酵母金属硫蛋白对g12细胞抗γ射线损伤的作用

用胞质阻断法微核试验和单细胞凝胶电泳法检测酵母金属硫蛋白（ＢＤ１０１Ｃｕ－ＭＴ）对(6０)Ｃｏ－γ射线诱发的ｇ１２细胞微核形成和ＤＮＡ链断裂的影响。结果表明１０和５０μｇ／ｍｌＢＤ１０１Ｃｕ－ＭＴ处理,对１或３Ｇｙγ射线诱发的双核微核细胞率和１Ｇｙγ射线诱发的彗星细胞频率及核ＤＮＡ迁移距离的增加有明显的抑制作用．提示酵母金属硫蛋白对γ射线诱发ｇ１２细胞的遗传损伤有拮抗作用．     

酵母金属硫蛋白对g12细胞抗γ射线损伤的作用

用胞质阻断法微核试验和单细胞凝胶电泳法检测酵母金属硫蛋白（ＢＤ１０１－Ｃｕ－ＭＴ）对＾６０Ｃｏ－γ射线诱发的ｇ１２细胞微核形成和ＤＮＡ链断裂的影响。结果表明１０和５０μｇ／ｍｌ ＤＢ１０１ Ｃｕ－ＭＴ处理,对１或３Ｇｙγ射诱发的双核微核细胞率和１Ｇｙγ射线诱发的彗星细胞频率及核ＤＮＡ迁移距离的增加有明显的抑制作用。提示酵母金属硫蛋白对γ线诱发ｇ１２细胞的遗传损伤有扣抗作用。     

酵母类金属硫蛋白抗氧化作用的研究

酿酒酵母ＹＢＤ１０１菌株的类金属硫蛋白能清除羟基在。含类金属硫蛋白的活性的干酵母饲喂７个半月龄昆明小鼠,可提高肝中ＳＯＤ活性,降低ＬＰＯ含量,对脑中ＭＡＯ－Ｂ活性有一定抑制作用,对肝中ＭＡＯ－Ｂ活性几乎不抑制。含类Ｃｕ－ＭＴ活怀干酵母对上述衰老有关三项生化指标的作用,与兔肝Ｚｎ－ＭＴ纯品效果一流,提示酵母菌类Ｃｕ－ＭＴ在预防衰老和保护人体健康方面有良好的应用前景     

酵母金属硫蛋白对酵母和小鼠抗γ射线损伤的作用

酿酒酵母BD101菌株的金属硫蛋白能清除羟基自由基。含金属硫蛋白的酵母菌有拮抗60Coγ射线的作用。用计数血液中血小板（PLT）、白细胞（WBC）变化来研究酵母Cu－MT在小鼠γ射线损伤中的作用。结果表明,该菌Cu－MT对PLT降低的改善和回升有作用。但未观察到其对WBC总数变化的影响。提示酿酒酵母Cu－MT在临床放射病治疗和放疗后抗出血方面有良好的应用前景。     

金属硫蛋白产生菌的诱变育种

采用亚硝基胍和紫外线诱变,自金属硫蛋白（ＭＴ）产生菌酿酒酵母（ｄｅｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＢＤ１０１－２５单倍体中获得遗传稳定的高Ｃｕ２＋、Ｃｄ２＋抗性突变株ＢＤ１０１－６９和ＢＤ１０１－３０。并对其重金属解毒、桔抗ｕ．ｖ．和６０Ｃｏ辐射效应、清除羟基自由基能力等生物学功能进行了研究。与出发菌株相比,上述生物学活性与酵母细胞对Ｃｉ２＋抗性、ＭＴ表达量表现出正相关性。两个突变株类ＭＴ表达量与生物学活性皆有所提高,为酿酒酵母ＭＴ的理论和应用研究打下了基础。     

金属硫蛋白的生物学特性及生理作用

金属硫蛋白的生物学特性及生理作用朱赓伯（苏州医学院生化教研室,苏州２１５００７）关键词金属硫蛋白金属硫蛋白又名金属硫组氨酸甲基内盐（ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎｓ,ＭＴ）。三十年前美国哈佛大学的Ｂ．Ｌ．Ｖａｌｌｅｅ首次在马的肾脏中发现Ｃｄ－ＭＴ和Ｚ...     

