大链壶菌细胞核的初步研究

采用组织化学、荧光染色、透射电镜和小培养跟踪观察的方法对大链壶菌细胞核进行了初步研究,观察到该菌细胞核的形状、数目和其在细胞内的位置,以及游动孢子萌发过程中的核运动情况,为了解该菌的遗传结构进行初步的基础工作。     

水环境中的几种物质对大链壶菌灭蚊效率影响的初步研究

１９９１年１－４月,作者在实验室中观察了水中分别加入肝粉、葵花籽粉、田泥、淤泥、丝藻和人造沙后,对致倦库蚊幼虫的大链壶菌感染率的影响。发现除了造沙外,其他几种物质皆能明显地增加蚊虫的大链壶菌感染率。并且在一定范围内,蚊虫感染率与所加物质的量成正相关关系。据估计,每１００ｍｌ水中加６．４ｍｇ葵花籽粉或６ｍｇ肝粉分别可使蚊虫感染率增加２倍和３倍。作者认为大链壶菌在肝粉和葵花籽粉中弥漫地腐生生长,并释放     

大链壶菌灭庭院积水蚊虫的现场实验研究

为证实大链壶菌在贵州的现场灭蚊效果,首次选择部分孳生日纹伊蚊（Aedesalbopictus）和致倦库蚊（Culexquniquefasciatus）的积水轮胎和花园蓄水缸进行大链壶菌灭蚊实验。施放一次后,在连续观察的18日内该菌在两种水体中均表现了显著的治蚊作用。证明该菌可用于贵州的蚊虫综合治理。     

大链壶菌灭庭积水蚊虫的现场实验研究

为证实大链壶菌在贵州的现场灭蚊效果,首次选择部分孽生白纹伊蚊（Ａｅｄｅｓａｌｂｏｐｉｃｔｕｓ）和致倦库蚊（Ｃｕｌｅｘｑｕｉｎｑｕｅｆａｓｃｉａｔｕｓ）的积水轮胎和花园蓄水缸进行大链壶菌灭蚊实验,施放一次后,在连续观察的１８日内该菌在两种水体中均表现了显著治蚊作用,证明该菌可用于贵州的蚊虫综合治理。     

灭蚊真菌——大链壶菌原生质体形成和再生的研究

采用1％纤维素酶与1％真菌脱壁酶混合液作脱壁酶,0.6mol/L山梨醇为渗透压稳定剂,从摇床培养的12—14小时菌龄的大链壶菌(Lagenidium giganteum)菌丝体获得原生质体。酶解3—5小时后,产量可达1.4—2.0×10~6/mL。并在双层培养基上初步实现了原生质体再生。     

水环境中的几种物质对大链壶菌灭蚊效率影响的初步研究

1991年1—4月,作者在实验室中观察了水中分别加入肝粉、葵花籽粉、田泥、淤泥、丝藻和人造沙后,对致倦库蚊幼虫的大链壶菌(Lagenidium giganteum)感染率的影响。发现除人造沙外,其他几种物质皆能明显地增加蚊虫的大链壶菌感染率。并且在一定范围内,蚊虫感染率与所加物质的量成正相关关系。据估计,每100ml水中加入6.4mg葵花籽粉或6mg肝粉分别可使蚊虫感染率增加2倍和3倍。作者认为大链壶菌在肝粉和葵花籽粉中弥漫地腐生生长,并释放大量额外的游动孢子,是这两种有机物增加蚊虫感染率的主要原因。 对田泥、淤泥和人造沙的研究表明,土壤肥力与蚊虫感染率的增加有关。丝藻则可能是由于净化水质造成有利于大链壶菌游动孢子活动的环境而增加蚊虫的感染率。     

细胞核起源研究的意义和研究途径的探讨

细胞核的起源是真核细胞进化形成的关键。回顾了过去几十年国内外对细胞核起源问题的探索历程,通过多年的摸索找到了一个条切实可行的探索细胞核起源问题的途径。其要点：在一系列的进化环节中首先抓住原始性的细胞核这一重要环节,探明原始性细胞核的特性,解决了从原始核到典型细胞核的进化问题,原始性细胞核自身的起源问题也就有了基础,为探源始性细胞核的特性,需要在现存的原生生物中间寻找最原始的类群,然后对它们的细胞核进行尽可能深入地和多方面地研究,对所得结果作进化地分析,以期提出一个原始性细胞核的模型,依据这个模型也就可对典型的细胞核的进化形成和原始核自身的起源作出推论,而这个原始性细胞核的模型,依据这个模型也就可以对典型细胞核的进化形成和原始核自身的起源作出推论,这些推论是可以设法加以检验的,不仅可以检验这些推论的正确性,而且对原始核模型的建立是重要的,可以据之加以发展,修正,甚至否定,沿此途径已经否定了原始性细胞核的涡鞭毛虫核模型,进而提出了双滴虫核模型。     

