9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量微孔板蒽酮-硫酸检测方法的建立及验证

目的建立微孔板蒽酮-硫酸法检测9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量的检测方法,并对其进行验证和初步应用。方法通过对蒽酮-硫酸方法的改进,建立检测9V型肺炎球菌疫苗中多糖含量稳定可靠的微孔板蒽酮-硫酸法。分别对蒽酮-硫酸法中硫酸溶液浓度、加热时间进行优化,并对建立的方法进行特异性、线性、精密度及准确度的验证。结果最佳硫酸溶液比例为6∶1(浓硫酸∶水),最佳加热时间为10 min。在检测9V型肺炎球菌多糖、多糖衍生物及多糖蛋白结合物中多糖含量时,此方法特异性强;在20~120μg/m L范围内,标准曲线线性良好(r20.995);实验内及实验间均具有良好的精密度(CV值分别为2.92%~3.32%和3.10%~4.06%);准确度试验中3个质量浓度的回收率均在96.17%~106.63%之间。结论微孔板蒽酮-硫酸法可被用来有效、准确、稳定地检测9V型肺炎球菌多糖、多糖衍生物及多糖蛋白结合物中多糖的含量,该方法较传统蒽酮-硫酸法操作简便快捷,节约样品、试剂等材料,非常适用于相关的疫苗生产过程中的质量控制。     

高效液相法与硫酸-蒽酮法测定猪苓多糖含量比较

本研究目的是比较高效液相法与硫酸-蒽酮法在测定猪苓多糖含量上的差异。为此,研究采用水提醇沉、Sevag法除蛋白、透析和冷冻干燥制备相对纯化的猪苓多糖,通过凝胶渗透色谱及高效液相法对猪苓多糖的相对分子量分布、组成及含量进行研究,用硫酸-蒽酮分光光度法测定猪苓颗粒中猪苓多糖的含量。结果显示,猪苓多糖数均相对分子质量为48,232,重均相对分子质量为117,506,分子范围2.44,可能由海藻糖和葡萄糖组成,其含量分别为6.05%和62.28%。硫酸-蒽酮法侧的猪苓多糖含量为87.9%。对于猪苓多糖含量测定,高效液相法优于硫酸-蒽酮法。     

鼠李糖脂快速定量分析方法及其影响因素研究*

为探寻简单、快速的由铜绿假单胞菌生产鼠李糖脂的定量分析方法,对比分析了蒽酮-硫酸法、L-半胱氨酸-硫酸法、苯酚-硫酸法及其影响因素。结果显示,蒽酮-硫酸法优于其它两种方法,并得出了其最佳测试条件。发酵液中剩余的葡萄糖、上清液对鼠李糖脂定量分析的影响可以忽略,菌体和中层杂质对鼠李糖脂的定量分析有一定程度的影响。因而,分析时要去除菌体。而中层杂质对定量分析的影响可以通过制备含中层杂质的鼠李糖溶液标准曲线而消除。     

正交实验法优选香菇多糖的提取工艺及其硫酸酯化研究

目的:考察香菇多糖的提取工艺,制备香菇多糖硫酸酯。方法:采用正交试验法考察加水量、提取时间、提取温度和粒度4个因素对香菇多糖硫酸酯提取率及其中总糖含量的影响,应用硫酸法制备香菇多糖硫酸酯并对得到的成分进行鉴别。结果:通过对正交实验结果的极差分析。得出提取温度和加水量对多糖提取率影响比较著性,提取温度和提取时间对多糖含量的影响比较著性。确定香菇多糖提取的最佳工艺为:应用40倍量的水,每次提取4 h,提取温度90℃,香菇粒度为80目。制备的多糖硫酸酯中硫酸基含量为22.80%,显示了相对较强的生物活性。结论:本实验成功的确定了提取香菇多糖的最佳工艺,制备了硫酸基含量较高的硫酸酯化香菇多糖。     

爬山虎多糖提取与含量的测定

建立石油醚去脂-80%乙醇去杂-热水提取-乙醇沉淀-氯仿、正丁醇去蛋白质-活性碳去色素的提取工艺,从爬山虎中提取多糖,用蒽酮-硫酸法比色测定多糖的含量,研究结果表明,此方法简便、供试液显色稳定、重现性较好,回收率为:99.36%,RSD=5.08%,熟果、茎、叶的多糖含量为:4.68%、22.71%、11.71%.     