金属硫蛋白产生菌的诱变育种*

采用亚硝基胍和紫外线诱变,自金属硫蛋白（ＭＴ）产生菌酿酒酵母（ｄｅｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＢＤ１０１－２５单倍体中获得遗传稳定的高Ｃｕ^２＋、Ｃｄ^２＋抗性突变株ＢＤ１０１－６９和ＢＤ１０１－３０。并对其重金属解毒、桔抗ｕ．Ｖ．和６０Ｃｏ辐射效应、清除羟基自由基能力等生物学功能进行了研究。与出发菌株相比,上述生物学活性与酵母细胞对Ｃｉ^２＋抗性、ＭＴ表达量表现出正相关性。两个突变株类ＭＴ表达量与生物学活性皆有所提     

酵母金属硫蛋白对酵母和小鼠抗γ射线损伤的作用*

酿酒酵母BD101菌株的金属硫蛋白能清除羟基自由基。含金属硫蛋白的酵母菌有拮抗60Coγ射线的作用。用计数血液中血小板(PLT)、白细胞(WBC)变化来研究酵母Cu-MT在小鼠γ射线损伤中的作用。结果表明,该菌Cu-MT对PLT降低的改善和回升有作用。但未观察到其对WBC总数变化的影响。提示酿酒酵母Cu-Mr在临床放射病治疗和放疗后抗出血方面有良好的应用前景。     

兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白,然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白,用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８：１的金属：蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合,将其β结构域用金属饱和,在３７℃,ＰＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ⅰ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域,通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外     

兔肝金属硫蛋白β结构域的制备和鉴定

制备一定量的Ｃｄ、Ｚｎ兔肝金属硫蛋白（ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,ＭＴ）,然后脱掉其中的金属,获得不含金属的硫蛋白（ａｐｏＭＴ）．用一价金属ＣｕＣｌ或ＡｇＮＯ３以５．８１的金属蛋白摩尔比与ａｐｏＭＴ结合,将其β结构域用金属饱和,在３７℃,ｐＨ７．０下用枯草杆菌蛋白酶水解掉未结合金属的α结构域,获得Ｃｕ（Ⅰ）、Ａｇ（Ⅰ）结合的兔肝ＭＴ－Ｉ、ＭＴ－Ⅱ的β结构域．通过ＨＰＬＣ、羧甲基化后的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、氨基酸组成分析、金属定量、Ｎ末端分析和紫外扫描等鉴定,证明确实得到了Ｎ末端为Ｍｅｔ,分子量３０００左右,金属蛋白摩尔比为５～５．５１的ＭＴβ结构域,其氨基酸组成与理论值基本相符     

二价铅离子与金属硫蛋白相互作用的研究

通过紫外吸收光谱和平衡透析法研究了二价铅离子同脱金属硫蛋白（ａｐｏ－ＭＴ）、锌－金属硫蛋白（Ｚｎ－ＭＴ）的相互作用,证实Ｐｂ（Ⅱ）是以金属巯基复合物（金属巯基比为１∶２）的形式同金属硫蛋白结合,表观离解常数（ＫＤ）为８．７１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ．在自由铅浓度达到６．５２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ的条件下,铅离子即可将Ｚｎ－ＭＴ上的Ｚｎ完全取代下来．通过ＥＤＴＡ、ＤＴＮＢ竞争反应、圆二色性（ＣＤ）光谱分析,认为Ｐｂ－ＭＴ的金属巯基复合物不同于Ｚｎ－ＭＴ中Ｚｎ与巯基形成的紧密的正四面体结构,而是可能形成一种三级结构相对松散、热力学上不稳定的Ｃｙｓ－Ｓ－Ｐｂ－Ｓ－Ｃｙｓ平面形结构．研究认为金属硫蛋白的两种亚型ＭＴ－Ⅰ、ＭＴ－Ⅱ与Ｐｂ（Ⅱ）的结合能力并无显著差异     

生物大分子功能的研究：酵母甘露聚糖对8.2Gy^60Coγ—射线辐照？…

目的：为了解酵母甘露聚糖对小鼠辐射损伤的保护作用。方法：６０Ｃｏγ－射线以８．２Ｇｙ照射６０只小鼠,雌雄各半,其中３０只在辐照前１０分钟腹腔注４００ｍｇＭａｎ／ｋｇ,另３０只注射生理盐水。结果：从比较研究项目,鼠的存活率,成活天数;４０天体重的动态变化;外同血ＷＢＣ、ＲＢＣ及ＰＬＴ及脾指数等的数值差异上,均显示酸母甘露聚糖对＾６０Ｃｏγ－射线辐射损伤有保护作用,同时也发现该保护作用存在性别２敏感性     

