(–1)+TDZ 0.5 mg L~(–1)或MS+2,4-D2.0 mg L~(–1)+TDZ 0.5 mg L~(–1),出愈率达100%且生长状况良好;诱导丛生芽的最佳培养基为MS+6-BA 3.0 mg L~(–1)+NAA 0.1 mg L~(–1),出芽率为46.6%,平均出芽数为3.04。这为催吐萝芙木的快速繁殖和遗传转化研究奠定了基础。     

两个苏丹草品系成熟种子的组织培养和植株再生研究

该研究以苏丹草品系S722和Sa的成熟种子为外植体、MS培养基为基础培养基,2,4-D和NAA各3个浓度共6个处理对这两个苏丹草品系成熟种子进行愈伤诱导,探讨不同品系在不同植物生长物质浓度及植物生长物质组合中诱导愈伤组织和继代培养以及分化的能力。结果表明：苏丹草S722和Sa成熟种子的愈伤诱导率差异不显著,平均诱导率为17.19％。诱导培养基中2,4-D浓度为0.5或1 mg?L-1时,诱导效果最佳,而添加NAA不能提高愈伤诱导率。在继代培养中,设定2,4-D和6-BA各两个浓度共4个处理组合,处理1(2,4-D 1 mg?L-1＋6-BA 0 mg?L-1)的继代培养效果最佳。为了解不同植物生长物质对愈伤分化的影响,设定6-BA、NAA 各两个不同浓度、KT 3个不同浓度共5个处理组合对继代培养的愈伤进行分化培养。在5个处理中,处理1(6-BA 2 mg?L-1＋NAA 0 mg?L-1＋KT 0 mg?L-1)对 S722成熟种子诱导的愈伤分化率最高,达33.3％。在这两个苏丹草品系中,S722更容易分化培养。综上结果表明,2,4-D浓度为1 mg?L-1时诱导愈伤和继代培养效果较好,6-BA浓度为2 mg?L-1时分化效果较好。另外,针对不同苏丹草品系进行组织培养和植株再生时,适当调整植物生长物质浓度能提高植株再生的成功率。     

银杏愈伤组织诱导的多因子正交试验研究

采用正交试验设计法,研究了NAA、KT、2,4-D、蔗糖浓度和不同外植体类型等因素对银杏愈伤组织诱导的影响。结果表明:不同外植体类型对银杏愈伤组织诱导率影响最大,KT和NAA其次,2,4-D和蔗糖浓度最小。银杏愈伤组织诱导最佳培养基为MS+NAA 0.5 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+蔗糖40 g·L-1,最佳外植体为茎段,其愈伤组织诱导率可达100%。