不同产地枸杞子中多糖含量的比较研究

目的：建立枸杞子中多糖的测定方法，比较不同产地枸杞子中多糖含量的差异。方法：采用蒽酮-硫酸法测定宁夏、青海、新疆等3个产地86批次枸杞子中多糖的含量，分析差异，并进行方法学考察。结果：方法线性关系、回收率、精密度及重复性测定结果均符合要求，不同产地枸杞子中多糖含量范围为1.71%～4.56%，多糖含量高低顺序为青海>新疆>宁夏。结论：蒽酮-硫酸法可用于枸杞子多糖含量的测定，不同产地的枸杞子中多糖含量有一定差异，其中青海产地枸杞子中的多糖含量最高。     

鼠李糖脂快速定量分析方法及其影响因素研究

为探寻简单、快速的由铜绿假单胞菌生产鼠李糖脂的定量分析方法,对比分析了葸酮—硫酸法、L-半胱氨酸-硫酸法、苯酚硫酸法及其影响因素。结果显示,蒽酮硫酸法优于其它两种方法,并得出了其最佳测试条件。发酵液中剩余的葡萄糖、上清液对鼠李糖脂定量分析的影响可以忽略,菌体和中层杂质对鼠李糖脂的定量分析有一定程度的影响。因而,分析时要去除菌体。而中层杂质对定量分析的影响可以通过制备含中层杂质的鼠李糖溶液标准曲线而消除。     

粗柄羊肚菌菌丝体多糖及胞外多糖的提取工艺

为了研究粗柄羊肚菌菌丝体多糖及胞外多糖的最佳提取工艺条件,采用超声波提取菌丝体多糖、菌丝体发酵液浓缩提取胞外多糖的方法。通过单因素试验和L9(34)正交试验设计,探讨二者的最佳提取工艺条件。研究结果表明菌丝体多糖的最佳提取工艺条件:料液比1∶20(g∶m L),超声波处理温度70℃,超声时间20 min,超声提取次数2次;胞外多糖的最佳提取工艺条件:浓缩倍数1∶5,浓缩温度50℃,醇沉浓度95%,p H为6。该项工艺研究得到菌丝体粗多糖平均含量56.761 2 mg/g,胞外多糖平均含量1.275 4 mg/m L,多糖产量稳定,且此试验方法稳定可行。     

一株结皮真菌胞外多糖的初步研究

探究一株真菌胞外多糖最佳生产时间及其组成成分。通过对其发酵液胞外多糖含量及上清液黏度的测定,确定其最佳产糖时间,并用此条件提取胞外多糖粗品,用蒽酮-比色法测得提取的胞外多糖粗品的糖含量,薄层色谱法对所得的胞外多糖进行组分分析。当发酵至第5天时该株真菌的生物量、胞外多糖产量及发酵液的黏度均达到最高峰,分别为0.606 4 g/60 mL、20.22 μg/mL和4.74 mPa/s,并且胞外多糖含量与发酵上清液黏度在一定程度上呈正相关。用蒽酮-比色法测得提取的胞外多糖粗品的糖含量为19.58 μg/mL,并用4 mol/L的硫酸完全水解,硅胶G薄层层析,甲醇-氯仿(1:1,体积比）展层,苯胺-二苯胺-磷酸显色,表明其组成成分可能为D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖。该菌株所产的胞外多糖具有提高结皮能力和防沙保水作用,为利用微生物治沙提供参考和种质资源。     

1株结皮真菌胞外多糖的初步研究

探究一株真菌胞外多糖最佳生产时间及其组成成分。通过对其发酵液胞外多糖含量及上清液黏度的测定,确定其最佳产糖时间,并用此条件提取胞外多糖粗品,用蒽酮-比色法测得提取的胞外多糖粗品的糖含量,薄层色谱法对所得的胞外多糖进行组分分析。当发酵至第5天时该株真菌的生物量、胞外多糖产量及发酵液的黏度均达到最高峰,分别为0.606 4 g/60 mL、20.22μg/mL和4.74 mPa/s,并且胞外多糖含量与发酵上清液黏度在一定程度上呈正相关。用蒽酮-比色法测得提取的胞外多糖粗品的糖含量为19.58μg/mL,并用4 mol/L的硫酸完全水解,硅胶G薄层层析,甲醇-氯仿(1:1,体积比)展层,苯胺-二苯胺-磷酸显色,表明其组成成分可能为D-甘露糖、D-半乳糖和D-葡萄糖。该菌株所产的胞外多糖具有提高结皮能力和防沙保水作用,为利用微生物治沙提供参考和种质资源。     

蝉拟青霉菌丝体与天然蝉花中化学成分的比较分析

以天然蝉花Cordyceps cicadae做对比,对一株蝉拟青霉Paecilomyces cicadae菌株发酵菌丝体的化学成分进行了分析,包括粗成分、生物活性成分、无机元素、氨基酸、脂肪酸等。结果表明:蝉拟青霉菌丝体中虫草多糖的含量为33.2mg/g,甘露醇的含量为78.9mg/g,麦角甾醇的含量为0.6256mg/g,腺苷的含量为1.0620mg/g,钙、铁、锌、硒和锰微量元素的含量分别为5187.59μg/g、207.23μg/g、41.93μg/g、0.087μg/g和28.24μg/g,18种氨基酸齐全,不饱和脂肪酸是优势脂肪酸,以亚麻油酸、油酸为主,其相对含量分别为53.91%和20.63%,与天然蝉花相比,发酵菌丝体中虫草多糖、甘露醇、麦角甾醇、腺苷、氨基酸总量、必需氨基酸总量和不饱和脂肪酸的含量明显高于后者,其它化学成分和天然蝉花中相应成分基本一致。     

