Ca~(2+)参与水霉菌丝细胞壁修饰的证据

以细胞壁崩溃酶－Driselase短时间处理水霉（Saprolegniaferax）菌丝,pH5．0时可使原生质从菌丝亚顶端喷出,pH6．0～8．0时则不导致该现象发生;适当浓度EGTA的存在,可提高pH5．0时酶解引起的原生质喷出频率、使pH6．0～8．0时生长菌丝的顶端原生质也喷出、并且喷出多发生在菌丝最顶端。外加CaCl2不抑制菌丝顶端原生质的喷出,排除了Ca2+抑制酶活性的可能。随后的跟踪观察显示,长时间以缺Ca2+培养介质培养菌丝,同样能够导致菌丝顶端原生质喷出。上述研究结果表明,培养介质中Ca2+和H+对菌丝完整性的维持起调节作用,细胞壁上的Ca2+可能参与了水霉菌丝细胞壁物理特性的修饰。     

Ca2+参与水霉菌丝细胞壁修饰的证据

以细胞壁崩溃酶-Driselflse短时间处理水霉(Saprozegma ferax)菌丝,pH5．0时可使原生质从菌丝亚顶端喷出,pH6．0～8．0时则不导致该现象发生;适当浓度EGTA的存在,可提高pH5．0时酶解引起的原生质喷出频率、使pH6．0～8．0时生长菌丝的顶端原生质也喷出、并且喷出多发生在菌丝最顶端;外加CaCl₂．不抑制菌丝顶端原生质的喷出,排除了Ca²⁺抑制酶活性的可能。随后的跟踪观察显示,长时间以缺Ca²⁺培养介质培养菌丝,同样能够导致菌丝顶端原生质喷出。上述研究结果表明,培养介质中Ca²⁺和H⁺对菌丝完整性的维持起调节作用,细胞壁上的Ca²⁺可能参与了水霉菌丝细胞壁物理特性的修饰。     

钙离子在水霉(Saprolegnia ferax)菌丝顶端细胞壁中呈极性分布

焦锑酸钾处理的水霉(Saprolegnia ferax)菌丝显示:焦锑酸沉淀颗粒仅存在菌丝细胞壁而不是原生质中,并呈顶端到基部的极性分布,即在菌丝最顶端细胞壁中丰富致密、重叠在一起,在约3—10μm的亚顶端则变得稍为稀薄而可分辨,在约10μm以后的成熟区域进一步显得松散而无规律。焦锑酸沉淀颗粒可经EGTA螫合处理去除,并经X-射线微区分析证明在3.6—3.7keV区域可产生Sb和Ca元素混合峰,说明焦锑酸沉淀反映了Ca~(2 )的分布。对冷冻干燥菌丝细胞壁表面进行扫描电镜X-射线微区分析,同样证明菌丝细胞壁含有大量的Ca,菌丝最顶端Ca信号强度高于10μm以后的成熟区。由于Ca~(2 )和H~ 可能为一对拮抗因子维持菌丝顶端细胞壁可塑性和刚性间的平衡以保证菌丝顶端生长,我们检验了菌丝生长过程中培养介质的pH变化,证实培养介质pH随培养时间的延长而逐渐下降。上述结果提示细胞壁Ca~(2 )可能在菌丝顶端生长过程中起作用。     

pH影响Ca~(2 )和EGTA对水霉(Saprolegnia ferax)菌丝顶端生长的作用效应

水霉(Saprolegia ferax)菌丝在pH6.0-8.0的OM液体培养基中生长良好,在pH5.0时生长速率有所下降,在pH3.0—4.0时停止生长。短时间(30min)作用研究表明,低浓度的CaCl_2促进pH5.0(1—5mmol/L)和pH6.0(1mmol/L)条件下的菌丝顶端生长,抑制pH7.0—8.0条件下的菌丝生长。1mmol/L以上的EGTA则抑制pH5.0条件下菌丝顶端生长,促进pH6.0—8.0条件下的菌丝顶端生长。但CaCl_2和EGTA都不能使pH3.0—4.0条件下的菌丝恢复生长。长时间(8h)作用跟踪观察表明,2mmol/L EGTA(pH6.8)短时间作用可促进菌丝生长,但随着培养时间延长,则产生抑制作用,并诱导原生质从菌丝最顶端喷出。说明细胞壁Ca~(2 )起着提供胞外Ca~(2 )源和细胞壁修饰成分的双重作用。Ca~(2 )通道阻断剂verapamil对菌丝顶端生长的抑制作用也说明顶端生长所需的Ca~(2 )来自胞外。     

