灵芝原生质体分离与再生研究

首次详细、系统地探讨了灵芝原生质体分离与再生的条件,结果表明：用0．6mol／L甘露醇配制成含2％溶壁酶和0．5％崩溃酶的复合酶,在30℃,pH为6.0时酶解3小时,可得到最高的原生质体得率。但考虑到原生质体的再生,以酶解2．5小时为最适。酶解2．5小时所得原生质体经精制,用纤维二糖培养基（以0.6mol／L甘露醇为渗透压稳定剂）进行双层平板（上层平板含0．2％琼脂）培养法再生,原生质体的再生率最高。本研究为以后进行灵芝原生质体的融合以及灵芝的转基因研究打下了基础。     

灵芝原生质体分离与再生研究*

首次详细、系统地探讨了灵芝原生质体分离与再生的条件,结果表明：用0．6mol／L甘露醇配制成含2％溶壁酶和0．5％崩溃酶的复合酶,在30℃,pH为6.0时酶解3小时,可得到最高的原生质体得率。但考虑到原生质体的再生,以酶解2．5小时为最适。酶解2．5小时所得原生质体经精制,用纤维二糖培养基（以0.6mol／L甘露醇为渗透压稳定剂）进行双层平板（上层平板含0．2％琼脂）培养法再生,原生质体的再生率最高。本研究为以后进行灵芝原生质体的融合以及灵芝的转基因研究打下了基础。     

灵芝原生质体的分离及其转化

对灵芝（赤芝）进行了原生质体的形成和再生实验,研究了渗透压稳定剂、菌龄、酶解条件对原生质体分离的影响,以及渗透压稳定剂、培养基对原生质体现生的影响,另外还尝试用电穿孔在灵芝原生质体中进行报告基因（report gene）β-gal的转化,结果β-gal在菌丝体中有表达。     

灵芝原生质体制备、再生及融合的研究

报道不同菌龄、酶液浓度、稳渗剂对灵芝原生质体产率及不同种类、不同浓度的稳渗剂对原生质体再生的影响。结果表明,诱变后具抗药性标记的“中国红灵芝”菌种（mH1）原生质体制备时菌丝最适菌龄为48小时,酶液浓度为3％,稳渗剂以0．6mol／L蔗糖为佳;诱变后具抗药性标记的“韩国红灵芝”（mK1）原生质体制备时菌丝最适菌龄为40小时,酶液浓度为1％,稳渗剂为0.4mol／L甘露醇时原生质体产率最高。mH1,mK1原生质体均以蔗糖作稳渗剂再生率较高,其最佳浓度为0．6mol／L。在该条件下mH1原生质体再生率为3．20×10-2,mK1为5．40×10-2。在此基础上,以30％的PEG作为融合诱导剂进行灵芝原生质体融合,并获得了融合子,融合率为140×10-2。     

食用菌原生质体分离与再生的技术

用2%的溶壁酶处理平菇及香菇菌丝体,原生质体释放量达10~7个/ml以上。不同渗透压、稳定液、再生培养基、培养条件对食用菌原生质体分离和再生有不同的影响。本研究探索出一个原生质体分离与再生的较优系统。原生质体融合的研究在创造食用菌远缘杂交、解决珍贵野生类型驯化栽培,了解分类学上亲缘关系以及研究导核体遗传等具有重要意义。     

赤芝原生质体分离与再生研究

以赤芝(Ganoderma lucidum)为供试菌种,研究了不同酶解温度、酶解时间、渗透压稳定剂浓度及菌龄、再生培养基等对赤芝菌丝的原生质体制备与再生的影响。结果表明:菌龄为4 d的菌丝,以0.4 mol/m L的甘露醇作渗透压稳定剂配制成浓度为0.02 g/m L的溶壁酶,于p H 5.0、25℃条件下酶解2.0 h,其原生质体数最高可达3.87×107/m L,MYG再生培养基上再生率达到0.016%。     