巴西蘑菇菌体深层发酵培养条件的优化及成分分析*

对巴西蘑菇深层发酵条件进行了详细的研究,确定了巴西蘑菇菌体发酵的最优方案是:7%葡萄糖,1.5%酵母膏,0.3%磷酸氢二钾,0.1%硫酸镁,VB1 10mg/100ml,自然pH,接种量为15%,装液量为100ml/250ml三角瓶,150r/min,25℃恒温培养9天,菌丝干重达到1.8g每100ml发酵液。通过对巴西蘑菇子实体与深层培养菌丝体中蛋白质营养成分及多糖含量进行了分析比较,发现它们均是极好的营养食品之源。     

细脚拟青霉菌丝体多糖纯化及组成分析

通过DE-52纤维素柱和Sephedex G-100葡聚糖凝胶柱,对细脚拟青霉Paecilomyces tenuipes菌丝体粗多糖进行纯化,得到PtPs1和PtPs2,应用离子色谱HPAEC-PAD对纯多糖PtPs1和PtPs2的单糖组成进行分析,证实均由葡萄糖、半乳糖和甘露糖三种单糖组成,经红外扫描确定PtPs1和PtPs2均为α型吡喃糖。     

Improvement of insulin resistance and insulin secretion by water extracts of Cordyceps militaris, Phellinus linteus, and Paecilomyces tenuipes in 90% pancreatectomized rats

The effect of supplementation with Phellinus linteus (P. linteus), Paecilomyces tenuipes (P. tenuipes), and Cordyceps militaris (C. militaris) mushroom water extracts on the insulin secretion and insulin resistance of 90% pancreatectomized (Px) male Sprague Dawley rats was investigated. Px rats were daily administered 0.5 g of P. linteus, P. tenuipes, and C. militaris aqueous extracts or a placebo per 1 kg body weight with a 40% fat diet for 8 weeks. Fasting serum glucose levels were lower in rats receiving C. militaris than in the control group. Insulin secretion at the elevated serum glucose levels was lowest in rats that consumed P. tenuipes in hyperglycemic clamp. Whole body glucose disposal rates increased in C. militaris but decreased in P. tenuipes compared to those in the control group in euglycemic hyperinsulinemic clamp. The GLUT4 content and fraction velocity of glycogen synthase in the soleus and quadriceps muscles increased in the rats treated with C. militaris, but P. tenuipes decreased both. In sum, a water extract of C. militaris ameliorates insulin resistance by enhancing glucose utilization in skeletal muscles.     

桑黄菌丝体粗多糖的提取方法研究

采用正交试验设计,以桑黄菌丝体粗多糖含量为考察指标,用苯酚—硫酸法,分别确定了热水浸提法、微波辅助提取法和超声提取法的最佳工艺。通过极差分析得出:热水浸提法的最优工艺为浸提时间3 h、浸提3次、液料质量比50∶1、浸提温度90℃,粗多糖提取率为2.10%;微波提取法的最优工艺为微波处理15 min、液料质量比50∶1、提取3次,提取率为4.18%;超声提取法的最优工艺为超声30 min、提取2次、液料质量比60∶1、温度60℃、频率60 Hz,提取率为3.02%。微波辅助法与热水浸提法相比,时间缩短,且提取率提高近1倍;与超声提取法相比,时间缩短1/2,但提取率提高40%。因此,微波辅助提取法速度更快、提取效率更高、操作更简便,优于其他2种方法。     

Optimization of physical parameters for exo-biopolymer production in submerged mycelial cultures of two entomopathogenic fungi Paecilomyces japonica and Paecilomyces tenuipes

