miR-153-5p靶向SNAI1介导结直肠癌细胞的放疗抵抗

目的 探讨miR-153-5p在结直肠癌放疗抵抗中的作用,并进一步研究其潜在分子机制。方法 首先对放疗敏感细胞系SW480及放疗抵抗结直肠癌细胞系SW480R中miR-153-5p表达水平进行RT-qPCR检测;然后利用转染技术构建过表达miR-153-5p的SW480R细胞株,检测过表达miR-153后SW480R在接受放射后其细胞活力、侵袭能力、集落形成能力、凋亡水平的改变;免疫组织化学染色观察放疗敏感及放疗抵抗结直肠癌组织中SNAI1的表达差异;TargetScan分析miR-153-5p潜在靶点并利用荧光素酶实验验证;检测过表达miR-153-5p及SNAI1后SW480R细胞侵袭能力、集落形成能力及凋亡水平。结果 与SW480组相比,SW480R组细胞中miR-153-5p表达降低;过表达miR-153-5p的SW480R细胞细胞活力、侵袭能力、集落形成能力均明显减弱,而凋亡水平显著增加;与放疗敏感结直肠癌组织相比,放疗抵抗结直肠癌组织中SNAI1显著增加;SNAI1可能为miR-153-5p的作用靶点;过表达miR-153-5p及SNAI1后SW480R细胞侵袭能力、集落形...     

高级别胶质瘤组织中MDC1高表达和miR-590-5p低表达促进胶质瘤细胞凋亡

目的 探讨miR-590-5p、DNA损伤检查点蛋白调节子1(mediator of DNA damage checkpoint 1, MDC1)在高级别胶质瘤（high-grade glioma, HGG）组织中的表达及与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,并明确二者对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法 选取2019年1月至2021年2月河北北方学院附属第一医院64例HGG患者,评估放疗效果。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-590-5p水平,免疫组织化学染色检测MDC1表达情况,分析miR-590-5p、MDC1表达与胶质瘤病人术后放疗效果的关系,多因素Logistic回归分析影响HGG患者术后放疗效果的因素;体外培养胶质瘤U87MG细胞,并分别转染miR-590-5p mimic、MDC1-shRNA及其阴性对照,CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡;构建裸鼠移植瘤模型,观察过表达miR-590-5p和敲低MDC1对肿瘤生长的影响。结果 MDC1在HGG组织中的表达较正常脑组织中升高,mi R-590-5p表达较正常脑组织降低,二者表达水平呈负相关;MDC1表达...     

LncRNA SNHG3/miR-423-5p对IL-1β诱导的骨关节炎软骨细胞损伤的影响

该文旨在探讨lncRNA SNHG3/miR-423-5p轴对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的骨关节炎软骨细胞损伤的影响。IL-1β诱导软骨细胞建立细胞损伤模型,将si-NC、si-SNHG3、miR-NC、miR-423-5p mimics分别转染至软骨细胞后加入10μg/L IL-1β处理24 h,将si-SNHG3和anti-miR-NC、si-SNHG3和anti-miR-423-5p分别共转染至软骨细胞后加入10μg/L IL-1β处理24 h; MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡情况; ELISA法检测IL-6、IL-8、IL-10的水平;双荧光素酶报告实验检测SNHG3与miR-423-5p的靶向关系; Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。IL-1β诱导的软骨细胞中SNHG3的表达量升高(P<0.05), miR-423-5p的表达量降低(P<0.05);转染si-SNHG3或转染miR-423-5p mimics后细胞增殖抑制率、细胞凋亡率和Bax蛋白水平降低(P<0.05), IL-6、IL-8的水平降低(P<...     

