克鲁维酵母与酿酒酵母属问原生质体融合构建高温酵母菌株*

通过PEG诱导碘乙酸灭活呼吸缺陷克鲁维酵母（Kluyveromycessp．Y034）原生质体与酿酒酵母（SaccharomycescerevisiaeA001）原生质体融合,获得45℃发酵产酒率高达8．7％的高温酵母菌株AY006。线粒体缺失和氯霉素抑制可显著降低高密度原生质体回复抑制效应。对融合子菌落形态、同工酶性质和高温发酵等方面分析,融合株表达了耐温和高产酒率双亲优良性状,证实其杂种特征。     

酵母菌属间原生质体融合构建高温酵母菌株

酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) A001和克鲁维酵母(Kluyveromyces sp.) Y034属间原生质体融合构建高温酵母菌株。对制备高再生活性原生质体及融合子细胞形态、生理化特征、同工酶性质、遗传稳定性和高温发酵等方面进行了研究。结果表明,融合子AY023和AY680遗传性能稳定,表达了双亲优良性状,获得了在45℃培养条件下产酒率7.4%的属间融合菌株,是目前已见文献报道的产酒率最高的高温(45℃)酵母菌株。     

原生质体融合构建耐温酵母菌株

耐温的克鲁维酵母与产酒率高的酿酒酵母进行属间原生质体融合构建耐温酵母蓖株,经ＤＴＴ分段预处理获得大量具再生活性原生质体对融合株ＡＹ０２３等进行了乙醇脱氢酶同工酶,麦芽糖同化,遗传稳定性及高温发酵分析,融合株ＡＹ０２３表达了双亲遗传特性,在４５℃高温发酵条件,乙醇产率高达７．４％,是目前已见文献报道的产酒率最高的耐温酵母菌株。     

克鲁维酵母种间原生质体融合的研究

乳酸克鲁维酵母(Kluyueromyces lactis Y12—1)和脆壁克鲁维酵母(K.fragilis8554)是乳糖酶生产菌株。应用原生质体融合技术进行了两菌株种问融合的研究。通过试验．原生质体形成及再生的最佳条件为：对数期的细胞,2％的蜗牛酶．30℃酶解30分钟．原生质体形成率90％以上,再生率20%左右。原生质体融合由聚乙二醇(PEG)诱导。K.lactisY12-l不能旋酵菊糖;K.fragilis 8554不能同化D－松三糖和麦芽糖;利用二菌株自身的营养缺陷性质获得融合子。融合子既能发酵菊糖又能同化D－松三糖和麦芽糖;融合子的DNA含量约为二亲株之和;融合子的菌落形态与亲株相比有一定差别．在以乳糖为碳源的培养基中,融合子的乳糖酶产量提高14一l6％;连续15次传代,融合子稳定。     

原生质体融合构建耐温酵母菌株#

耐温的克鲁维酵母(Y₀₃₄)与产酒率高的酿酒酵母(A₀₀₁。)进行属间原生质体融合构建耐温酵母菌株,经DTT分段预处理获得大量具再生活性原生质体对融合株AY₀₂₃等进行了乙醇脱氢酶同工酶,麦芽糖同化,遗传稳定性及高温发酵分析,融合株AY₀₂₃表达了双亲遗传特性。在45℃高温发酵条件,乙醇产率高达7.4％,是目前已见文献报道的产酒率最高的耐温(45℃)酵母菌株。     

酵母菌属间原生质体融合获得能发酵乳糖生产酒精的融合体

本文报道了用聚乙二醇(PEG)诱导酿酒酵母 （Saccharomyces cerecisiae)和乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)属间原生质体融合。融合体的细胞体积约为两亲株之和;融合体的DNA含量约为亲株的两倍;融合体具有双亲株的遗传标记。融合体不仅能发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、半乳糖、棉子糖和蜜二糖,而且也能发酵乳糖。在以乳糖为碳源的培养基中,融合体的发酵力是亲株乳酸克鲁维酵母的两倍多;在以葡萄糖为碳源的培养基中,融合体与亲株酿酒酵母的发酵力接近。     