丝状真菌的顶端生长及与细胞壁关系研究进展

丝状真菌菌丝的生长,与其它植物极性细胞（如花粉管、根毛等）生长一样,以细胞的顶端生长为特征（17,’7）,其生长仅限十菌丝顶端的穹窿区域,在直径均匀的后部管状区域则几乎不再伸长。菌丝的顶端生长方式在一个世纪前已被发现（”）,随后的研究对此进行了进一步阐述,指出菌丝的生长速率在顶端最大,距顶lpm处壁的合成速率可能是50Pm处的50倍（12）,而在伸长区的基部,生长速率可能降为零（’7〕。菌丝的顶端生长是多种因素造成的,包括泡囊、肌动蛋白、膨压、细胞壁等（12）,其中最主要的影响来自于菌丝细胞壁。菌丝细胞壁的成分…     

培养介质pH和EGTA对水霉（Saprolegnia ferax）菌丝细胞肌动蛋白…

菌丝在ＰＨ５．０－８．０介南中维持顶端生长,ｈｏｄａｍｉｎ－Ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ荧光探针显示在菌枯端都存在Ｆ－ａｃｔｉｎ的“帽子”结构,中入ＥＧＴＡ到培养介质中不影响线的顶端生长和ａｃｔｉｎ的“帽子”结构。值得注意的是：菌丝的Ｒｈｏｄａｍｉｎ－ｐｈａｌｌｏｉｄｉｎ荧光强度大小与菌丝顶端生长速率成正比;在含有或不含有ＥＧＴＡ的ＰＨ５．０培养条件下,菌丝的生长速率均很低,且后部颗粒状的荧光斑点消失;在     

水霉（Saprolegnia ferax）生长菌丝顶端细胞内游离Ca^2＋和膜结合…

本文比较和研究了水霉（Ｓａｐｒｏｌｅｇｎｉａ ｆｅｒａｘ）生长菌丝顶端胞内Ｆｌｕｏ－３游离Ｃａ＾２＋和ＣＴＣ－膜结合Ｃａ＾２＋的荧光分布影像。激光共焦扫描显微镜下观察可见：Ｆｌｕｏ－３荧光有房室化现象,Ｆｌｕｏ－３荧光反映的是细胞质游离Ｃａ＾２＋与细胞器游离Ｃａ＾２＋总的分布状况,Ｆｌｕｏ－３游离Ｃａ＾２＋的最大荧光强度出现在菌丝顶端２－１０ｕｍ区域,１０ｕｍ以后荧光强度逐渐下降,约４０ｕｍ以后荧     

培养介质pH和EGTA对水霉(Saprolegnia ferax)菌丝细胞肌动蛋白的分布与结构的影响

菌丝在pH 5.0—8.0介质中维持顶端生长,Rhodamin-phalloidin荧光探针显示在菌丝顶端都存在F-actin的“帽子”结构;加入EGTA到培养介质中不影响菌丝的顶端生长和actin的“帽子”结构。值得注意的是:菌丝的Rhodamin-phalloidin荧光强度大小与菌丝顶端生长速率成正比;在含有或不含有EGTA的pH5.0培养条件下,菌丝的生长速率均很低,且后部颗粒状的荧光斑点消失;在pH 3.0-4.0培养介质中菌丝生长停止,不但F-actin“帽子”结构消失,整个菌丝荧光也变得非常微弱无法观察,提示酸性pH可引起F-actin的解聚,从而导致生长速率下降甚至生长停止。     

细胞壁结合的β—葡聚糖酶对百合花粉管顶端生长的调节作用

从离体培养的麝香百合（Lillum longiforum Thunb.)花粉管细胞壁中分离纯化出β－葡聚糖酶。抑制剂野尻酶素（mojirimycin)使该酶活性明显降低。若在百合花粉培养的初始或培养1h时加入3mmol/L野尻酶素,与对照相比较,花粉的萌发率分别抑制99．6％和91.4％。若把3mmol/L野尻酶素分别在培养的不同时刻（0、1、1．5和2h）加入到液体培养基中,花粉管的生长都即刻受阻。此后,花粉管生长方向稍有改变,且花粉管直径略增,呈弯曲的非正常形态。用视频显微术跟踪记录在正常或含有不同浓度野尻酶素（0.003、0．03、0．3和3mmol/L）的半固体培养粉管直径、胞质内细胞器及囊泡的分布和顶端生长区的区域范围也呈现异常。野尻酶素对花粉管生长的抑制是可逆转的。这些结果表明,β－葡聚糖酶参与百合花粉的萌发和花粉管生长的调节。结合我们已报道的该酶的性质及作用方式,进而推测该酶通过降解1,3－1／1,4－或1,3：1,4－β－葡聚糖,影响细胞壁的延展性,从而对花粉管顶端生长显示调节作用。     

IAA和Ca^2＋对绿豆下胚轴切段伸长的影响及其相互关系

0.01 mmol/L IAA可以明显促进绿豆下胚轴切段的伸长,≤0.1 mmol/L CaCl_2也可促进其伸长,但当浓度为0.5 mmol/L时则有抑制作用。低浓度CaCl_2尚能加强IAA对绿豆下胚轴切段伸长的促进作用。Ca~(2+)专一性螯合剂EGTA、Ca~(2+)竞争性抑制剂LaCl_3及CaM拮抗剂CPZ均能抑制IAA促进绿豆下胚轴切段伸长的作用。增加培养介质中CaCl_2浓度可以逆转LaCl_3的抑制效应。     

高血压大鼠红细胞膜Ca^2＋,Mg^2＋—ATP酶对Ca^2＋反应的变...