LINC00680通过靶向miR-195-5p调控IL-17诱导的肺癌细胞增殖、迁移和侵袭

该文主要讨论LINC00680靶向调控miR-195-5p对IL-17诱导的肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。将肺癌细胞H1299分为Control组、IL-17组、IL-17+si-NC组、IL-17+si-LINC00680组、IL-17+si-LINC00680+anti-miR-NC组、IL-17+si-LINC00680+anti-miR-195-5p组。采用qRT-PCR检测LINC00680和miR-195-5p的表达;克隆形成实验、MTT检测细胞增殖情况;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测Ki67、E-cadherin、N-cadherin蛋白表达水平;荧光素报告实验验证LINC00680和miR-195-5p靶向关系。与Control组比较,IL-17组LINC00680相对表达量、克隆细胞数、细胞活力、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki67和N-cadherin蛋白合成产物明显增加,E-cadherin蛋白、miR-195-5p相对表达量明显减少。与IL-17+si-NC组比较,IL-17+si-LINC00680组LINC00680...     

miR-182在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察前列腺癌组织及不同前列腺癌细胞系中miR-182的表达,并探讨下调其表达对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制。方法:采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测30例前列腺癌组织和30例相应的癌旁组织以及前列腺正常上皮RWPE-1细胞、前列腺癌PC-3、LNCa P和DU145细胞中miR-182的表达,进一步采用Lipfectamine 2000脂质体转染miRNA-182 inhibitor和阴性对照miRNA于PC-3细胞后,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫印迹(Western blot)法检测转录因子FOXO1、血管内皮生长因子(VEGF)和抑癌基因p53蛋白的表达。结果:miR-182在前列腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.05);miR-182在前列腺癌细胞系PC-3、LNCa P和DU145中的表达均高于前列腺正常上皮细胞RWPE-1(P0.05),其中PC-3细胞中miR-182表达水平最高。转染miRNA-182 inhibitor至PC-3细胞成功下调miR-182表达后,细胞的增殖能力明显受到抑制,细胞凋亡能力明显增强,FOXO1表达水平显著升高,VEGF和p53的表达明显降低,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:miR-182在前列腺癌组织及细胞中呈高表达,下调miR-182的表达可能通过增加FOXO1的表达并减少VEGF和p53的表达,抑制前列腺癌细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

miR-28-5p通过靶向MTSS1调控非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为

[目的]探讨miR-28-5p通过靶向MTSS1调控非小细胞肺癌细胞的恶性生物学行为。[方法]用双萤光素酶检测试剂分析荧光素酶活性,同时应用RT-PCR检测MRC5细胞和A549细胞中miR-28-5p和MTSS1 mRNA水平;用Lipofectamine法将miR-NC、miR-28-5p inhibitor和miR-28-5p mimic转染到A549细胞,培养48h后分别采用MTT法、流式细胞术和Transwell法检测细胞增殖、凋亡和迁移情况,同时蛋白印迹法法检测A549细胞中MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3表达。[结果] miR-28-5p与MTSS1有潜在的结合位点;转染miR-28-5p mimic可明显降低MTSS1-WT的荧光素酶活性,对MTSS1-MUT没有影响,而miR-28-5p inhibitor则表现出相反作用,表明miR-28-5p与MTSS1存在靶向调节作用;A549细胞中miR-28-5p mRNA的相对表达量高于MRC5细胞(P<0.05),A549细胞中MTSS1 mRNA的相对表达量低于MRC5细胞(P<0.05);通过miR-28-5p inhibitor降低miR-28-5p后,A549细胞凋亡、MTSS1、MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3的表达增加,细胞增殖和迁移降低(P<0.05);通过miR-28-5p mimic增加miR-28-5p后,A549细胞凋亡、MTSS1、MTSS1、PI3K、AKT和Caspase-3的表达降低,细胞增殖和迁移增加(P<0.05)。[结论] miR-28-5p在A549细胞中高表达,通过基因干预降低miR-28-5p表达后,miR-28-5p通过靶向MTSS1的3’端非编码区,提高MTSS1的翻译水平,抑制A549细胞的恶性生物学行为。     

circ_0001461靶向抑制miR-30a-5p对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响

