白地霉的化学成分研究

白地霉(Geotrichum candidum Link)固体发酵培养物,经乙醇提取、柱层析分离得到了7个化合物.通过光谱分析,分别鉴定为亮氨酸(1)、尿嘧啶(2)、胸腺嘧啶(3)、焦儿茶酸(4)、4-羟基苯甲酸(5)、3,5-二羟基苯甲酸(6)和7,8-dimethylalloxazine(7).7个化合物均是首次从白地霉中得到.     

白地霉的氧化代谢

1．自地霍完整静息幼胞氧化乙醇、乙酸、丙酮酸及草酰乙酸的速度很高,对其他三羧酸循环各酸如：琥珀酸、延胡索酸、a-酮戊二酸、苹果酸、柠檬酸、顺岛头酸及异柠檬酸也能氧化,但速度甚低。 2．在白地霉无细胞提取液中测出了三羧酸循环中以下各种酶活力：柠檬酸精合酶、异柠檬酸脱氢酶、顺岛头酸酶、a-酮戊二酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶、延胡索酸酶、苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、草酰乙酸羧化酶等,并间接得知有乙酸激活酶及L-谷氨酸脱氢酶存在。 3．在白地霉无捆胞提取液中测出了乙醛酸循环的两个关键的酶皂口异柠檬酸酶及苹果酸合成酶。 4．由以上结果可知白地霉可利用三羧酸循环及乙醛酸循环作为末端呼吸途径。     

白地霉一新变种的鉴定及其脂肪酶的研究

从各种加工厂采集的污泥、废水样品中,分离出157株菌落呈白色,绒毛状或粉状,皮膜型或脂泥型有脂肪酶活力的菌株。经筛选,获得一株产生高活力脂肪酶的菌株——S863,其发     

酒精废水发酵生产白地霉

利用糖厂的酒精废水,进行了白地霉的摇瓶培养研究,在单因素试验基础上,得出了白地霉培养的适宜条件,即废水先稀释0．2倍,添加0．2％硫酸铵,0．1％磷酸,0．1％硫酸镁,初始pH值调整为4．5,接种量为10％,28℃-30℃,在这条件下,得到了0．6－0．7％的干物质发酵产率。     

白地霉糖代谢酶体系的研究

除磷酸己糖激酶外,在白地霉无細胞提取液中测出有EMP途径及磷酸戊糖循环的主要酶类,葡萄糖和木糖培养的菌体在各酶活力方面无显著差异。用葡萄糖-C~(14)进行的呼吸实驗表明两种糖培养的菌株在不同代謝途径的相对比重方面也无明显差异。     

白地霉中甘露醇的鉴定及其形成机制的研究

(1)白地霉菌絲中含有大量的多元醇,經紙层析、紙电泳及提純結晶制备衍生物等方法鉴定为甘露醇。(2)白地霉无細胞提取液中有NADP-甘露醇脫氫酶存在,催化甘露醇被NADP氧化为果糖或相反地果糖被NADPH_2还原为甘露醇。(3)白地霉无細胞提取液中有磷酸酯酶,催化果糖磷酸酯水解为自由果糖及无机磷酸。(4)白地霉中測不出果糖-6-磷酸还原酶活力。(5)确定了甘露醇的形成途径为: D-果糖磷酸→Pi→D-果糖←NADPH_2 NADP→D-甘露醇(6)D-木糖培养的白地霉适应形成了NAD-艾杜糖醇脫氫酶,催化: 木糖醇←NAD NADH_2→D-木酮糖D-山梨醇←NAD NADH_2→D-果糖     