兔体细胞核移植的初步研究

实验以兔胎儿成纤维细胞为核供体,对兔体细胞核移植技术的融合,激活和发育等环节进行了初步研究。实验通过比较不同电场强度对兔2细胞胚胎卵裂球融合以及卵母细胞激活的影响,证实200和260V/mm的电场强度可有效地诱导2细胞胚胎的融合和兔卵母细胞的孤雌激活。然后将200和260V／mm电场强度用于体细胞核移植,融合率分别为44．4％和48．4％,卵裂率分别为58．8％和53．8％,桑椹胚／囊胚发育率分别为5．9％和5．5%。但112枚核移植胚胎移植到5只受体后没有幼子出生。结果表明,实验中所建立的程序至少可以支持兔体细胞克隆胚胎的早期发育。     

非洲狼尾草珠心细胞核穿壁运动超微结构研究

用透射电子显微镜观察了非洲狼尾草珠心组织中细胞核穿壁运动。一个细胞核向相邻细胞转移时,可以进入一个或多个孔道：孔道直径0.33～0.68 μm。处于穿壁状态的细胞核染色质不正常地浓缩,电子密度大。     

金黄色破囊壶菌发酵生产DHA的研究

顺 4,7,1 0 ,1 3 ,1 6 ,1 9 二十二碳六烯酸 (ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃａｃｉｄ ,简称ＤＨＡ)是ω 3系列多不饱和脂肪酸。近年的研究表明 ,ＤＨＡ是组成大脑和视网膜的重要结构物质 ,如大脑灰质结构脂质中 6 0 %的脂肪酸均为ＤＨＡ[1] 。ＤＨＡ对人体健康有益的生理功能主要表现在[2 ] :调节中枢神经系统功能 ;预防和治疗心血管疾病 ;治疗气喘、关节炎等 ;预防和治疗乳腺癌、结肠癌等。由于ＤＨＡ具有上述生理功能 ,已在医药、食品、保健品等领域得到广泛应用。目前 ,商品ＤＨＡ主要来源于深海鱼油 ,如沙丁鱼、金枪鱼等鱼油 ,由于鱼…     

非洲狼尾草珠心细胞核穿壁运动超微结构研究

用透射电子显微镜观察了非洲狼尾草珠心组织中细胞核穿壁运动。一个细胞核向相邻细胞转移时,可以进入一个或多个孔道：孔道直径0．33～0．68μm。处于穿壁状态的细胞核染色质不正常地浓缩,电子密度大。     

大鼠心肌细胞核钙调素入核转运与核钙调节关系的探讨

最近发现,钙调素作为细胞内钙受体,除了调节胞浆的多种功能之外,可能还参与胞浆信号向核内快速传递。本研究观察大鼠心肌细胞核对钙调素的入核转运与钙浓度的关系,并初步探讨其调节机制。大鼠心肌细胞核采用差速离心和密度梯度离心分离提纯。用荧光分光光度计测定荧光标记钙调素向细胞核转入量发现,大鼠心肌细胞核对核外的CaM向核孔转运量具有[Ca~(2+)]浓度依赖性,随核外[Ca~(2+)]浓度的增加而增加(P<0.001),在[Ca~(2+)]浓度为10~(-3)mol/L时,ryanodine受体的拮抗剂rutheniumred和cADP ribose受体拮抗剂8-Br cADP ribose显著抑制CaM的细胞核孔转运(分别降低20％和18％,P<0.05),而IP_3受体拮抗剂heparin和Ca~(2+)-ATPase抑制剂thapsigargin抑制CaM的细胞核孔转运更显著(分别降低90％和89％,P<0.001)。上述结果表明心肌细胞核对CaM的向核转运,受核外[Ca~(2+)]和核钙摄取、释放所调节。     

刺激黄雀新纹状体前部大细胞核外侧部对发声和呼吸的影响

实验材料为乌拉坦麻醉的鸣禽黄雀（Ｃａｒｄｕｅｌｉｓ ｓｐｉｎｕｓ）。观察了电及化学刺激新纹状体前部大细胞核外侧部（１ＭＡＮ）对发声和呼吸的影响。结果如下：（１）电刺激１ＭＡＮ的不同区域都引起鸣叫反应。（２）长串电脉冲刺激１ＭＡＮ使呼吸频率增加,呼吸幅度降低。（３）短串电脉冲刺激１ＭＡＮ,落位于吸气相,产生吸气要断效应;落位于呼气相,可使呼气时程延长,以冲刺激１ＭＡＮ,落位于吸气相,产生吸气切断效应     

体外细胞核组装中核纤层与核膜的关系

采用非洲爪蟾卵提取物非细胞体系,以外源Lambda DNA诱导细胞核的体外组装,以此实验模式为基础,研究了细胞核体外组装过程中核纤层的组装,结果表明核纤层蛋白参与细胞核的体外组装过程,核内骨架的组装与核纤层的组装在时间上是有序的,核内骨架的组装可能为核纤层的装配提供了先决条件.在非洲爪蟾卵提取物非细胞体系中加入抗核纤层蛋白抗体,抑制核纤层的正常装配过程,核膜组装发生异常.结果提示核纤层的组装与核膜的组装是密切相关的.     