摘要 目的：探讨circ_0001461对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及调控机制。方法：采用实时荧光定量聚合酶反应（qRT-PCR）检测检测circ_0001461在骨肉瘤组织和细胞中的表达水平。在U2OS和HOS细胞中转染sh-NC和sh-circ_0001461后,采用CCK8检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测增殖相关分子Ki-67 mRNA的表达水平,Western Blot检测凋亡相关分子Cleaved-caspase-3蛋白的表达水平。采用双荧光素酶报告基因检测circ_0001461和miR-30a-5p的结合情况。结果：circ_0001461在骨肉瘤组织中的表达水平明显高于癌旁正常组织（P<0.05）,circ_0001461在骨肉瘤细胞U2OS和HOS中的表达水平均明显高于成骨细胞NHOst（P<0.05）。低表达circ_0001461能够抑制骨肉瘤细胞U2OS和HOS的增殖和增殖相关分子Ki-67的表达（P<0.05）;促进骨肉瘤细胞U2OS和HOS的凋亡和凋亡相关分子Cleaved-caspase-3蛋白的表达（P<0.05）。双荧光素酶结果显示circ_0001461能够靶向结合miR-30a-5p。低表达circ_0001461能够促进miR-30a-5p的表达（P<0.05）,circ_0001461和miR-30a-5p在骨肉瘤组织中的表达呈负相关（P<0.05）。在U2OS细胞中共转染sh-circ_0001461和miR-30a-5p mimics后能够进一步加强单独转染sh-circ_0001461对U2OS细胞增殖和凋亡的影响（P<0.05）;在HOS细胞中共转染sh-circ_0001461和miR-30a-5p inhibitors后能够逆转单独转染sh-circ_0001461对U2OS细胞增殖和凋亡的影响（P>0.05）。结论：circ_0001461在骨肉瘤组织和细胞中明显高表达,低表达circ_0001461能够靶向促进miR-30a-5p的表达进而抑制骨肉瘤细胞增殖和促进细胞凋亡。     

miR-138-5p靶向缺氧诱导因子1α对胰腺癌PANC-1细胞生长和转移的调节作用

目的探索miR-138-5p对胰腺癌细胞PANC-1生长、转移的影响及其相关机制。方法应用荧光实时定量PCR (real-time quantitative PCR, RT-PCR)检测miR-138-5p及其缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor 1 alpha, HIF-1α)在PANC-1细胞中的表达。应用荧光素酶报告检测验证miR-138-5p与HIF-1α之间的生物学关系。通过体外试验研究miR-138-5p、HIF-1α在PANC-1细胞中的生物学功能,Western blot检测蛋白表达情况;CCK-8检测PANC-1细胞增殖能力;Transwell试验检测PANC-1细胞侵袭能力;划痕试验检测PANC-1细胞迁移能力。结果 miR-138-5p表达明显下调HIF-1α表达水平(P<0.01),生物信息学预测和荧光素酶报告试验证明miR-138-5p通过直接结合HIF-1α 3′-未翻译区域(3′-UTR)抑制HIF-1α。在PANC-1细胞中,miR-138-5p过表达可抑制HIF-1α表达及细胞增殖、侵袭、迁移,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论 miR-138-5p结合HIF-1α 3′-UTR的沉默HIF-1α;miR-138-5p通过打靶HIF-1α而抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖和转移。HIF-1α可能是胰腺癌的治疗靶点。     