本实验观察了正常及高血压大鼠红细胞膜Ｃａ＾２＋,Ｍｇ＾２＋－ＡＴＰ酶对不同浓度Ｃｕ＾２＋Ｍｇ＾２＋的反应。结果表明：（１）在自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）,此酶最适反应的Ｃａ＾２＋浓度为１０＾－６ｍｏｌ／Ｌ;ＷＫＹ大鼠为１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ;两肾一环型肾性高血压大鼠（ＲＨＲ）为１０＾－７ｍｏｌｇ／Ｌ,Ｗｉｓｔａｒ大鼠为１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ;Ｃａ＾２＋高于以上各相应浓度时该酶活性受到抑制;（２）作为该酶     

复合诱变筛选产细胞壁水解酶木霉菌株及产酶条件的优化

利用复合诱变技术 ,筛选到一株产几丁质酶和葡聚糖酶能力较强的绿色木霉菌株(Trichodermaviride)LD 1 8。并对其产酶条件进行了优化 ,发现在麸皮∶诱导物∶麦秸粉 =2∶2∶7的固体培养基上 ,以 4g/L (NH4) 2 SO4为氮源 ,起始pH8 0 ,经 2 5℃培养 72h ,产生的真菌细胞壁水解酶 ,用以溶解食用菌、黑曲霉等丝状菌丝体的细胞壁 ,制备原生质体 ,效果较优。     

外源Ca^2＋对烟草花粉管生长和生殖核分裂的调节

用细胞学和统计学方法研究了外源Ca~(2 )对烟草(Nicotiana tabacum L.)离体花粉管生长和生殖核分裂的影响。正常培养条件下,花粉管群体内的生殖核分裂率大致呈对数增长,10～18h为其分裂高峰期。所用Ca~(2 )浓度中以10~(-3)mol/L最适于花粉管生长,与之相比,其它浓度随时间延长愈益明显地表现出抑制效应。生殖核分裂则以10~(-2)与10~(-3)mol/L较为适宜,且10~(-2)mol/L可相对提前分裂高峰。在含10~(-3)mol/L Ca~(2 )培养基中培养10h后用不同方法处理,发现高钙抑制花粉管生长,尤以10~(-1)mol/L Ca~(2 )抑制最强烈,导致花粉管顶端壁加厚及生殖核的无丝分裂。而10~(-2)mol/L Ca~(2 )在处理早期(10～12h)促进生殖核分裂。EGTA处理则同时抑制花粉管生长和生殖核分裂。     

苹果果肉质膜微囊主动动输Ca^2＋的Ca^2＋—ATP酶特性

应用＾４５Ｃａ＾２＋示踪法研究了苹果果肉质膜微囊依赖于Ｃａ＾２＋的ＡＴＰ酶（Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶）活性与Ｃａ＾２运输之间的关系及激素对该酶活性的影响。结果表明：Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶存在于质膜上并受载体Ａ２３８７刺激而活性增加,该酶活性与依赖于ＡＴＰ的Ｃａ＾２＋运输依抑制剂ＥＢ,游离Ｃａ＾２＋和ＡＴＰ浓度的变化并呈极为相似的饱和动力学特征,而其ＥＢ半抑制浓度,Ｃａ＾２＋和ＡＴＰ半饱和浓度分别为０．１     

细胞外Ca^2＋内流入胞质的机制

细胞外Ｃａ＾２＋主要是通过塌压依赖性Ｃａ＾２＋通道和钙池耗竭依赖性Ｃａ＾２＋通道而内流的。前者主要见于电兴奋细胞,这一过程比较清楚;后者主要见非兴奋细胞,情况远较复杂：外来信号激活内贮钙池,钙池在释放Ｃａ＾２＋同时通过目前尚不清楚的途径将直接或间接传至质膜Ｃａ＾２＋通道,而诱发Ｃａ＾２＋内流。     

介质Ca^2＋和La^3＋对酿酒酵母生长的影响

采用正交实验研究了外加Ｃａ＾２＋和Ｌａ＾３＋对酿酒酵母生长的影响。结果表明：外加Ｃａ＾２＋和Ｌａ＾３＋对酿酒酵母的生长均有显的影响,都呈现出低浓度对正效应和高浓度时负效应,当Ｃａ＾２＋浓度为１ｍｍｏｌ／Ｌ及Ｌａ＾３＋浓度为１５μｍｏｌ／Ｌ时酿酒酵母生长最好。