威灵仙多糖对舌鳞癌细胞生长抑制作用的研究

目的:探讨威灵仙多糖对人舌鳞癌细胞Tca-8113的体外生长抑制作用。方法:提取分离纯化威灵仙多糖,用噻唑蓝(MTT)法测定在不同浓度威灵仙多糖作用下人舌鳞癌细胞Tca-8113的活力,观察药物对癌细胞的生长抑制作用。结果:威灵仙多糖对Tca-8113的生长具有明显的抑制作用,随着威灵仙多糖浓度的增大或作用时间延长,抑制作用逐渐增强,呈一定的剂量和时间依赖关系。结论:在体外实验中,威灵仙多糖对人舌鳞癌细胞Tca-8113具有明显的杀伤和抑制作用,可进一步研究其作为抗肿瘤药物应用于临床的潜力。     

microRNA-21对人舌鳞癌细胞的增殖和凋亡的影响

目的:探讨micro RNA-21(mi R-21)对人舌鳞癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:选取8例舌鳞癌组织和4例癌旁组织为研究材料,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(q RT-PCR)法对舌鳞癌及癌旁组织中的mi R-21相对表达量进行检测,利用人工合成的mi R-21mimic对人舌鳞癌Tca8113细胞进行瞬时转染,采用q RT-PCR法对Tca8113细胞中mi R-21相对表达量进行检测,采用四唑盐比色法(MTT)法对Tca8113细胞增殖情况进行检测,采用流式细胞术对Tca8113细胞周期与凋亡情况进行检测。结果:舌鳞癌组织中mi R-21的相对表达量(3.502±0.674),高于癌旁组织(0.998±0.192),差异有统计学意义(P0.05)。mi R-21mimic导致了Tca8113细胞中的mi R-21相对表达量上调(6.864±1.324),明显高于对照scramble组[(0.997±0.187),P0.05],对Tca8113细胞的增殖发挥了促进作用(P0.05)。经mi R-21mimic转染之后,Tca8113细胞进入S期的细胞出现了明显的增加[(27.4±5.1)%vs(48.6±8.7)%,P0.05],处于G1期的细胞出现了显著的减少[(56.3±9.6)%vs(36.2±7.2)%,P0.05],细胞凋亡数量出现了显著减少[(9.4±2.3)%vs(18.6±3.9)%,P0.05]。结论:mi R-21在舌鳞癌组织中高表达,过表达mi R-21有效促进了Tca8113细胞的增殖,抑制细胞的凋亡,mi R-21在舌鳞癌诊断和治疗可能具有一定的新型靶点价值。     

野生仙人掌多糖对肺鳞癌细胞SK-MES-1 生长的抑制作用

目的:探讨仙人掌多糖对体外肺鳞癌细胞(SK-MES-1)生长抑制作用。方法:体外培养SK-MES-1细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察野生仙人掌多糖对其生长的抑制,计算最低抑制浓度及抑制率;观察不同浓度多糖对细胞形态的影响;SDS-PAGE凝胶电泳简析不同组别蛋白质表达的差异。结果:野生仙人掌多糖24 h和48 h对肿瘤细胞的最低抑制浓度和抑制率分别为0.0625 mg/ml.34.06%和0.0625 mg/ml 35.37%;不同组间蛋白质表达有差异。结论:野生仙人掌多糖对SK-MES-1肺鳞癌细胞有抑制作用。     

五步蛇毒和蝮蛇毒透析前后的某些性质及五步蛇毒热稳定性的研究

五步蛇（Agkistrodon acutus）和蝮蛇（Agkistrodon halys）蛇毒透析前后含量、毒性和抗原成分的变化,以及温度对五步蛇毒致死活性的影响等,尚未见有资料。本文就浙江产五步蛇毒和腹蛇毒在透析前后的某些性质及五步蛇毒的热稳定性研究作初步报道。     

五步蛇毒对小鼠免疫功能的影响

目的 探索五步蛇毒对正常小鼠免疫功能的影响.方法 将KM小鼠随机分为5组,分别为空白组、五步蛇毒安全范围内低剂量组(30 mg/kg)、五步蛇毒安全范围内中剂量组(60 mg/kg)、五步蛇毒安全范围内高剂量组(120 mg/kg)(以下简称五步蛇毒低、中、高剂量组)以及西洋参组(30 mg/kg),每组10只.各组小...     