铜硫蛋白在铜抑瘤中的作用

由铜配以牛黄、麝香等中药组成的铜复方对肝癌等恶性肿瘤具有明显的疗效。但是,细胞内过量的铜会带来毒性,金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ,ＭＴ）可以与铜紧密结合形成Ｃｕ（Ｉ）－Ｓ簇,ＭＴ被认为在控制细胞内钢的代谢上有重要的作用。铜和中药复方都可以诱导金属硫蛋白的合成,其中铜的诱导能力更为明显。而且,ＭＴ具有特殊的化学结构,其中的巯基具有亲核性,使得ＭＴ易与某些自由基相互作用．在生物体内ＭＴ能抗辐射损伤,清除ＯＨ自由基,防止脂质过氧化等．因此,铜硫蛋白可能在铜的抑瘤过程中起着重要的作用。     

不同因素诱导豚鼠肝中金属硫蛋白的研究

通过皮下注射的方法诱导豚鼠产生金属硫蛋白（ＭＴ）,研究了重金属元素（Ｃｄ）、微量元素（Ｃｕ,Ｚｎ）及有机试剂（ＣＣｌ４,在体内可产生自由基）等因素的诱导与豚鼠肝脏中ＭＴ不同亚型的含量及金属结合状态的变化关系．实验结果表明,微量元素及有机试剂的诱导可使豚鼠肝脏中ＭＴ１的产量明显高于ＭＴ２,说明在体内ＭＴ１在参与微量元素的储存及清除自由基功能方面比ＭＴ２强．在重金属元素诱导下体内ＭＴ１对重金属元素的结合量远远大于ＭＴ２．表明ＭＴ１的重金属解毒能力比ＭＴ２强．上述实验结果与对不同亚型ＭＴ生物学功能差异的体外研究结果相吻合．此外,无论采用上述何种因素诱导,所得ＭＴ中均结合有Ｃｕ．对Ｃｕ在ＭＴ形成过程中的作用也进行了初步探讨．     

沙门菌CWDMs氨基酸代谢的检测

采用氨基氨利用生长试验和谷丙转氨酶（ＧＰＴ）、谷草转酶（ＧＯＴ）、乳酸脱氨酶（ＬＤＨ）、肌酸激酶（ＣＫ）、α－闳丁酸脱氢酶（α－ＨＢＤ）、γ－谷志肽酶（γ－ＧＴ）,酸性磷酸酶（ＡＣＰ）定性与定量分析法,检测伤ＣＷＤＭｓ变异的特点及其机制,探讨ＣＷＤＭｓ变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌ＣＷＤＭｓ变异的性质及其与细胞壁缺陷突变的关系。结果表明,沙门菌ＣＷＤＭｓ在仅含蛋氨酸或脯氨     

产金属硫蛋白酵母菌原生质体电融合研究

采用原生质体电融合技术,由不能水解淀粉,细胞生物量低,中抗Ｃｕ＾２＋、金属硫蛋白中ｃｙｓ含量高的酿酒酵母单倍体ＢＤ１０１－２５和具淀粉水解能力,细胞生物量高、Ｃｕ＾２＋、Ｃｄ＾２＋抗性高、金属硫蛋白中ｃｙｓ含量 异常毕赤酵母单倍体ＢＤ１０２－１３获得４个融合株。     