Rhodococcus erythropolis 手性醇脱氢酶的克隆表达及其性质

【目的】探讨红串红球菌中一种醇脱氢酶的性质及其对酮酯类及酮类底物的催化能力。【方法】从红串红球菌(Rhodococcus erythropolis ATCC 4277)中获取一段长度为1047 bp的醇脱氢酶(adh)基因,插入载体pET-22b(+)后,在大肠杆菌中进行重组表达。15℃的低温下用自诱导培养基诱导24 h,以苯乙酮为底物测定醇脱氢酶酶活。【结果】测得该诱导条件下重组菌体细胞破碎上清中醇脱氢酶酶活力为2.6 U/mg。经温度、pH耐受性等分析,发现该酶最适pH在6.0-6.5之间,耐受温度可以达到60℃,并且在该温度下保持5 h后,酶活也能保留80%。对于β酮酯类底物的催化反应,以对乙酰乙酸乙酯的催化能力最高。用4-氯乙酰乙酸乙酯(COBE)为底物进行全细胞水相催化反应,经手性液相色谱分析,发现在催化产物以R型4-氯-3羟基丁酸乙酯(CHBE)为主。【结论】该酶在酮酯类的底物转化方面有良好的开发潜力及应用前景。     

白地霉Cryytococcus neoformans脂肪酶的双水相萃取

本文研究了不同无机盐的双水相体系对白地霉脂肪酶的萃取分离效果,对PEG/（NH4）2SO4成相系统进行了系统的研究,通过考察体系PEG分子量、不同的无机盐、PEG浓度、（NH4）2SO4浓度、离子强度、pH值及（NH4）2SO4浓度对反萃取的影响,并通过正交实验进一步优化了实验条件,初步确定在PEG浓度15%,（NH4）2SO4浓度22.5%,pH8.0,不加NaCl的条件下进行双水相萃取,脂肪酶分离系数和纯化倍数分别为6.8和7.5,比活力达到40.3 U/mg蛋白。     

白地霉脂肪酶在毕赤酵母表面展示

将白地霉脂肪酶基因N端与酿酒酵母FLO絮凝结构域序列融合,构建成脂肪酶毕赤酵母表面展示载体并转化毕赤酵母GS115。免疫荧光检测证实脂肪酶已展示于毕赤酵母细胞表面。甲醇诱导96 h后展示酶活性达到81 U/g干细胞,酶的热稳定性较游离酶有较大提高,50℃孵育4 h后酶活仍保持初始酶活70%以上。     

浓缩糖蜜酒精废水发酵生产白地霉

探讨了利用糖厂的浓缩酒精废水,进行白地霉摇瓶培养的一些试验条件,即浓缩废水先稀释10倍,添加0.15%麸皮发酵进行到5h时补充0.1%硫酸铵,0.05%磷酸,初始pH值调整为4.5-5.0,接种量为10%,温度28-30℃,得到了0.4-0.45%干物质发酵产率。     

白地霉甘油脱氢酶的分离纯化及特性

从15株白地霉菌株中筛选出一株甘油脱氢酶活性和产量最高的菌株.利用Blue-Sepharose CL-4B和DEAE-Sepharose CL-6B两个柱子纯化后甘油脱氢酶达到电泳纯.该酶分子量约为94kD,亚基分子量约为31kD.纯化倍数和回收率分别为14倍和29%.该酶对2位羟基的直链低分子一元醇,二元醇或三元醇都表现出高的氧化活性,对"R型"的2-丁醇、2-戊醇和"S型"的二元醇、β-羟基酯类表现出显著的立体选择性;对2位羰基的直链低分子物质表现出明显的还原活性.     

根霉TC1653产纤维素酶提纯及酶学性质研究

对根霉所产纤维素酶酶系进行了分析并研究了部分酶学性质。实验选择超滤和凝胶柱分离相结合的方式提纯纤维素酶,结果显示根霉TC1653纤维素酶系是一个完全酶系,具有一个较为明显的内切葡聚糖酶组分。β-葡萄糖苷酶组分的最适反应温度为70℃,温度高于70℃时,活性迅速下降,但在这种高温下具有最高反应活性的酶很少见,很可能又是一种新的β-葡萄糖苷酶。     