灵芝原生质制备,再生及融合的研究

报道不同菌龄、酶液浓度、稳渗剂对灵芝原生质体产率及不同种类、不同浓度的稳渗剂对原生质体再生的影响。结果表明,诱变后具抗药性标记的“中国红灵芝”（菌种ｍＨ１）原生质体制备时菌丝最知菌龄为４８小时,酶液浓度为３％,稳渗剂以０．６ｍｏｌ／Ｌ蔗糖为佳;诱变后具抗药性标记的“韩国红灵芝”（ｍＫ１）原生质体制备时菌丝早适菌龄为４０小时,酶液浓度为１％,稳渗剂为０．４ｍｏｌ／Ｌ甘露醇时原生质体产率最高。ｍＨｌ,     

灵芝原生质体的分离及其转化

对灵芝(赤芝)进行了原生质体的形成和再生实验,研究了渗透压稳定剂、菌龄、酶解条件对原生质体分离的影响,以及渗透压稳定剂、培养基对原生质体再生的影响;另外还尝试用电穿孔法在灵芝原生质体中进行报告基因(reportgene)β-gal的转化,结果β-gal在菌丝体中有表达。 Abstract:The experiments of protoplasts preparation from Lingzhi (Ganoderma lucidum) and their regeneration were done and the effects of osmotic stabilizer,age of mycelium and lystic conditon on formation and regeneration of protoplasts were studied.The β-geo gene has been transformed into the protoplast by electroporation and the reporter gene β-gal has been expressed in the regenerated hypha.     

菌根真菌——赭丝膜伞原生质体分离与再生研究

振荡培养４８ｈ的赭丝膜伞（Ｃｏｒｔｉｎａｒｉｕｓｒｕｓｓｕｓ）菌丝体经０．５％巯基乙醇预处理后,离心法收集,以０．６ｍｏｌ／ＬＭｇＳＯ４作高渗稳定剂,ｐＨ５．８,采用纤维素酶,离析酶和浸解酶联合处理,在三个温度（２４℃,３１℃３５℃）下经１１～１６ｈ反应均可获得较高的原生质体产量,最高产量达８×１０＾７个／ｇ鲜重菌丝,分离得到的原生质体表现了快速的再生能力,在ＭＭＮＣ固体培养基上可达到２０％以上的     

菌根真菌——赭丝膜伞原生质体分离与再生研究

振荡培养48h的赭丝膜伞（Cortinariusrussus）菌丝体经0．5％流基乙醇预处理后,离心法收集,以06mol／LMgSO_4作高渗稳定剂,PH5．8,采用纤维素酶、离析酶和浸解酶联合处理,在三个温度（24℃、31℃、35℃）下经11～16h反应均可获得较高的原生质体产量,最高产量达8×10~7个／g鲜重菌丝。分离得到的原生质体表现了快速的再生能力,在MMNC固体培养基上可达到20％以上的再生频率。文章较详细地研究了酶系组成、酶解温度和时间、菌丝菌龄等多个因素对C。russus原生质体分离及再生的影响。     

马铃薯叶肉原生质体再生植株的研究

马铃薯两个品系小叶子x多子白和乌盟601的叶肉原生质体在原生质体培养基中诱导出愈伤组织,叶肉原生质体来源的愈伤组织转移到MS＋2mg/1ZT 0.1mg/1 IAA培养基中,培养至70天以后,开始发生芽的分化,待芽生长到2－3cm高度时,转入MS＋0．05mg/1 NAA培养基中,很快出根长成完整植株,带1－2片叶的茎段移栽入灭菌的混合土壤中生长并结出薯块。     

香菇菌丝原生质体分离与再生条件的研究

在25-26℃下培养5-6天的菌丝体,以0.8mol/L甘露醇作为渗透压稳定剂,用1.5%溶璧酶液酶解1.5-2小时,所得原生质体的产量较高,最高可达4×10⁷个/ml以上。上述条件分离的原生质体,再生率也较高。原生质体再生的温度以26℃为最佳。不同的再生培养基明显地影响原生质体的再生率。在完全培养基中加入麸皮浸出液可显著提高香菇菌丝原生质体的再生率,其中,以添加5% 麸皮浸出液的效果最好。显微观察结果表明,在液体培养集中,香菇菌丝原生质体的再生是不同步的。一般要培养20小时以后才能见到出芽,而且原生质体的再生形式也是多种所样的。     