耐温酵母与酿酒酵母的属间融合及融合株的高温乙醇发酵

利用原生质体融合技术进行耐温的克鲁维酵母（Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ Ｙ０３４）与酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｕｉｓｉａｅ Ａ００１） 的属间融合,获得属间隔合子ＡＹ０６８。该融合株在４５℃下进行高温乙酵发酵,结果表明融合株表达了双亲耐温和产酒率高的特性。通过正交试验优化培养基成分,表明蛋东用量对菌体热抗性差异显著。比较了不同温度条件下,菌体生物量、糖利用率、ｐＨ因素与酒精产率的     

原生质体融合构建耐温酵母菌株(英文)

耐温的克鲁维酵母（Ｙ０３４）与产酒率高的酿酒酵母（Ａ００１）进行属间原生质体融合构建耐温酵母菌株,经ＤＴＴ分段预处理获得大量具再生活性原生质体对融合株ＡＹ０２３等进行了乙醇脱氢酶同工酶,麦芽糖同化,遗传稳定性及高温发酵分析,融合株ＡＹ０２３表达了双亲遗传特性。在４５℃高温发酵条件,乙醇产率高达７．４％,是目前已见文献报道的产酒率最高的耐温（４５℃）酵母菌株     

克鲁维酵母高渗培养与原生质体制备与再生

研究了高渗预培养条件对克鲁维酵母Ｙ０３４原生质体形成与再生的影响。结果表明,同等条件下,经高渗预培养的原生质体再生率为常规培养的１．７倍,为改造菌株遗传特性而制备高活性原生质体探索了新的途径。     

酿酒酵母和克鲁维酵母发酵菊芋生产燃料乙醇

为获得菌株发酵菊芋生产燃料乙醇的最佳方案,首先选取实验室保存的重组菌株R32对其产酶条件进行优化,其最高产菊粉酶活性为298.8 U· mL-1,此时的最佳培养基配方为:YPG培养基为酵母粉1％ (w/v),蛋白胨2％ (w/v),甘油0.5％ (v/v);YPM培养基为酵母粉1％ (w/v),蛋白胨2％ (w/v),甲醇1％(v/v);培养基pH为自然初始pH.然后选取酿酒酵母S.c和克鲁维酵母Klu,比较是否在添加重组菌株R32粗酶液条件下,两株酵母菌分别进行单独发酵和混合发酵时的产乙醇能力,以获得最佳的发酵组合.结果表明,酿酒酵母S.c和克鲁维酵母Klu在未添加重组菌株R32粗酶液时,混合一步发酵获得的乙醇含量较高,发酵84 h时乙醇含量为11.37％.添加重组菌株R32粗酶液进行两步发酵时,2株酵母菌混合发酵72 h时,乙醇含量为11.43％.2种发酵组合的最高乙醇含量以及各个发酵参数基本相同,虽然一步法发酵时间延长,但节省成本,操作简单,更适宜工业生产应用.最后对其进行正交试验优化,培养条件为菊粉浓度225 g· L-1,脲素浓度40 g·L-1,接种量15％,pH为5时,酿酒酵母菌S.c和克鲁维酵母Klu混合一步发酵法的最高乙醇体积比达11.82％.     

酿酒酵母和产朊假丝酵母原生质体的形成、再生及属间融合

使用由亚硝基胍诱变所得到的营养缺陷型作为单倍体融合亲株的核基因标记,同时也采用线粒体球红霉素抗性突变株的小菌落形式作为融合亲株的线粒体基因标记。酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和产朊假丝酵母(Candida utilis)两亲株原生质体的制备是用对数生长早期的细胞在蜗牛酶和0.7M KCl及β-巯基乙醇或二巯基苏糖醇的作用下完成的。二者的原生质体的形成率在30—60分钟内达到90—99％。原生质体再生率,酿酒酵母最高为29—35％,产朊假丝酵母为7.5％。两亲株的原生质体在35％PEG(M.W.6,000),10mM CaCl_2条件下被诱导融合。在基础培养基上,长出以营养互补为标记的融合菌株。融合频率为10~(-5)—10~(-6)。试验表明,这些融合菌株具有杂种的性质。其中一株杂合子在同化D-木糖、纤维二糖等的能力上比亲株明显增强。     