兔肝金属硫蛋白结合铅离子的圆二色性光谱研究

从锌诱导的家兔肝脏中分离纯化得到金属硫蛋白两种亚型：ＺｎＭＴ－Ⅰ和ＺｎＭＴ－Ⅱ．在酸性条件下脱金属,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５柱层析得到脱金属硫蛋白（ａｐｏＭＴｓ）．用圆二色性（ＣＤ）光谱法研究,发现两种亚型ａｐｏＭＴｓ 与Ｐｂ２＋ 的结合依赖于Ｐｂ２＋ 的加入比例及ｐＨ 值．ａｐｏＭＴ－Ⅰ在ｐＨ３～５之间,ａｐｏＭＴ－Ⅱ在ｐＨ４～６之间与Ｐｂ２＋ 结合形成特征簇合物Ｐｂ７ＭＴｓ,其ＣＤ谱图特征峰位于３１６ｎｍ （－ ）,２７０ ｎｍ （＋ ）,２４５ ｎｍ （＋ ）及２２５ ｎｍ （－ ）,提示解铅中毒的最佳条件应控制在弱酸性环境．不同亚型ａｐｏＭＴｓ 与Ｐｂ２＋ 的结合方式各不相同：Ｐｂ２＋ 与ａｐｏＭＴ－Ⅰ的结合采取平均分配的方式,而与ａｐｏＭＴ－Ⅱ则为选择性结合方式,表明这两种亚型在解铅毒功能上存在差异．     

以FITC作为荧光探针研究金属硫蛋白的构象变化

本文以异硫氰基荧光素（ＦＩＴＣ）作为荧光探针标记于金属硫蛋白分子上,用荧光光谱研究了Ｃｄ＾２＋及Ａｇ＾＋离子与ＺｎＭＴ２－ＦＩＴＣ进行金属交换及与ＡｐｏＭＴ２－ＦＩＴＣ进行金属重组时的构象变化。结果表明,标记后ＭＴ与Ｃｄ＾２＋离子进行金属交换及金属重组时不具有明显的结构域特征,而Ａｇ＾＋离子进行金属交换及金属重组时,分别在Ａｇ６ＭＴ、Ａｇ１２ＭＴ及Ａｇ１８ＭＴ处具有明显的结构域形成特征。此外高温下     

脱金属硫蛋白与镉离子的络合作用及构象研究

用圆二色（ＣＤ）谱地研究兔肝脱金属硫属蛋白的两个亚型与Ｃｄ＾２＋的络合作用及对重组ＭＴ构象的影响。观测了ａｐｏ－ＭＴ垢巯基在空气和室温下的稳定性。在ＰＨ４．７１,镉重组ＭＴ１的ＣＤ谱特征峰在２５７ｎｍ（＋）,２３８ｎｍ（－）,２２６ｎｍ（＋）与镉诱导的天然ＭＴ１相同。在空气存在和ＰＨ７．９０的ＣＤ谱只有２４３ｎｍ（＋）一个峰。向两亚型分别加入７ｅｑＣｄ＾２＋测定ＣＤ谱随ＰＨ值的变化,发现在ＰＨ２．     

金属硫蛋白 - 潜伏膜蛋白融合基因的体外转录调控

ＥＢ病毒（ＥＢＶ）是一种与地区性伯基特氏淋巴瘤、鼻咽癌、何杰金氏病等多种人体肿瘤有关的疱疹病毒．已往的研究表明,潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）基因是ＥＢＶ最可能的致瘤基因．为制备ＬＭＰ基因转基因小鼠,探讨ＬＭＰ的体内致瘤作用,首先构建了含鼠金属硫蛋白－１（ＭＴ－１）基因调控区和ＬＭＰ基因编码区的ｐＢＲ３２２－ＭＴ－ＬＭＰ质粒,并用电击法将该质粒与ｐＫＪ１－Ｎｅｏ质粒共转染人胃癌细胞株ＭＧＣ,对ＭＴ－ＬＭＰ基因在转染细胞中的整合、转录情况及重金属镉和镍对该融合基因的转录调控进行了研究．结果表明：（１）两质粒共转染效率为８６．７％;（２）ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析显示,完整的ＭＴ－ＬＭＰ基因已整合入转染的ＭＧＣ细胞基因组,且在不同的转染细胞克隆中,ＭＴ－ＬＭＰ基因整合的方式及拷贝数不同,拷贝数从１到１９不等;（３）ＲＴ－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交分析证实,ＭＴ－ＬＭＰ基因不仅在转染的ＭＧＣ中能够转录,而且在１０μｍｏｌ／Ｌ镉诱导下,ＭＴ－ＬＭＰ基因转录增强,平均增高约１．４倍．结果说明,在ＭＴ－１基因调控区指导下,ＬＭＰ基因不但有ｍＲＮＡ水平的表达,而且其表达受重金属镉的调控,上述结果为制备ＭＴ－ＬＭＰ转基因小鼠