尖顶羊肚菌原生质体的分离及再生

培养在液体培养基中的尖顶肚菌(Morchella conica Pers)菌丝体可以分离出大量的原生质体。在组合的2号酶液中,在30℃下经4.5小时处理的产量最高(为6.2×10~6个原生质体/100mg·ml)。此法分离得的原生质体再生力很强,液体培养18小时即可再生成菌丝。再生的细胞进行植板培养后形成了菌丝体,并获得了从原生质体再生的菌株。     

草菇菌丝原生质体的分离与再生

在适当的酶解条件下,用溶壁酶(Lywallzyme)酶解新鲜的草菇菌丝获得了大量的原生质体。分离出来的草菇原生质体形态正常,质膜清楚,有活力。原生质体通过悬滴培养和浅层培养均能再生成菌丝,其中,悬滴培养的再生频率为2—5%,浅层培养的再生频率为7—10%。     

杏鲍菇原生质体制备与再生条件初探

研究酶浓度、酶解时间、酶解温度、培养时间、稳渗剂种类、pH值和几种再生培养基对杏鲍菇原生质体制备与再生的影响。最适条件为 :在 30℃、pH5 .5、1.5 %溶壁酶条件下 ,以 0 .6mol L甘露醇作为稳渗剂 ,酶解 2 .5h ,原生质体产量达到 2 .90× 10 7个 mL。将所得原生质体过滤、纯化、稀释后涂布再生培养基 ,再生率为 0 .18%。为利用原生质体技术进行杏鲍菇育种奠定了基础。     

头孢菌素C产生菌产黄顶孢霉菌原生质体的分离和再生

用1％拟康氏木霉Trichoderma pseudokoningii Rifui产生的纤维素酶,不颓硫醇类化合物预处理,可直接裂解产黄顶孢霉菌菌丝体,得到大量原生质体。不同批号纤维素酶活力相差很大,需比较采用。产黄顶孢霉菌菌丝体用玻璃纸平板培养法培养,培养时间为40—48h。纯化后原生质体悬浮液用渗透压处理后分离计数,可计算非原生质体形成的菌落数,从而统计再生频率约为0．7—2.5％。在原生质体再生过程中,观察到不同于孢子再生的生长延缓现象,原生质体再生菌株仍保留亲株的菌落形态及合成头孢菌素C的生产能力。     

党参原生质体再生植株

党参下胚轴愈伤组织原生质体在附加１．２ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ,０．２ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ,０．２ｍｇ／Ｌ ＢＡＰ和０．１ｍｇ／Ｌ ＺＴ的ＭＳ,Ｃ８１Ｖ,ＤＰＤ及ＫＭ８ｐ培养基中进行液体体层培养。在ＫＭ８ｐ中获得了最高的分裂频率。葡萄糖作渗透剂优于甘露醇,两结合使用效果更好。在合适的条件下,原生质体培养３天出现第１次分裂,４周内形成大细胞团,培养６周后形成０．５－１．０ｍｍ大小的小愈伤组织。在附加２％蔗糖     

狗头枣叶片原生质体分离研究

以培养25d的狗头枣试管苗叶片为材料,研究了不同酶液浓度,不同甘露醇浓度对狗头枣组培苗叶片原生质体分离的影响.结果表明适合狗头枣组培苗叶片原生质体分离的适宜酶液配比为1.0 g/L纤维素酶、0.4 g/L果胶酶,0.6 mol/L甘露醇,黑暗条件下,酶解8h,可获得大量有活力的原生质体.其叶片原生质体的产量为2.12×106个/g,活原生质体获得率为80.88％.