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赭纤虫RNA聚合酶Ⅰ基因片段的分析 总被引:1,自引:0,他引:1
赭纤虫被认为是一类进化过程中较为原始的纤毛虫。本研究以储纤虫基因组DNA为模板,利用锚定PCR技术,扩增出RNA聚合酶I第二大亚基基因片段,并对扩增出的基因片段进行了克隆和序列分析。结果表明:由该基因片段导出的氨基酸序列中共有10个半胱氨酸,均由通用密码子UGU、UGC编码,开放读框中不存在由UGA转译为半眈氨酸这一非通用密码的现象。 相似文献
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黄瓜花发育的早期均有雌蕊和雄蕊原基的分化,但在发育过程中,由于雌蕊或雄蕊的发育受到阻滞,导致雄花和雌花的形成。近年来在拟南芥和金鱼草等植物中遗传学的研究表明,花器官的特征是由同源异形基因决定的。在拟南芥中,由于AG在决定雄蕊和雌蕊特征方面起重要作用,本研究利用 RT-PCR技术,从黄瓜的雌、雄蕊中分离出 AG的同源基因,并对其在花发育过程中的表达和可能作用进行了分析。首先,根据AG同源基因的保守区域设计5’简并引物5’-GA(A/G)AT(T/C/A)AA(T/C/A)AA(G/A)(A/C)G(G/T/C)ATCGA(C/A)AAC-3’,然后进行3’,RA CE PCR,扩增出约1kb大小的片段,序列分析表明该片段含有非常保守的MADS box。进而,利用5’ RACE PCR得到全长度的cDNA。该cDNA的核苷酸序列与CUM1(黄瓜 MADS box gene1)同源性高达97%。 CUM1在接牵牛中过量表达可引起花萼变为心皮状和花瓣变为雄蕊,说明CUM1为AG的同源基因。基于该基因与CUM1序列上的高度同源,我们认为其为黄瓜的AG同源基因。该基因命名为CMB1,基因银行登记号为AF286649。Souther 相似文献
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用PCR方法从pPAIJ.7中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)基因,与pPUC18重组,经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析,获得全长人PAI-2基因.PAI-2基因与表达载体pPIC9重组,构建受乙醇氧化酶1基因(AOX1)启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒,转化GS115宿主菌,经表型筛选和PCR扩增筛选阳性克隆,用甲醇诱导表达,重组PAI-2以分泌型表达,占分泌总蛋白的30%,具PAI-2抗原性,与低分子量尿激酶形成了抗SDS复合物,具抑制纤溶的活性(91.4AIU/ml).对培养条件也进行了探讨. 相似文献
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眼虫Astasia longa类核纤层蛋白基因的初步研究 总被引:1,自引:1,他引:0
利用PCR和克隆测序技术,对眼虫Astasia longa的核纤层蛋白(lamin)基因进行了研究。参考多种相对较低等多细胞动物的已知序列,设计出扩增lamin基因尾部区的引物,扩增获得两个主要片段:序列Ⅰ(650bp)和序列Ⅱ(797bp)。测序分析表明,序列Ⅱ包含序列Ⅰ,并具有lamin基因尾部特征(编码“CaaX“序列的四种密码子 终止密码子)的序列片段。 相似文献
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亚洲棉GAE6—3A上游序列的分离及其在烟草中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
根据E6基因保守域设计引物,PCR扩增出亚洲棉(Gassypium arboreum L.)GAE6基因长约400bp片段,序列分析表明该片段与海棉(G.bargbadense)E6基因同源性达96.8%。进一步合成2个反向引物协助进行PCR-96孔板筛库分离到亚洲板棉GAE6-3A克隆。酶切鉴定其插入片段长约8.0kb,序列测定及分析结果表明其上游和约1.5kb,将GAE6-3A上游序列克 含有 相似文献
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呼吸道合胞病毒在北京地区分离株G蛋白的基因分析 总被引:5,自引:0,他引:5