用改进的细胞核移植方法构建重构胚

为了能够找出一种既容易操作,又不需要特殊设备的核移植方法,对以前的操作进行了改进。首先以预先吸有细胞核或细胞的注射针在固定于持卵针上的卵母细胞透明带上穿刺两个孔,然后一边缓慢地将注射针回拔至卵周隙中,一边逐渐增加持卵针中的负压,直至极体与目标核质被完整吸入持卵针中而完成去核,最后在不拔出注射针的情况下直接注射细胞核或完整细胞进而完成重构胚的构建。用此方法对200个卵母细胞进行注核和注细胞操作,平均完成一个重构胚的构建各自耗时约40s和30s,成功率分别为62.6%和86.0%。用核染料Hoechst 33342 对卵母细胞的去核效率进行验证,去核成功率达到73.3%。实验证明,用此方法可以在只有倒置显微镜和显微操作仪的条件下一次性快速完成去核和注核,大大提高了细胞核移植的效率和重构胚成活率;更重要的是该方法操作简单,新手可以很快掌握该技术,易于在实际工作中推广应用。     

Nuclear Lamina（核纤层）—一种重要的细胞核结构

Nuclear lamina(核纤层)是细胞核内膜下由1至3种纤维蛋白(lamin)所构成的纤维网络或片层结构。Lamina与中间纤维及核内骨架相互联结,形成贯穿于细胞核和细胞质的骨架体系。Lamin与中间纤维蛋白具有同源性;Lamin的表达与细胞分化有关;Lamina在细胞分裂期中发生解聚和重装配。Lamina对核膜和染色质起支架作用,并与细胞核构建有关。     

用改进的细胞核移植方法构建重构胚

为了能够找出一种既容易操作,又不需要特殊设备的核移植方法,对以前的操作进行了改进。首先以预先吸有细胞核或细胞的注射针在固定于持卵针上的卵母细胞透明带上穿刺两个孔,然后一边缓慢地将注射针回拔至卵周隙中,一边逐渐增加持卵针中的负压,直至极体与目标核质被完整吸入持卵针中而完成去核,最后在不拔出注射针的情况下直接注射细胞核或完整细胞进而完成重构胚的构建。用此方法对200个卵母细胞进行注核和注细胞操作,平均完成一个重构胚的构建各自耗时约40s和30s,成功率分别为62·6%和86·0%。用核染料Hoechst33342对卵母细胞的去核效率进行验证,去核成功率达到73·3%。实验证明,用此方法可以在只有倒置显微镜和显微操作仪的条件下一次性快速完成去核和注核,大大提高了细胞核移植的效率和重构胚成活率;更重要的是该方法操作简单,新手可以很快掌握该技术,易于在实际工作中推广应用。     

家兔胚胎细胞核移植的研究

本研究以兔为实验材料,对细胞核过程中显微操作、电融合、电活化以及移核胚的培养等基本问题进行了研究。对兔进行PMSG－hCG超数排卵,收集成熟母细胞和16－细胞胚;后者经胰蛋白酶消化,去除胶膜和透明带,在不含Ca62 、Mg^2 的分离中分成单个卵裂球;然后,分别对两者做CB预处理;首次尝试采用WQilladsen法,去除卵母细胞核、并将单个卵裂球注入透明带,同时、与McGrath-Solter法进行比较;通过电融合使供体核进入去核的卵母细胞内;将所得移核胚在体外或在中间内体内培养并观察。结果表明：一、Willadsen法与McGrath-Solter法比较,核移植操作的成功率及以后的电融合率均无明显差异（Tab.1)。相对于后者,Willadsen法更简便、易于掌握并提高去核率。二、hCG超排注射后13－15h,观察卵母细胞发现：其中,67．8％保留有第一极体。此时的卵子若去除1／3胞质量,去核率可以达到58．3％。若推迟去核时间,第一极体退化,失去去核标志。三、比较不同电脉冲条件,发现强度为0．63kv/cm,持续160μs的一次电脉冲可获较高移核胚的融合率（70．8％）（Tab.2）;并可使61．1％的成熟卵母细胞活化。四、比较移核胚在体外和在中间有体内两种培养条件,前者只有34．6％能发育到6－8细胞期,而后者有23．0％能发育到桑椹胚或囊胚（Tab.3)。说明：需进一步优化家兔胚体外培养条件。