基于生物信息学分析研究miR-182-5p通过靶向调控EP300促进乳腺癌细胞的侵袭和转移

近期研究表明,miR-182-5p对多种癌症的侵袭和转移具有重要作用,但其在乳腺癌侵袭转移中的研究相对较少。本研究通过网上在线microRNA分析工具下载乳腺癌组织及正常乳腺组织表达比较的数据集,分析发现在GSE4589、GSE38167、GSE61438等3个数据库中,在乳腺癌组织中存在26个相同的microRNA,其中8个上调,而我们实验验证发现hsa-miR-182在8例病理组织中的表达上调差异最显著(P=0.001),选定目的基因hsa-miR-182;qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达,结果显示,与MCF-10A相比,miR-182-5p在MDA-MB-231、T47D、MDA-MB-453、MCF-7中表达上调(P<0.05);转染miR-182-5p干扰质粒,qRT-PCR检测细胞中miR-182-5p的表达情况。结果显示,miR-182-5p表达显著降低(P=0.003),提示转染成功;Transwell侵袭结果显示,MDAMB-231细胞敲低miR-182-5p,与对照组相比,体外侵袭能力明显降低(P=0.002);Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒时,MDA-MB-231中上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物的表达情况,结果显示,与对照组相比,敲低miR-182-5p使细胞中上皮-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达上调,神经-钙黏着蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达下调。为研究探讨miR-182-5p的靶蛋白,采用在线预测软件预测可能与miR-182-5p结合的靶蛋白,cytoscape构建蛋白质互作网络图并筛选出hub基因;双荧光素酶结果证实,miR-182-5p可与EP300靶向结合(P=0.001);采用qRT-PCR、Western印迹检测转染miR-182-5p干扰质粒后EP300在mRNA及蛋白质水平的表达,结果显示,与对照组相比,在敲低miR-182-5p组中EP300在mRNA及蛋白质的表达上调(P=0.001)。综上所述,miR-182-5p可靶向调节EP300,促进乳腺癌细胞的侵袭与转移。     

miR-1271-5p靶向PDK1促进胃癌细胞凋亡

目的 探讨miR-1271-5p在胃癌的作用和可能的作用机制。方法 RT-qPCR和原位杂交法检测胃癌组织和胃癌细胞株中miR-1271-5p的表达。Lipofectamine 2000转染miR-1271-5p mimics后,噻唑蓝（MTT）法和台盼蓝染色法检测SGC-790细胞的活性,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,JC-1探针检测线粒体膜电位,Western blot检测PDK1/Akt/凋亡信号相关蛋白的表达。荧光素酶法以及功能修复实验评估miR-1271-5p与PDK1的靶向关系。结果 胃癌组织和细胞中miR-1271-5p的表达降低。转染miR-1271-5p mimics后,SGC-790细胞的存活率下降,凋亡率上升,线粒体膜电位以及Bcl-2和p-AKT表达降低,Bax和Cleaved caspase-3表达增高。PDK1为miR-1271-5p的靶基因,过表达PDK1能逆转miR-1271-5p对胃癌细胞的促凋亡作用。结论 过表达miR-1271-5p可促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与其靶向PDK1进而抑制AKT信号活性有关。     

lncRNA CBR3-AS1调节miR-145-5p/FSCN1轴对鼻咽癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

该文旨在探究长链非编码RNA CBR3-AS1(lncRNA CBR3-AS1)靶向微小RNA-145-5p(miR-145-5p)/肌动蛋白束蛋白1(FSCN1)轴对鼻咽癌(NPC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。qRTPCR法检测鼻咽癌组织中lncRNACBR3-AS1和miR-145-5p的表达水平。将鼻咽癌细胞CNE-1分为si-NC组、si-CBR3-AS1组、si-CBR3-AS1+anti-miR-NC组、si-CBR3-AS1+anti-miR-145-5p组、miR-NC组、miR-145-5pmimics组、miR-145-5pmimics+pcDNA组、miR-145-5pmimics+FSCN1组。双荧光素酶实验检测lncRNA CBR3-AS1和miR-145-5p及FSCN1和miR-145-5p的靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况; Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡情况; Transwell实验检测细胞侵袭能力; Western blot检测细胞周期负调控因子(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋...     