从经单克隆抗体证实为A亚型的北京地区呼吸道合胞病毒(RSV)分离株B79中,用RT-PCRT扩增出编码G蛋白的基因片段,克隆至载体pTZ18R中,经核苷酸序列测定证明,我国北京地区分离的A亚型株B79与RSVA亚型原型株(A2株)G蛋白基因的核苷酸同源性为93.8%,核苷酸的有义突变率为65%,由核苷酸推导出氨基酸序列的同源性为89.6%,氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守区的两端,而胞内区 相似文献
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用富集文库克隆人胰岛素基因组基因 总被引:1,自引:0,他引:1
通过构建可富集人胰岛素基因的λ噬菌体文库,克隆了人胰岛素基因组基因.首先从中国人血液白细胞中提取到人基因组DNA,用EcoRⅠ和BglⅡ对基因组DNA进行全酶切,经0.4%琼脂糖凝胶电泳,特异回收9.5kb左右的DNA片段.将该片段与λEMBL3/BamHⅠ臂连接,构建成一个特殊的人基因组λ噬菌体文库(富集文库),效价为2×104.同时采用PCR方法及用引物Ⅰ:5′GGACAGGCTACATCAGGAAGAGG3′,引物Ⅱ:5′CTGCGTCTAATTGCAGTAGTTC3′,从人基因组DNA中扩增出一段含胰岛素基因的1.36kbDNA片段,做为放射性标记探针,对文库进行了噬菌斑原位杂交筛选,从1×104个噬菌斑中筛选到一个含人胰岛素基因组基因的阳性克隆,并进一步完成了亚克隆和该基因1732bpDNA序列的测定.结果该基因的1732bpDNA序列包括部分5′端和3′端与国外发表的人胰岛素α型等位基因的序列相同 相似文献
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呼吸道合胞病毒北京地区分离株G蛋白的基因分析 总被引:5,自引:1,他引:5
从经单克隆抗体证实为A亚型的北京地区呼吸道合胞病毒(RSV)分离株B79中,用RT-PCR扩增出编码G蛋白的基因片段,克隆至载体pTZ18R中。经核苷酸序列测定证明,我国北京地区分离的A亚型株B79与RSVA亚型原型株(A2株)G蛋白基因的核苷酸同源性为93.8%,核苷酸的有义突变率达65%。由核苷酸推导出氨基酸序列的同源性为89.6%。氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守区的两端,而胞内区和跨膜区相对保守。本文探讨了我国北京地区RSV分离株的G蛋白基因同原型株之间的变异,在疫苗研制中的意义。 相似文献
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人血管生成素基因的优化表达及活性测定 总被引:3,自引:0,他引:3
血管生成素(angiogenin,ANG)广泛存在于多种肿瘤组织中,在肿瘤发生的不同刺激新生血管的形成。利用基因工程技术生产血管生成素,对于研究血管生成素的作用机制及寻找抗血管生成素的药物具有重大价值。倡该基因在大肠杆菌中不能直接表达,本文根据原核翻译起序列的局部二级结构自由能设计了AUG上下游序列,并利用RT-PCR方法从人肺癌细胞系A549中扩增出起始区改造的ang基因,成功构建了人ANG的高 相似文献
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恒河猴Fas基因的克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究猴艾滋病发病机制中细胞凋亡的作用,克隆凋亡相关基因Fas的cDNA序列。方法从恒河猴腹股沟淋巴结中提取总RNA,根据人的Fas cDNA序列设计上、下游引物,通过RT-PCR扩增出目的cDNA片段,将这一片段克隆到pGFM-T Easy载体中,筛选阳性克隆并进行序列测定。结果首次克隆了恒河猴Fas基因,编码序列为1005 bp,将其序列提交GenBank,收录号为AY007572。结论克隆的新序列与GenBank已收录的人和食蟹猴的Fas基因在编码序列的长度上稍有区别,人的编码序列为1008bp,食蟹猴的为996 bp。 相似文献
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人Nmi mRNA编码区存在变异形式 总被引:1,自引:0,他引:1