下调lincRNA HOTAIR对胃癌细胞迁移及增殖抑制作用的研究

通过下调人胃癌细胞BGC823中linc RNA HOTAIR基因的表达,该文探讨了linc RNA HOTAIR低表达对胃癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响。该文构建针对人linc RNA HOTAIR基因的干扰质粒sh HOTAIR,稳定转染入胃癌细胞BGC823、筛选稳转株,q PCR检测linc RNA HOTAIR在胃癌细胞中表达水平。采用划痕试验、侵袭试验、MTT法分别检测转染胃癌细胞迁移、侵袭及增殖能力。结果表明,稳定转染干扰质粒sh HOTAIR后下调linc RNA HOTAIR表达的胃癌细胞株细胞迁移、侵袭及增殖能力较阴性对照组明显减弱。下调胃癌细胞中linc RNA HOTAIR的表达,可降低胃癌细胞的迁移力、侵袭性、抑制其增殖能力,提示linc RNA HOTAIR可作为分子靶点用于胃癌的分子靶向治疗。     

hTRT反义基因转染对人结肠癌细胞生长的抑制作用

利用基因重组技术,hTRT基因反向插入真核表达载体pcDNA3．0,获得重组体pcDRTRT,通过脂质体法导入人结肠癌细胞株SW-111C,获得稳定转染细胞系,即反义细胞,该细胞易脱落,出现明显生长抑制现象;失去叠落生长能力;流式细胞仪(FCM)证实导入反义hTRT后,G0/1期细胞增加,G2M和S期细胞减少,增殖指数(PI)降低;且不能在软琼脂中形成集落;并发现反义细胞中hTRT表达水平明显下降。说明反义hTRT基因体外导入结肠在细胞株SW-111C可以明显降低端粒酶活性,抑制结肠癌细胞的生长、增殖且能使其恶性表型发生逆转。     

生物钟基因PER2在人口腔鳞癌细胞中具有重要的抑癌作用

探讨生物钟基因PER2对人口腔鳞癌SCC9细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响和机理。利用RNA干扰技术沉默SCC9细胞中PER2基因,应用实时荧光定量PCR检测Ki-67、MDM2、P53、Bcl-2、Bax、C-myc、MMP-2、Timp-2和VEGFm RNA的表达改变;流式细胞仪检测沉默后细胞的增殖和凋亡水平,平板克隆形成实验检测细胞的克隆形成率,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力的改变。沉默PER2基因后,SCC9细胞凋亡指数显著降低(p0.05),细胞增殖指数、细胞迁移和侵袭能力显著升高(均p0.05)。PER2沉默后Ki-67、MDM2、Bcl-2、C-myc、MMP-2和VEGF m RNA的表达水平显著升高(均p0.05),p53、Bax和Timp-2 m RNA的表达水平显著降低(均p0.05)。研究表明,生物钟基因PER2通过调控Ki-67、MDM2、P53、Bcl-2、Bax、C-myc、MMP-2、Timp-2和VEGF影响癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。因此,对PER2的深入研究有可能为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。     

Fat-1 基因真核表达载体的构建及其对人口腔鳞癌细胞 脂肪酸含量的影响

目的:构建真核表达载体pcDNA3.1-Fat1,线性化稳定转染人口腔鳞癌细胞株Tca8113,检测其细胞内脂肪酸含量变化。方法:通过重叠延伸PCR方法人工合成利于真核表达的Fat-1基因,用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3.1-Fat-1,用脂质体转染真核细胞的方法转染人口腔鳞癌细胞株Tca8113,用气相色谱仪检测脂肪酸的变化情况。结果:测序及酶切鉴定成功合成真核偏好表达的Fat-1基因。与对照组相比,转染Fat-1基因的口腔癌细胞的n-3脂肪酸明显增多,n-6/n-3明显下降。结论:成功构建真核表达载体pcDNA3.1-Fat1,并对口腔鳞癌细胞内脂肪酸含量产生明显影响,为进一步研究Fat-1基因在口腔鳞癌中的生物学功能奠定了基础。     

Fat-1基因真核表达载体的构建及其对人口腔鳞癌细胞脂肪酸含量的影响

目的：构建真核表达载体pcDNA3．1-Fat1,线性化稳定转染人口腔鳞癌细胞株Tca8113,检测其细胞内脂肪酸含量变化。方法：通过重叠延伸PCR方法人工合成利于真核表达的Fat-1基因,用基因重组技术构建真核表达载体pcDNA3．1-Fat—1,用脂质体转染真核细胞的方法转染人1：／腔鳞癌细胞株Tca8113,用气相色谱仪检测脂肪酸的变化情况。结果：测序及酶切鉴定成功合成真核偏好表达的Fat-1基因。与对照组相比,转染Fat—1基N的口腔癌细胞的n-3脂肪酸明显增多,n-6／n-3明显下降。结论：成功构建真核表达载体pcDNA3．1-Fat1,并对口腔鳞癌细胞内脂肪酸含量产生明显影响,为进一步研究Fat-1基因在口腔鳞癌中的生物学功能奠定了基础。     