miR-96-5p靶向FOXO1调节脑缺血再灌注损伤机制

摘要 目的：探究miR-96-5p在脑缺血再灌注损伤（CIRI）中的作用及机制。方法：通过qRT-PCR检测36例确诊的缺血性脑卒中患者（IS患者组）和30例健康体检者（健康组）的血清miR-96-5p水平。将PC12细胞分为5组：对照组、NC-ag组、miR-96-5p-ag组、NC-an组、miR-96-5p-an组。采用Lipofectamine 2000对PC12细胞进行转染,通过qRT-PCR验证转染效率。将PC12细胞分为6组：对照组、氧糖剥夺/复氧复糖（OGD/R）组、OGD/R+NC-ag组、OGD/R+miR-ag组、OGD/R+NC-an组、OGD/R+miR-an组。根据分组对PC12细胞进行OGD/R处理和转染。通过MTT法检测PC12细胞活力,TUNEL法检测PC12细胞凋亡。采用改良Longa法建立大鼠CIRI模型,然后将大鼠分为假手术组、CIRI组、CIRI+NC-an组和CIRI+miR-an组。假手术组和CIRI组大鼠尾静脉注射生理盐水,CIRI+NC-an组和CIRI+miR-an组大鼠分别尾静脉注射NC-antagomir和miR-96-5p-antagomir。然后检测各组大鼠的神经功能评分、脑梗死体积和脑组织细胞凋亡情况。按照试剂盒说明书测定PC12细胞和大鼠脑组织中MDA、SOD和GSH-Px的含量。通过qRT-PCR检测PC12细胞和大鼠脑组织miR-96-5p和Forkhead box O1（FOXO1） mRNA水平,通过Western blot检测FOXO1、Ac-FOXO1、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果：与Health组比较,IS组患者的血清miR-96-5p水平显著升高（P<0.001）。与对照组和NC-ag组比较,miR-96-5p-ag组的miR-96-5p水平升高,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平均降低,FOXO1的乙酰化水平升高（P<0.05）。与对照组和NC-an组比较,miR-96-5p-an组的miR-96-5p水平降低,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平均升高,FOXO1的乙酰化水平降低（P<0.05）。与OGD/R组和OGD/R+NC-an组比较,OGD/R+miR-an组的相对细胞活力升高,TUNEL阳性率降低,Bax的蛋白相对表达量降低,Bcl-2的蛋白相对表达量升高,MDA水平降低,SOD和GSH-Px水平升高,miR-96-5p水平降低,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平升高,FOXO1的乙酰化水平降低（P<0.05）。与CIRI组和CIRI+NC-an组比较,CIRI+miR-an组大鼠的神经功能评分和脑梗死体积降低,TUNEL阳性率降低,Bax的蛋白相对表达量降低,Bcl-2的蛋白相对表达量升高,MDA水平降低,SOD和GSH-Px水平升高,miR-96-5p水平降低,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平升高,FOXO1的乙酰化水平降低（P<0.05）。结论：miR-96-5p在CIRI发生过程中表达上调,而下调miR-96-5p表达可能通过负调控FOXO1以减轻CIRI程度。     