AIMS: In the present study, two different optimization techniques were used to determine the suitable operating parameters for exo-biopolymer production in submerged mycelial cultures of two entomopathogenic fungi Paecilomyces japonica and Paecilomyces tenuipes. METHODS AND RESULTS: First, the rotating simplex method, a nonstatistical optimization technique, was employed to obtain the best combination of physical parameters (viz. pH, agitation intensity, aeration rate) for maximum exo-biopolymer production by P. japonica in a batch bioreactor. The optimal combination was determined to be a pH of 8.06, an aeration of 3 vvm, without any impeller agitation, producing a 17-time increase in exopolymer production (34.5 g l(-1)) when compared with that achieved in unoptimized flask cultures. Second, the uniform design method, a statistical optimization technique, was employed to determine the best operating parameters for submerged culture of P. tenuipes. The optimal combination for mycelial growth was determined to be a pH of 4.88, an aeration of 2 vvm and an agitation of 350 rpm, while a pH of 4, an aeration of 2 vvm and an agitation of 150 rpm was best for exo-biopolymer production. CONCLUSIONS: The exo-biopolymer production in P. japonica optimized by the rotating simplex method was strikingly improved (max. 34.5 g l(-1)), and the exo-biopolymer production in P. tenuipes optimized by the uniform design method was also significantly increased (max. 3.4 g l(-1)). SIGNIFICANCE AND IMPACT OF THE STUDY: The successful application of these two different optimization techniques in this study implies that these methods are worthy of applying to other fermentation systems for the production of bioactive mycelial biomass and exo-biopolymers in liquid culture of higher fungi.     

高雄山虫草无性型细脚拟青霉的核型分析

对高雄山虫草无性型细脚拟青霉的酶解条件、原生质体制备、电泳条件和核型进行了研究。以10mg/mL相同浓度的溶壁酶、纤维素酶和蜗牛酶配成混合酶解液,在30℃、120r/min振荡处理18h菌龄的菌丝2.5h,获得约107个/mL的原生质体悬浮液。浓缩至约108个/mL原生质体悬浮液与1.4%的低熔点琼脂糖等体积混合制胶,50℃蛋白酶K酶解48h,ET液洗3次(每次1h),浸没,4℃保存。以温汉逊氏酵母Hansenula wingei YB-4662-VIA和粟酒裂殖酵母Schizosaccharomyces pombe 972h-染色体DNA作为标准,利用钳位均匀电场脉冲电泳系统电泳,细脚拟青霉染色体组被分离成8条带,利用AlphaEase Fc软件分析,估计其大小在0.43-5.78Mb之间,大小分别为:0.43、2.45、2.55、2.88、3.28、3.94、4.70、5.78Mb,推测细脚拟青霉核型大小约为26.01Mb。     

红栓菌多糖的分离纯化与分析

液体发酵得到的红栓菌（Ｐｙｃｎｏｐｏｒｕｓｃｉｎｎａｂａｒｉｕｓ）菌丝经沸水抽提,胰匀浆处理和Ｓｅｖａｇｅ法除蛋白,ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５与ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０柱层析,乙醇沉淀得到二种多糖组分（简称ＰＣ＿１、ＰＣ＿２）。经聚丙烯酰胺电泳,冻融分析鉴定为均一体。ＰＣ＿１和ＰＣ＿２的,总糖含量分别为８１．５％和７７．３％,分子量分别为２３０００和１３０００．两者的红处光谱具多糖特征吸收峰,在紫外区无明显吸收现象,基本不含氮。ＰＣ＿１单糖组成为Ｄ－葡萄糖、Ｄ－半乳糖及Ｄ－甘露糖,ＰＣ＿２为Ｄ－半乳糖、Ｄ－甘露糖。     

古尼拟青霉液体发酵液有机粗提物产量的研究

目的:培养基成分对古尼拟青霉液体发酵液有机粗提物产量的影响。方法:采用正交设计方法,考察古尼拟青霉液体发酵培养基3种组分马铃薯、葡萄糖和蛋白胨对其菌丝体与发酵液有机粗提物量的影响。结果:在马铃薯300g/L,蛋白胨8g/L,葡萄糖30g/L时,古尼拟青霉液体发酵液有机粗提物产量可达到136.3mg/L。结论:培养基成分对古尼拟青霉液体发酵有机粗提物产量有显著影响,该文结果对指导古尼拟青霉液体的深层发酵具有参考价值。     

桦褐孔菌三萜类物质的提取与含量测定

以桦褐孔菌发酵菌丝体为材料,通过对溶剂乙醇(95%)、甲醇、乙酸乙酯、丙酮、异丙醇、正己烷和氯仿的提取效果比较表明,提取三萜类化合物的最佳溶剂为异丙醇,提取时间为24h,每个样品所需溶剂量(6mL)和菌丝体样品量(100mg)较少,并可同时对大量样品进行有效提取。以白桦脂醇为标准品,对香草醛-冰醋酸-高氯酸分光光度法进行评价,证明该方法简单快速、准确度高、试验误差小、重复性好。利用此方法对桦褐孔菌的野生菌核和发酵菌丝体内三萜类化合物含量进行测定,结果表明野生菌核(59.86mg/g)和发酵菌丝体(94.92mg/g)中都含有很高的三萜类化合物,且发酵菌丝体中三萜类化合物含量高于野生菌核。因此在桦褐孔菌产品开发中,发酵菌丝体可代替野生菌核进行大工业化生产。