文摘

文摘基因工程９８００９８血清中小型基因组ＤＮＡ片段的直接ＰＣＲ［英］／Ｓａｎｄｆｏｌｄ,Ａ．Ｊ．…∥ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．－１９９７,２３（５）．－８９０～８９２［译自ＤＢＡ,１９９８,１７（１）,９８－０００１９］开发了一种简易、快速的方法,...     

GM_3对小鼠腹腔巨噬细胞磷脂代谢转换率的影响

神经节苷脂ＧＭ_３对小鼠腹腔常驻巨噬细胞（Ｒ－Ｍ）和Ｇｅ－１３２体内激活的巨噬细胞（Ｇｅ－１３２－Ｍ）的磷脂代谢转换有显著的影响,当这两种Ｍ在体外用ＧＭ_３处理时,表现出［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇参入ＰＩ降低,参入ＰＩＰ、ＰＩＰ_２增加;但在［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］胆碱参入ＰＣ上,Ｒ－Ｍ与Ｇｅ－１３２－Ｍ不同,即ＧＭ_３促进同位素前体参入Ｒ－Ｍ的ＰＣ,抑制它们参入Ｇｅ－１３２－Ｍ的ＰＣ．以上结果表明ＧＭ３可能提高了ＰＩ或ＰＩＰ的磷酸激酶的活性,致使［￣（３２）Ｐ］ＰＩＰ和［￣（３２）Ｐ］ＰＩＰ_２增多,［￣（３２）Ｐ］ＰＩ减少．激活的Ｍ（Ｇｅ－１３２－Ｍ）本身ＰＣ代谢转换率较Ｒ－Ｍ高,当Ｇｅ－１３２－Ｍ再受ＧＭ_３刺激,ＰＣ代谢转换率降低,这提示ＧＭ_３对激活的Ｍ的ＰＣ代谢转换有调节作用．     

文摘

基因工程９８０１３４人工纤维状蛋白：一篇综述［英］／ＨｅｓｌｏｔＨ．／／Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ．－１９９８，８０（１）．－１９～３１［译自ＤＢＡ，１９９８，１７（１９），９８－０８２７８］从以下方面综述了人工纤维状蛋白（ＡＦＰｓ）：家蚕（Ｂｏｍｂｙｘｍｏ...     

文摘

文摘基因工程９８００４１用于检测原核和真核细胞中蛋白质表达的表位标记抗体重组［英］／Ｒｅｕｄｉｇｅｒ,Ｍ．…∥ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ．－１９９７,２３（１）．－９６～９７［译自ＤＢＡ,１９９７,１６（１９）,９７－０９７３５］建立了用于利用表位...     

［B1－Ala，B2－Ala］－胰岛素：受体结合特性及生物活力研究

本文报道了［Ｂ１～Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素与人胎盘细胞膜胰岛素受体结合的特性和体外生物活力,并与胰岛素进行比较。在３７℃和杆菌肽存在下,１２５Ｉ－［Ｂ１－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素和１２５Ｉ－胰岛素与人胎盘细胞膜作用依赖于反应时间,反应６分钟到达平衡,此时,［Ｂ１－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素和胰岛素与胰岛素受体的最大结合分别为每毫克膜蛋白结合６．４４ｆｍｏｌ和３．４７ｆｍｏｌ：达到平衡一半所需时间（Ｔ１／２）分别为１９秒和２５秒。用１２５Ｉ－［Ｂ１－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素作为放射配体进行竞争性结合研究,从ＩＣ（５０）得［Ｂ１－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］胰岛素的受体结合活力为胰岛素的１３９．６％。Ｓｃａｔｏｈａｒｄ分析求得;［Ｂ１－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素与高亲和和低亲和结合位点的结合常数在４℃时分别为５．８８×１０８Ｌ／ｍｏｌ和７．６３×１０５Ｌ／ｍｏｌ,而胰岛素分别为４．８３×１０８Ｌ／ｍｏｌ和３．３９×１０５Ｌ／ｍｏｌ。促脂肪细胞生成脂的实验表明：［Ｂ１－Ａｌａ,Ｂ２－Ａｌａ］－胰岛素的活力为胰岛素的１３０％。     