上调miR-216a-5p通过靶向双特异性磷酸酶10抑制胃癌细胞自噬并增强放射敏感性

摘要 目的：探究miR-216a-5p对胃癌细胞自噬和放射敏感性的调控机制及其对双特异性磷酸酶10（DUSP10）的调控作用。方法：采用直线加速器6-MV X射线照射SGC-7901细胞,剂量率为0.8Gy/min,总剂量为8Gy。用Lipofectamine 2000试剂将miR-216a-5p mimic、NC mimic、pcDNA DUSP10或pcDNA NC转染到SGC-7901细胞中。转染后,将细胞分为miR-216a-5p mimic组和NC mimic组,每组又分为0Gy和8Gy两个亚组。在拯救实验中,将细胞分为miR-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组和miR-216a-5p mimic+pcDNA NC组。通过qRT-PCR检测miR-216a-5p和DUSP10 mRNA水平。通过5-乙炔基-2''-脱氧尿苷（EdU）掺入实验和集落形成测定检测细胞增殖。通过流式细胞仪评估细胞凋亡。通过Western blot检测DUSP10、Bax、Bad、Bcl-2、LC3和p62的蛋白表达。通过免疫荧光法检测γH2AX的表达,用于评估细胞中的DNA双链断裂（DSB）。通过荧光素酶报告基因检测miR-216a-5p和DUSP10的靶向关系。通过GFP-mRFP-LC3检测自噬体。结果：与8Gy NC-mimic组相比,8Gy miR-216a-5p-mimic组的集落数量、EdU阳性率和Bcl-2蛋白表达水平降低,而γH2AX阳性率、细胞凋亡率和Bax和Bad蛋白表达水平升高（P<0.01）。与8Gy NC-mimic组相比,8Gy miR-216a-5p-mimic组的自噬体数量和LC3II蛋白表达水平降低,而p62蛋白表达水平升高（P<0.001）。与miR-216a-5p-mimic共培养后,与DUSP10-3''-UTR-MUT组相比,DUSP10-3''-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著降低（P<0.001）。与NC-mimic组相比,miR-216a-5p-mimic组的DUSP10 mRNA和蛋白表达水平均降低（P<0.001）。与miR-216a-5p mimic+pcDNA NC组相比,miR-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组的集落数量和自噬体数量升高,而细胞凋亡率降低（P<0.001）。结论：miR-216a-5p通过抑制DUSP10来抑制细胞增殖、增加放射诱导的细胞凋亡并抑制放射诱导的自噬,从而增强胃癌细胞的放射敏感性。     

miR-659-3p靶向CTNNBIP1调控甲状腺癌细胞凋亡的机制

[目的]探讨miR-659-3p在甲状腺癌细胞中的潜在功能和机制。[方法]纳入甲状腺乳头癌患者60例,比较甲状腺患者癌旁组织和癌组织中miR-659-3p的表达水平。过表达或敲低miR-659-3p后检测甲状腺癌细胞TPC-1的增殖水平和凋亡水平,并进行底物鉴定。[结果] miR-659-3p的表达水平在60个甲状腺癌组织中也显著上调(P<0.05)。miR-659-3p敲低后TPC-1的增殖水平显著下降(P<0.05)、 TPC-1的凋亡水平显著上升(P<0.05)。敲低CTNNBIP1时,TPC-1的凋亡水平下降(P<0.05)、 TPC-1的细胞活力水平上升(P<0.05)。过表达miR-659-3p时,CTNNBIP1的蛋白水平和mRNA水平显著下降(P<0.05);敲低miR-659-3p时,CTNNBIP1的蛋白水平和mRNA水平显著上升(P<0.05)。过表达miR-659-3p后,Wnt/β-catenin通路的关键蛋白β-catenin的核定位增多;敲低miR-659-3p后,β-catenin的核定位减少。[结论] miR-...     

miR-424-5p通过下调BCL-2的表达抑制人肺癌A549细胞增殖

microRNAs(miRNAs)是一类在真核生物中广泛存在的长度约为20～22个核苷酸的单链非编码小RNA,通过与其靶基因mRNA的3′非翻译区（3′UTR）结合发挥转录后抑制作用,参与调节细胞生长增殖、细胞代谢、细胞凋亡以及肿瘤的发生发展等过程。为研究microRNA-424-5p（miR-424-5p）在肺癌细胞中的作用及机理,利用lipo2000转染试剂将miR-424-5p mimics转染入人的非小细胞型肺癌细胞(NSCLC)A549中,流式细胞术检测A549细胞的周期变化及凋亡情况,发现细胞生长阻滞于G1/G0期且凋亡率显著上升。利用克隆形成实验和CCK-8法分别检测,发现miR-424-5p导致A549细胞增殖能力及活力降低。用在线数据库预测出抗凋亡基因BCL-2可能是miR-424-5p的靶基因,随后扩增BCL-2 mRNA 的3′UTR,采用双荧光素酶报告实验及Western印迹检测证明BCL-2确为miR-424-5p的靶基因。构建BCL-2的真核表达载体pCMV-HA-BCL-2,与空载分别转染A549细胞后发现过表达BCL-2可抵消miR-424-5p引起的细胞周期阻滞及细胞凋亡。以上结果提示,miR-424-5p可以通过下调BCL-2的表达来抑制肺癌细胞增殖。     