绿色木霉纤维素酶系中C1酶的提纯与性质

从绿色木霉(Trichoderma viride) X2-85的麸曲抽提液中,分离出纤维素酶系中的C1酶,经纯化后,用聚丙烯酰胺凝腔电泳和超速离心鉴定,都为均一蛋白。在我们的实验条件下,它对羧甲基纤维素、3-葡萄糖苷及纤维二糖,都不表现活性。该酶能降解徽晶纤维紊、磷酸膨胀纤维素和脱脂棉,主要产物是纤维二糖。用Sephadex G一100凝胶过滤和SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量,分别为54,000和55,000。其沉降系数为4.18。     

白地霉自溶生产5′-核苷酸的研究

新鲜白地霉菌体Geotrichum Candidum Link(菌株编号中科2.1035)于pH10硼砂缓冲液,33℃条件下,保温18～20小时,自溶破壁,菌体中的核糖核酸则降解成为5'-核苷酸溶于溶液中,核苷酸收率按菌体中核酸含量计算为80%左右。本法经过工厂几年来的生产实践,表明是切实可行的。     

白地霉Y162脂肪酶基因克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

借助生物信息学,对已克隆的地霉属脂肪酶全长基因序列进行同源比对,根据保守序列设计引物,在基因组DNA和cDNA水平上,于国内首次克隆了Geotrichum candidum Y162脂肪酶基因.Gcandidum Y162脂肪酶基因全长1692bp,不含内含子,编码包括19个氨基酸信号肽在内的563个氨基酸.与NCBI GenBank中已报道的地霉属脂肪酶氨基酸序列有86%的一致性.将该基因克隆到pPIC9K表达载体上,转化毕赤酵母GS115,摇瓶发酵96h后毕赤酵母分泌表达55 U/mL重组脂肪酶,实现了脂肪酶的高效表达.酶学性质研究表明,该重组脂肪酶对C9位顺式双键的甘油酯具有明显的底物特异性;对甲醇、甘油等有机溶剂呈现耐受性;最适温度和最适pH分别为50℃和8.0,在pH6.0～10.0及60℃以下能保持60%以上的酶活力.底物特异性、有机溶剂、温度及pH耐受性赋予该重组酶良好工业应用潜力.     

醇脱氢酶的纯化、酶学性质及其不对称催化

为了研究木兰假丝酵母(Candida magnolia)中的醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase)3(ADH3)的突变酶(AIDI)的纯化、酶学性质以及不对称还原合成(3R,5S)-6-氯-3,5-二羟基己酸叔丁酯的能力。首先对AIDI进行(NH_4)_2SO_4沉淀、透析以及DEAE Sepharose离子交换层析。将纯化后的酶用于最适温度、pH、有机溶剂耐受等酶学性质的研究,同时考察底物浓度对催化效率的影响。结果发现:通过纯化获得了电泳纯的AIDI。酶的最适温度为40℃,最适pH为7.0。该醇脱氢酶的热稳定性较好,对环境pH的变化不敏感,在pH 4~8之间较为稳定。部分金属离子对该酶的活性具有抑制作用,特别是Fe2+对其具有显著抑制作用。在0.1 mol/L、pH 7.0的Na_3PO_4缓冲液中,底物质量浓度为50 g/L,30℃转化24 h,转化率能达到94%。     

酒精废水发酵生产白地霉（续上期）

2　结果和讨论2 1　糖蜜酒精废水稀释倍数对摇瓶发酵产率的影响 :糖蜜酒精废水虽然含有丰富有机质 ,但是也含有大量酵母的代谢废物和一些未知的毒素杂质 ,对白地霉的生长有一定影响 ,为此进行了废水的稀释倍数试验 (表 1 )。表 1　废水稀释倍数对白地霉生长的影响稀释倍数 (倍 ) 稀释后还原糖浓度 (% ) 菌丝体干重(ｇ/2 0 0ｍｌ) 菌丝体干重得率 (% )0 (对照 ) 1 60 0 760 3 80 2 1 3 3 1 12 0 5 60 3 1 2 3 1 0 2 0 5 10 41 14 0 90 0 450 5 1 0 60 82 0 411 0 0 80 0 780 3 9　　从表 1可以看出稀释 0 2倍的白地霉产量最…