神经节苷脂GM_3对人白血病J6－2细胞磷脂酰胆碱代谢的影响

神经节苷脂ＧＭ３诱导人单核样白血病Ｊ６－２细胞沿单核／巨噬细胞途径分化．在ＧＭ３诱导分化同时,Ｊ６－２细胞磷脂代谢发生了显著变化．采用（（３２）Ｐ）Ｐｉ、［ＧＨ３－３Ｈ］胆碱和［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入实验对ＧＭ３影响Ｊ６－２细胞ＰＣ代谢的机制进行了初步的探讨．ＧＭ３促进［（３２）Ｐ］Ｐｉ参入Ｊ６－２细胞ＰＣ;抑制［ＣＨ３－３Ｈ］胆碱参入ＰＣ及ＰＣ合成的前体磷酸胆碱及ＣＤＰ－胆碱;ＧＭ３促进［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入ＰＣ,但抑制［ＣＨ３－３Ｈ］ＳＡＭ参入ＰＣ合成的前体胆碱、磷酸胆碱和ＣＤＰ－胆碱．上述结果提示,ＧＭ３抑制Ｊ６－２细胞ＰＣ合成的ＣＤＰ－胆碱途径,促进ＰＣ合成的ＰＥ甲基化途径．     

显示基因表达差异的PAGE—银染技术

ｄｄＲＴ－ＰＣＲ（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙ　ｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎ－ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术是Ｌｉａｎｇ和Ｐａｎｄｅｅ~（［１］）于１９９２年首先建立的一种在ＲＮＡ水平上显示基因表达差异,进而分离目的基因的有效方法。与其它分离基因的方法相比,ｄｄＲＴ－ＰＣＲ方法具有许多优点~（［２］）,目前已经成为筛选未知差异表达基因的最为有效的方法之一。ｄｄＲＴ－ＰＣＲ是３种技术的有机结合：（１）通过错定引物Ｔ１２ＭＮ（Ｍ＝Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｇ,Ｎ＝Ａ、Ｃ…     

［B3－Lys］－胰岛素的研究：受体结合及生物活性

本文用１２５Ｔ－［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和１２５Ⅰ－胰岛素研究了［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜（ＨＰＭ）胰岛素受体结合特性并进行了比较。实验结果表明［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＥＰＭ胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和猪胰岛素的ＩＣ（５０）值分别为０．６５和１．１１ｎｍｏｌ／Ｌ。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析得出［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＨＰＭ胰岛素受体中高亲和位点和低亲和位点结合的亲和常数分别为１．７２×１０９和２．２７×１０６Ｌ／ｍｏｌ,而猪胰岛素分别为１．２６×１０９和１．４７×１０６／ｍｏｌ。促脂肪细胞合成脂肪实验结果表明［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素也同样具有比天然猪胰岛素更高的离体生物活力,ＥＣ（５０）分别为０．１７５和０．３０１ｎｍｏｌ／Ｌ。可见［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素的受体结合能力和高体生物活力都为猪胰岛素的１．７倍。     

文摘

文摘基因工程９８０００１用荧光假单胞菌不同突变株接种的土壤中的微生物活性［英］／Ｋｏｚｄｒｏｊ,Ｊ．∥ＡｃｔａＭｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｐｏｌ．－１９９７,４６（１）．－５７～６３［译自ＤＢＡ,１９９７,１６（１８）,９７－０９３０９］研究了荧光假单胞菌...     

确证冬虫夏草无性型的分子生物学证据I.中国被毛孢与冬虫夏草之间的关系

从青海的冬虫夏草子实体上分离出中国被毛孢［Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｂｅｒｋ．）Ｓａｃｃ．］,并利用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术,筛选出８种引物,获得了冬虫夏草和中国被毛抱相应的基因组ＤＮＡ指纹图谱,两者相似率高达９６％,从而表明冬虫夏草的无性型为中国被毛孢。     

确证冬虫夏草无性型的分子生物学证据* I.中国被毛孢与冬虫夏草之间的关系

从青海的冬虫夏草子实体上分离出中国被毛孢［Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ（Ｂｅｒｋ．）Ｓａｃｃ．］,并利用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ技术,筛选出８种引物,获得了冬虫夏草和中国被毛抱相应的基因组ＤＮＡ指纹图谱,两者相似率高达９６％,从而表明冬虫夏草的无性型为中国被毛孢。     