MiR-199a-5p对肝星状细胞活化增殖的影响

miR-199a-5p是miRNAs家族的一员.为探讨对人肝星状细胞活化增殖和迁移的影响,为临床肝纤维化治疗提供新的思路,本研究构建miR-199a-5p过表达载体、合成miR-199a-5p反义寡聚核苷酸(anti-sense oligonucleotide,ASO)经脂质体转染LX-2细胞.采用CCK-8法和Transwell分别检测细胞增殖和迁移能力;集落形成实验检测LX-2细胞的集落形成能力;实时荧光定量PCR技术检测细胞中转染miR-199a-5p后纤维化相关基因α-SMA和Collagen Ⅰ的mRNA表达水平;Western blot检测各组细胞中α-SMA表达水平.结果 表明miR-199a-5p可以促进LX-2细胞增殖(P＜0.01)、迁移(P＜0.01)和集落形成(P＜0.01);而ASO-199a-5p-5p组细胞增殖(P＜0.01)、迁移能力(P＜0.01)和集落形成能力(P＜0.01)受到抑制.RT-qPCR结果显示miR-199a-5p在受TGF-β1刺激后的LX-2细胞中的miRNA表达水平高于未受刺激组的(P＜0.05),转染miR-199a组细胞中α-SMA的mRNA(P＜0.01)和蛋白(P＜0.05)表达水平升高.以上结论表明miR-199a-5p过表达能促进肝星状细胞活化、增殖.     

miR-194-5p靶向下调 CD44 抑制胃癌肿瘤干细胞上皮间质转化的机制研究

摘要 目的：探讨miR-194-5p靶向下调 CD44 抑制胃癌肿瘤干细胞（CSCs）上皮间质转化（EMT）的相关分子机制。方法：采用 qRT-PCR检测胃腺癌细胞系（SGC-7901、MGC-803、SPAG-9和MNK-45） 和胃粘膜细胞（GES-1）中 miR-194-5p、CD44、Snail 和膜型基质金属蛋白酶-1（MT1-MMP） 表达量,Western blot检测CD44、Snail 和MT1-MMP蛋白表达量。体外构建miR-194-5p过表达和低表达质粒载体并进行慢病毒转染,实验分为过表达组、对照组和低表达组,qRT-PCR和Western blot检测miR-194-5p、CD44、Snail 和MT1-MMP的变化;CCK8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞侵袭力,Western blot检测EMT标志物E-cadherin和N-cadherin蛋白表达量。结果：胃腺癌细胞系中miR-194-5p表达显著低于胃粘膜细胞,而CD44、Snail 和MT1-MMP表达量显著升高;SGC-7901和MGC-803与胃粘膜细胞的表达差异最明显（P＜0.05）。与对照组相比,过表达组miR-194-5p表达量明显升高,CD44、Snail 和MT1-MMP表达量显著下降,细胞增殖率和侵袭力下降,凋亡率升高,E-cadherin上调,N-cadherin下调（P＜0.05）。与对照组相比,低表达组miR-194-5p表达量明显下降,CD44、Snail 和MT1-MMP表达量显著增加,细胞增殖率和侵袭力升高,凋亡率下降,E-cadherin下调,N-cadherin上调（P＜0.05）。结论：胃癌中miR-194-5p低表达可能发挥抑癌作用,通过下调CSCs中CD44表达进而抑制EMT的发生。     