针对uPA的siRNA对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用

目的:通过RNA干涉的方法抑制乳腺癌细胞中uPA的表达,观察uPA的表达抑制后对肿瘤细胞的体外侵袭能力的影响。方法:(1)构建可以表达针对uPA的siRNA的干涉载体,转染高侵袭性人乳腺癌细胞系MDA-MB231,G418抗性筛选,挑选单克隆株;(2)分别通过RT-PCR和WesternBlot的方法检测uPA的表达;(3)平板克隆形成试验检测转染前后肿瘤细胞的克隆形成能力;4BovdenchamberAssay检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果:(1)可以稳定表达针对uPA的siRNA的单克隆株,uPA的表达水平显著下降;(2)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株的克隆形成能力降低;(3)转染了针对uPA的siRNA的单克隆株体外侵袭能力与原代细胞MDA-MB231相比明显受到抑制。结论:uPA在人乳腺癌侵袭行为中发挥重要的作用,针对uPA的siRNA可以显著降低uPA的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭,可望成为抗肿瘤侵袭治疗的一种有效手段。     

罗格列酮对裸鼠移植性人肝癌细胞生长的抑制作用

目的:研究罗格列酮(rosiiglitazone,ROZ)对裸鼠体内人肝癌SMMC7721细胞增殖的影响.方法:建立人肝癌裸鼠移植瘤模型,实验动物分为罗格列酮治疗组及对照组.观察罗格列酮对移植瘤体积和重量的变化,采用光镜观察移植瘤细胞形态学变化,流式细胞术检测移植瘤细胞周期分布,免疫组织化学和蛋白印迹检测瘤组织内增殖细胞核抗原(proliferating cellnuclear antigen,PCNA)蛋白表达变化.结果:罗格列酮在体内能明显抑制移植瘤的生长,抑瘤率为50.81%;组织学显示治疗组瘤细胞异型性降低,核质比下降;流式细胞术分析显示,对照组移植瘤细胞处于G2/M期细胞为13.1%,与对照组比较,治疗组处于G2/M期细胞显著增多(29.1%).免疫组织化学和蛋白印迹检测均显示检测显示,经罗格列酮处理后,裸鼠移植瘤组织PCNA蛋白表达明显下调(P＜0.05).结论:罗格列酮可体内抑制人肝癌SMMC7721细胞增殖,并使癌细胞阻滞于G2/M期.     

喜树碱-氟尿苷纳米颗粒对口腔鳞癌细胞Tca-8113增殖与迁移的影响

目的:探究喜树碱-氟尿苷(CPT-FUDR)纳米颗粒对口腔鳞癌Tca-8113细胞增殖与迁移的影响。方法:制备喜树碱-氟尿苷纳米颗粒,通过丁达尔现象证明已组装完毕。将制备好的纳米颗粒组和喜树碱(CPT)单药组、氟尿苷(FUDR)单药组以及两种单药混合组(CPT/FUDR)作对比,采用MTT实验检测药物对口腔鳞癌细胞Tca-8113增殖的抑制作用,通过划痕实验探究CPT-FUDR纳米颗粒和CPT/FUDR混合药物对细胞迁移能力的影响。结果:MTT结果显示:在药物浓度大于0.1μM时,随着浓度的增加,四组细胞存活率均明显下降(P0.05),而CPT-FUDR纳米颗粒组Tca-8113细胞的存活率明显低于单药CPT、FUDR和CPT/FUDR混合物组(P0.05)。在划痕实验中,培养48 h后,CPT/FUDR混合物组和CPT-FUDR纳米颗粒组均显著低于空白组(P0.05),且CPT-FUDR纳米颗粒组显著低于CPT/FUDR混合物组(P0.05)。结论:在体外,CPT-FUDR纳米颗粒对口腔鳞癌Tca-8113细胞的增殖与迁移有较好的抑制作用,且抑制效果优于CPT/FUDR两种单药混合。     

蝮蛇毒,五步蛇毒对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响

观察吞噬百分率及吞噬指数两指标,结果示,小鼠腹腔注入鸡红细胞后０．５ｈ和２ｈ检测,蝮蛇毒１２μｇ／２０ｇ组和６μｇ／２０ｇ组,两指标均值均明显高于对照组（用生理盐水）;五步蛇毒５０μｇ／２０ｇ组和１０μｇ／２０ｇ组,除０．５ｈ检测见吞噬指数与对照组未出现明显差异外,余项均值均明显高于对照组。认为两种蛇毒均可提高巨噬细胞的吞噬作用     