Nmi基因编码一种可与Myc相互作用的蛋白质.在人红白血病细胞系TF-1细胞去细胞因子GM-CSF后8h,发现NmiRNA表达水平升高.利用PCR方法从中扩增NmicDNA编码区,发现除正常大小的扩增片段外,还有一比公布核酸序列小约100~200bp的扩增片段.序列分析表明该片段为编码区第337~509位的碱基缺失,由GTTCCATTGCG11个碱基取代,形成一个开放读码框架,编码254个氨基酸,比野生型Nmi编码的307个氨基酸少53个氨基酸. 相似文献
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根据拟南芥(arabidopsisthahliana)GPA1的保守区段A设计一对特异引物(5′ctggggaatctggaaaatc3′,5′cacagctgtacacctcaaac3′)通过PCR从丝瓜核基因组中扩增植物的三聚体G蛋白α亚基编码基因,获得了2个片段(LFG1,LFG2),并已克隆和测序(已在EMBL数据库中登记,登记号为:y15270,y15271).序列分析表明LFG1和LFG2分别由1515bp和732bp构成,都含有三聚体G蛋白α亚基编码基因的保守区段A,但也都含有内含子.根据片段的大小及PCR的特性,LFG1可能是丝瓜三聚体G蛋白α亚基编码基因上的片段. 相似文献
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RTS启动子与GUS的嵌合基因在转基因水稻花药中的专一性表达 总被引:6,自引:1,他引:5
通过PCR扩增,从灿稻品种IR36中克隆了RTS启动子的DNA片段,序列分析表明,所克隆的DNA片段含1257个核苷酶,与Lee等(1996)报告的序列比较核苷酸同源履为97.1%,将-1228~+25的RTS启动子区段与GUS驱组成的嵌合基因插入双元载体的T-DNA中,经根癌农杆菌介导转化,得到转基因水稻植株。GUS活力检测表明,此嵌合基因不仅能在药花棋毡层,而且还在花药表皮细胞、药到内壁以及花 相似文献
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抗人CD3单抗重,轻链可变区基因的体外扩增,克隆和序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因5'端序列和J区序列,化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的OKT3杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录生成cDNA,以cDNA为模板,分别加入合成的重、轻链可变区引物进行PCR,扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入pUC19质粒,筛选出阳性克隆,用链终止法进行DNA序列测定。所测重链可变区基因全长357bp,编码119个 相似文献
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海藻糖合酶基因的克隆及其植物表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以担子菌灰树花的菌丝体中提取总RNA,并纯化出mRNA,mRNA经反转录合成cDNA第一链,以cDNA第一链为模板经PCR扩增海藻糖合酶(Tsase)基因,获得一长约2.2kb的片段,把该片段连接一pGEM-T-easy vector上进行测序,其全长共2199bp。随后将此片段以正向插入植物表达载体pBI121的HindⅢ+Xbal位点构建pUB,再把海藻糖合酶基因以正向插入载体pUB的BamH 相似文献
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通过凝胶滞留分析和荧光素酶报告基因检测系统,鉴定出人类β珠蛋白基因5′旁侧远端帽位上游-2132~-1822bp间存在一个活性沉默子片段(310bp),将其亚克隆至pUC-T载体中,然后采用人工设计的突变引物,将经DNA足纹分析确定的两个结合位点的核心基序(β珠蛋白基因帽位上游-2017~-2011bp间的“CTTCCGC”序列和-2006~-1997bp间的“CACTTTATTT”序列)分别定点诱变为“CTTAAGC”和“CACTTAAGTT”两个突变序列,从而构建成两种突变型310bp片段,可用于对活性沉默子位点的结构与功能及β珠蛋白基因表达调控机制的深入研究。 相似文献