microRNA-708-5p对骨肉瘤细胞凋亡与迁移的作用及机制

该文主要研究microRNA-708-5p(miR-708-5p)在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞凋亡、迁移的影响及机制。该研究利用miRNA基因芯片筛选差异表达miRNA; qRT-PCR(quantitative Realtime PCR)检测miR-708-5p在骨肉瘤细胞株MG63和正常细胞hMSC、HS-5中的表达;通过阳离子脂质体介导法过表达miR-708-5p;分别用Hoechst 33258染色、流式细胞术、划痕实验、Transwell法检测凋亡和迁移;通过qRT-PCR检测miR-708-5p、ZEB1(Zinc?nger E-box binding homeobox 1)的RNA水平; Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达;利用TargetScan和双荧光素酶报告实验预测并验证miR-708-5p与ZEB1的靶向关系。结果显示, miR-708-5p在MG63中表达下调,恢复miR-708-5p表达水平可诱导MG63细胞凋亡并抑制迁移。Western blot结果显示,过表达miR-708-5p可上调E-cadherin,下调N-cadherin和ZEB1。双荧光素酶报告实验显示, miR-708-5p可直接靶向ZEB1。敲低ZEB1可抑制MG63迁移。该项研究结果表明, miR-708-5p可诱导骨肉瘤细胞凋亡,且通过靶向ZEB1来抑制迁移。     

circNEIL3靶向miR-218-5p对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响

该文旨在探讨circNEIL3对口腔鳞癌细胞生物学行为的影响及其可能的作用机制。采用qRT-PCR法检测口腔鳞癌组织、癌旁组织、人口腔鳞癌细胞(CAL-27、SCC-25、SCC-9、HSC-3)以及正常口腔角质细胞HOK中circNEIL3、miR-218-5p的表达量;以CAL-27细胞为研究对象,si-circNEIL3、miR-218-5p mimics、si-NC、miR-NC分别转染至CAL-27细胞, si-circNEIL3和antimiR-NC、si-circNEIL3和anti-miR-218-5p分别共转染至CAL-27细胞; MTT法检测CAL-27细胞增殖情况;流式细胞术检测CAL-27细胞凋亡情况; Transwell检测CAL-27细胞侵袭和迁移情况。双荧光素酶报告实验检测circNEIL3与miR-218-5p的靶向关系; Western blot检测Bax、Bcl-2、caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达量。与癌旁组织相比,口腔鳞癌组织中circNEIL3的表达量升高(P<0.01),miR-218-5p的表达量降低(P...     

circFNDC3B/miR-655-3p轴调控乳腺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡

为了探讨circFNDC3B对乳腺癌细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响及可能机制,该研究首先采用RT-qPCR法检测了83例乳腺癌组织及乳腺癌细胞系(MCF-7、T47D、Bcap-37)中circFNDC3B和miR-655-3p表达;然后分别转染circFNDC3B小干扰RNA、miR-655-3p模拟物、miR-655-3p抑制剂或共转染circFNDC3B小干扰RNA与miR-655-3p抑制剂至MCF-7细胞中,采用CCK-8法检测了细胞增殖,流式细胞术检测了细胞凋亡和周期,Western blot法检测了细胞中CyclinD1与Cleaved-caspase-3的蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证了miR-655-3p与circFNDC3B的调控关系。结果显示,乳腺癌组织和细胞系中circFNDC3B表达升高(P0.05),而miR-655-3p表达降低(P0.05)。下调circFNDC3B或上调miR-655-3p后,MCF-7细胞增殖活性和CyclinD1蛋白表达量降低,细胞周期进程受到阻滞,细胞凋亡率与Cleaved-caspase-3蛋白表达量增加,差异均具有统计学意义(P0.05)。circFNDC3B靶向结合并负调控miR-655-3p。下调miR-655-3p对MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响与上调miR-655-3p相反。下调miR-655-3p逆转下调circFNDC3B对MCF-7细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响。这说明,circFNDC3B可能通过抑制miR-655-3p的表达促进乳腺癌细胞增殖和细胞周期进程,并阻碍细胞凋亡。