短杆菌肽S与脂膜结合前后的H／D交换动力学的研究

短杆菌肽Ｓ（ＧＳ）是一个十肽分子（环－（Ｌ－Ｖａｌ－Ｌ－Ｏｒｎ－Ｌ－Ｌｅｕ－Ｄ－Ｐｈｅ－Ｌ－Ｐｒｏ）２）,是由两个β转角和两个β片层结构所构成［１］。ＧＳ的功能是通过破坏葛兰氏阴性菌的膜结构来完成其抗菌活性。迄今为止,人们对ＧＳ与膜结合特点的研究结果还不一致。Ｄａｔｅｍａｎ等人利用２Ｈ－ＮＭＲ,３１Ｐ－ＮＭＲ和ＤＳＣ等技术研究了ＧＳ与ＤＰＰＣ多层脂膜的相互作用,指出肽仅仅作用于膜表面［２］;而Ｈｉｇａｓｈｉｊｉｍａ等［３］及张凤立等用２Ｄ－ＮＭＲ的研究结果［４］表明,ＧＳ的疏水部分应插入膜内。蛋白质及多肽的Ｈ／Ｄ交换动力学受其分子内氢键,分子空间结构的致密度及其周边环境如膜环境［５］的影响。我们利用衰减全反射红外光谱（ＡＴＲ－ＦＴＩＲ）对与脂膜结合前后的短杆菌肽Ｓ的Ｈ／Ｄ交换动力学进行了研究,实验结果提示ＧＳ插入了脂膜双层。     

[B3—Lys]—胰岛素的研究：受体结合及生物活性

本文用＾１２５Ｉ－［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和＾１２５Ｉ－胰岛素研究了［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和胰岛素与人胎盘细胞膜胰岛素受体结合物性并进行了比较。实验结果表明［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＨＰＭ胰岛素受体结合能力比天然猪胰岛素高。由竞争取代曲线得到的［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素和猪胰岛素的ＩＣ（５０）值分另为０．６５和１．１１ｎｍｏｌ／Ｌ。经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分别得出［Ｂ３－Ｌｙｓ］－胰岛素与ＨＰＭ胰岛素     

蜘蛛抱蛋根茎中的甾体皂甙

从蜘蛛抱蛋（ＡｓｐｉｄｉｓｔｒａｅｌａｔｉｏｒＢｌ．）根茎的甲醇提取物中分离得两个甾体皂甙。经波谱解析及化学降解证明其化学结构分别为薯芋皂甙元一３一Ｏ－［Ｂ－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→２）］－［Ｂ－Ｄ－木吡喃糖基（１→３）］－Ｂ－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→４）－Ｂ－Ｄ一半乳吡喃糖甙（即蜘蛛抱蛋甙ａｓｐｉｄｉｓｔｒｉｎ）及新静诺特皂甙元－３－Ｏ－［Ｂ－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→２）］～［Ｂ－Ｄ－木吡喃糖基（１→３）－Ｂ－Ｄ－葡萄吡喃糖基（１→４）一Ｂ－Ｄ－半乳吡喃糖甙,后者为一新试,命名为新蜘蛛抱蛋甙ｒｅｏａｓｐｉｄｉｓｔｒｉｎ。     

甲状旁腺素对成骨样细胞增殖的调节作用

甲状旁腺素（ＰＴＨ）是调节钙磷代谢的经典激素,有报道ＰＴＨ对其靶细胞－成骨细胞有促增殖分化作用。经多层次、多水平的实验研究证实,ＰＴＨ对成骨样细胞ＲＯＳ１７／２．８确有促增殖作用。（１）细胞计数、ＭＴＴ［３－（４,５－ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａ－ｚｏｌ－ｚ－ｙｉ）２,５－ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｂｒｏｍｉｄｅ］测定及ＳＲＢ（ｓｏｄｉｕｍｒｈｏｄａｍｉｎｅＢ,ＳＲＢ）染色均显示经ＰＴＨ（１０－９ｍｏｌ／Ｌ）处理的细胞,其数目明显增加;（２）３Ｈ－ＴｄＲ参入增加;（３）与增殖相关的原癌基因（ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ、ｃ－ｋｉ－ｒａｓ和ｃ－ｍｙｃ）的表达增强;（４）成骨细胞特征性蛋白－碱性磷酸酶活性降低．这些结果不仅表明该激素具有非经典样作用,同时意味着激素也参与其靶细胞增殖分化的调节作用     

鼻咽癌Epstein—Barr病毒受体（EBVR／CR2）基因的病毒结合区的序列测定

Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究ＥＢＶ与鼻咽癌（ＮＰＣ）的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗ＥＢＣ受体（ＥＢＶＲ／ＣＲ２）单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中ＥＢＶＲ／ＣＲ２的基因结构仍需研究。我们采用ＰＣＲ扩增和不对称ＰＣＲ直接测序法,首次检测了１０例ＮＰＣ及３例正常人胚鼻咽上皮（Ｈｕｍａｎ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅ     