酿酒酵母与糖化酵母的种间原生质体融合及其融合子的鉴定

本文报道了酒精生产菌株K氏酿酒酵母Sacchormyces cerevisiae var.ellipsoideus的HUK-1(his-,二倍体,但在我们所试的5种产孢培养基上均不产孢)与糖化酵母Sac—charomyces diastaticus 7c(arg-,a)的种间原生质体融合,其营养标记互补的融合频率约是2．07×10^-6—3．40×10^-5。这些融合子曾在选择培养基MMs或Mmo上连续传代10次,以促进两亲核的融合。融合子的酒精发酵特性,细胞形态、体积大小、DNA含量、繁殖速率、发酵强度以及产孢能力等方面的观察和测定结果表明,均不同于双亲菌株。用显微操作器解剖了个别原养型融台子HU—KDF—185的4孢子子囊,在获得的93个单孢株中,其淀粉发酵特性和遗传标记均有双亲类型的分离或重组现象。上述实验结果充分证明了不同倍性的酵母之间可以通过原生质体融合获得种间杂种。     

原生质体电诱导融合构建高温酿酒酵母

研究了采用原生质体电融合构建高温酿酒酵母。对影响电融合效率的几个参数、高温浓醪发酵和融合子遗传稳定性等方面进行了研究。确定了进行电诱导融合的最佳条件 ,并选出了 1株融合株。     

酿酒酵母与粟酒裂殖酵母属间原生质体融合选育降解苹果酸强的葡萄酒酵母

采用赖氨酸缺陷型酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｎｉｓｉａｅ）Ｌ１原生质与肌醇缺陷型粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）ＰＭ－５原生质体事例选育了葡萄酒发酵性能良好且具有降解苹果酸能力的酵母菌株。对融合子菌落形态、遗传稳定性、降解苹果酸能力和葡萄酒发酵性能进行了研究。结果表明：用促融合剂「３０％聚乙二醇（ＭＷ６０００）、０．０２ｍｏｌ／Ｌ ＣａＣｌ２和１     

基于rDNA序列分析的湖北克鲁维酵母系统发育地位探讨

国内于20世纪90年代初曾描述过两个克鲁维酵母新种:中国克鲁维酵母(Kluyveromyces sinensis M. X. Li et al.)和湖北克鲁维酵母(Kluyveromyces hubeiensis M. X. Li et al.),二者均分自湖北神农架自然保护区。前者已被国际酵母菌分类学研究者接受和承认,而后者却一直被忽视。本文根据小亚基(18S) rRNA基因、大亚基(26S) rRNA基因D1/D2区和转录间区(ITS)序列分析,对K. hubeiensis进行了分子系统学研究。结果显示,K. hubeiensis代表一个具有充分分子系统学数据支持的独立种,该种与Saccharomyces spencerorum和Kluyveromyces lodderae形成一个高支持率的分枝,且与前者更近缘。本研究还显示,K. sinensis与Saccharomyces naganishii具有很近的亲缘关系。鉴于目前仅依靠序列分析对Kluyveromyces和Saccharomyces及其它相关属进行调整尚不现实,故建议仍维持这两个属的传统概念,并继续使用原种名。     

酵母属间原生质体融合改进菌株木糖发酵性能

通过单倍体分离和紫外诱变,获得了１４株树干毕赤酵母（Ｐｉｃｈｉａｓｔｉｐｉｔｉｓ）７１２４和酿酒酵母（Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）１３００的营养缺陷型突变株。用聚乙二醇（ＰＥＧ）和电诱导融合及致死融合等方法,实现了树干毕赤酵母和酿酒酵母的属间原生质体融合。融合子能发酵木糖产生酒精,其厌氧发酵木糖和木糖葡萄糖混合液的能力明显优于亲株,耐酒精的性能也比亲株树干毕赤酵母７１２４有所提高。融合子经ＤＮＡ含量、细胞体积测定和稳定性能实验证明为稳定融合子。     

酿酒酵母单倍体与双倍体原生质体的融合

本文报道用酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)原生质体融合,得到营养互补的融合子为三倍体,其生长速度、发酵速率均较亲株提高1—2倍。部分融合子酒精的产量高于亲株,同时高于目前使用的酒精发酵生产菌株。