Rab23 在鳞癌细胞系中的表达及其对鳞癌细胞侵袭的影响*

目的:观察Rab23在鳞癌细胞系中的表达及其对鳞癌细胞侵袭的影响。方法:western blot检测Rab23在四个头颈部鳞癌细胞系中的表达,对鳞癌细胞系HSQ-89用脂质体转染小干扰RNA,对Sa3用脂质体转染Rab23质粒,分别干涉或过表达Rab23,用铺有基质胶的transwell小室检测细胞侵袭能力,细胞划痕试验检测迁移能力。结果:Rab23在四个鳞癌细胞系中均有表达,在Hacat中不表达,HSQ-89细胞经Rab23干涉后细胞侵袭能力减弱,而Sa-3细胞过表达Rab23后细胞侵袭能力增强。干涉或过表达Rab23后,鳞癌细胞的迁移能力无差异。结论:Rab23可促进鳞癌细胞侵袭。     

乙醇对五步蛇（Agkistrodonacutus）毒毒性的影响

目的为了探索乙醇对五步蛇毒毒性的影响。方法将五步蛇毒不同浓度致死量经不同浓度乙醇体外处理后,选择小白鼠分别给予皮下注射、口服,并将致死量蛇毒于小白鼠皮下注射后立即于局部注射乙醇,观察蛇毒毒性情况。结果使用乙醇体外处理后的五步蛇毒毒性明显下降,小白鼠经皮下注射致死量五步蛇毒后立即在局部注射50％异蛇米酒或75％乙醇0．1～0．2ml有一定的保护作用,口服20倍致死量五步蛇毒未发现有毒性表现。结论五步蛇毒体外经过乙醇处理后毒性明显下降。口服五步蛇毒是安全的。蛇毒进入皮下后立即用乙醇处理有一定的治疗效果。     

口腔鳞癌细胞系NTCR中侧群细胞的相关研究

目的:口腔鳞癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤之一,本研究以侧群细胞为肿瘤干细胞突破口,通过检测、分选口腔鳞癌细胞系NTCR中侧群细胞(side population,SP)细胞亚群,深入研究不同细胞亚群的体内、外相关生物学特性,寻找口腔鳞癌中肿瘤干细胞存在的证据。方法:选取口腔鳞癌细胞系NTCR作为研究对象,Hoechst 33342染色后行流式细胞仪检测,分选口腔鳞状细胞癌中的SP细胞和非SP细胞,进行体外培养、长期分化和体内成瘤实验,对2种亚群细胞的体内和体外生物学特性进行检测和比较。结果:口腔鳞状细胞癌细胞系NTCR中含有9.3%SP细胞,其SP细胞在细胞的增殖能力、自我更新能力及裸鼠体内成瘤能力等方面与干细胞特性相似。结论:SP细胞可以认为是肿瘤干细胞的富集。进一步深入研究,有可能作为口腔鳞癌诊断、治疗和预后的靶标。     

五步蛇毒降纤酶的快速分离与纯化

目的：建立快速分离纯化降纤酶工艺方法适合于规模化生产。方法以五步蛇毒为原料。采用ＥＤＴＡ络合－硫氰酸钾沉淀初步分离与快速离子交换和凝胶层析化相结合。分离纯化出符合新部颁标准的降纤酶成分。结果经初步分离五步蛇粗毒可使出血毒去除９２％,非类凝血酶（ＴＬＥ）成分去除６５．１７％,ＴＬＥ活性回收保持９２．６８％以上。层析组份中至少含有４种ＴＬＥ,其中１种为降酶成分。初步化学分离,。离子交换柱层析和凝胶过滤     

重组人内皮抑素对食管癌细胞生长抑制作用的体外研究

目的:探讨重组人内皮抑素(rhES)对食管鳞癌系KYSE-150及TE1细胞生长的影响。方法:应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,以大鼠成纤维细胞L929为对照细胞,检测rhES不同浓度(0、12.5、25、50、100、200、400、600μg/ml)和作用时间(24h、48h)对食管鳞癌系KYSE-150、TE1和L929细胞的生长抑制作用。结果:大鼠L929细胞经rhES处理后,吸光度A值轻微降低,差异不具有统计学意义(P>0.05),食管鳞癌系KYSE-150、TE1经rhES处理后,吸光度A值明星降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:rhES明显抑制食管鳞癌系KYSE-150及TE1细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性。