植物发育基因克隆技术的新进展

过去２０年,人们已经分离到了相当数量的与发育相关的基因。这主要借助于蛋白质产物的分离纯化,然后根据其氨基酸结构推算其相应的核苷酸序列,并据此合成寡核苷酸探针,最终从ｃＤＮＡ文库或基因组文库中筛选出目的基因。而未知其编码产物的发育基因的分离克隆则是非常困难的工作,以前广泛应用的主要方法有ＤＮＡ标签法（ＤＮＡｔａｇｇｉｎｇ）［１,２,３］,作图克隆法（ｍａｐ－ｂａｓｅｄｃｌｏｎｉｎｇ）［４］,差别筛选法（ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｓｃｒｅｅｎｉｎｇ）［５］和扣除杂交法（ｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）［６,７,８］。这些方法虽然都取得了一定的成功,但由于各自的缺陷性,而限制了它们更加广泛的应用。近年来在ＰＣＲ技术的基础上,人们已经建立了若干种分离克隆植物发育基因的新方法。１９９２年,ＬｉａｎｇＰ和ＰａｒｄｅｅＡ［９］首次提出并运用了ｍＲＮＡ差别显示技术（ｍＲＮＡｄｉｆ－ｆｅｒｅｎｔｉａｌｄｉｓｐｌａｙｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ＰＣＲ,ＤＤＲＴ－ＰＣＲ）来进行基因的分离。实践表明,ｍＲＮＡ差别显示技术在分离、鉴定差别表达的新基因方面与以前的各种技术相比有其独特的优越性,但同时它也存在着重复性较差等缺点。因此,最近研究工作者又在其基础上,发展了诸如代表性差式分析（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌｄｉｆｅｒｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓ,ＲＤＡ）［１０,１１］和抑制性扣除（或减去）杂交（ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ,ＳＳＨ）［１２］等一些更新的方法。下面就此作一简要概述。     

重离子束对酵母细胞的失活与突变

双倍体酵母细胞Ｄ７经单核能为１１．４ＭｅＶ／ｕ的Ａｎ和Ｕ离子辐照后,测定了细胞随剂量的存活率和突变率。获得细胞对Ａｕ和Ｕ离子的失活截面分别为２．５４μｍ２和１．９２μｍ２。在存活率为３７％的条件下,Ａｕ、Ｕ离子的ＲＢＥ分别为０．２８和０．１９。在突变实验中,研究了ＤＮＡ断链后的重组与倒位,它们对Ａｕ和Ｕ离子的截面为：８．３×１０－２μｍ２［σｍ－ｒｅｃ（Ａｕ）］,９．５×１０－５μｍ２［σｍ－ｒｅｃ（Ｕ）］和６．１×１０－４μｍ２［σｍ－ｒｅｖ（Ａｕ）］和３．８×１０－５μｍ２［σｍ－ｒｅｖ（Ｕ）］．最后,对所获结果进行了讨论。     

鼻咽癌Epstein－Barr病毒受体（EBVR／CR＿2）基因的病毒结合区的序列测定

Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｒ病毒（ＥＢＶ）进入鼻咽上皮细胞的途径,是人们研究ＥＢＶ与鼻咽癌（ＮＰＣ）的病因关系时所必须回答的一个问题。用抗ＥＢＶ受体（ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２）单抗检测上皮细胞中该受体的表达已有报道,但对上皮细胞中ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的基因结构仍需研究。我们采用ＰＣＲ扩增和不对称ＰＣＲ直接测序法,首次检测了１０例ＮＰＣ及３例正常人胚鼻咽上皮（Ｈｕｍａｎｅｍｂｒｙｏｎｉｃｎａｓｏｐａｒｙｎｇｅａｌｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ,ＨＥＮＥ）组织样本中ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的ＥＢＶ结合区的编码序列。这一片段的ＤＮＡ序列测定结果显示,人ＮＰＣ细胞和正常ＨＥＮＥ细胞的ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的ＥＢＶ结合区的编码序列,与正常人Ｂ淋巴细胞的ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２的相应序列完全相同,提示ＥＢＶ感染鼻咽上皮细胞可能与ＥＢＶＲ／ＣＲ＿２基因的ＥＢＶ结合区结构改变无直接关系。     

杏仁核内注射CCK—8抑制胃运动的机制

应用脑核团内微量注射和核团电刺激方法,观察杏仁基底内侧（ＢＭＡ）对胃运动的影响,分析ＢＭＡ与下丘脑腹内侧核（ＶＭＨ）的机能联系。结果如下：（１）双侧ＢＭＡ内注射八肽胆囊收缩素（ＣＣＫ－８）（５０ｎｇ／ｌμｌ）,出现胃内压（ＩＧＰ）和胃运动频率（ＧＭＦ）显著下降（Ｐ〈０．０１）。（２）ＢＭＡ内注射ＣＣＫ－Ａ受体阻断剂［Ｌ３６４,７１８］（１００ｎｇ／ｌμｌ）或ＣＣＫ－Ｂ受体阻断剂［Ｌ３６５,２６０］