雌二醇对虹鳟免疫功能的影响*

腺的成熟,大麻哈鱼属鱼类的抗病能力降低,其中的许多种在排卵(精)后死亡.虹鳟在繁殖季节后虽然不至于死亡,但极容易受许多病原菌的感染而发生病患.我们以前的研究提示,疾病的易感性可能与性激素的水平相关,但那些研究主要集中于雄激素对虹鳟免疫功能的影响.雌二醇是重要的雌激素之一,本研究运用酶联吸附免疫法、酶联吸附斑点法以及微量活性氧测定法,主要探讨了雌二醇在体内或体外对抗体的水平、产生抗体的细胞的数目和巨噬细胞产生活性氧的水平的影响.实验结果表明:(1)口服雌二醇能够提高未成熟虹鳟血浆中的雌二醇水平,这种提高能显著地降低血浆中的免疫球蛋白M(IgM)的浓度;(2)在离体的条件下雌二醇也能按剂量依赖方式降低来自成熟红鳟血液、头肾和脾脏的淋巴细胞中产生抗体的细胞数量以及抑制头肾的巨噬细胞产生各种活性氧.这些结果提示随着性腺成熟,免疫功能的降低可能与血液中雌二醇水平的升高有关,免疫功能的降低可能是导致生殖季节雌性虹鳟易受许多病原菌感染的原因之一.     

微孔比色法在猪胰腺PLA2制备中的应用

微孔比色法采用合成的磷脂类似物２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱作底物,在多孔聚苯乙烯板的小孔中反应,并用酶联免疫检测器连续测定和记录吸收值。同时应用此法及滴定法检测酶活力,从猪胰腺中制备了一种分子量低（１４．３ｋＤ）,对热、酸稳定,活性依赖Ｃａ＾２＋的ＰＬＡ２。两种方法检测结果具有可比性,而微孔比色法同时可测多个样品,有节约样品,灵敏度较高等优点。微孔比色法特别适用于大量的样品测定,如拮抗剂筛选、临床样     

微孔比色法在猪胰腺PLA_2制备中的应用

微孔比色法采用合成的磷脂类似物２－硫代十六酰乙基磷酸胆碱作底物,在多孔聚苯乙烯板的小孔中反应,并用酶联免疫检测器连续测定和记录吸收值．同时应用此法及滴定法检测酶活力,从猪胰腺中制备了一种分子量低（１４．３ｋＤ）,对热、酸稳定,活性依赖Ｃａ２＋的ＰＬＡ２．两种方法检测结果具有可比性,而微孔比色法同时可测多个样品,有节约样品,灵敏度较高等优点．微孔比色法特别适用于大量的样品测定,如拮抗剂筛选、临床样品及制备酶时层析级分的检测等．     

酰胺酶高通量筛选方法研究进展

酰胺酶是一种合成手性羧酸和酰胺衍生物的重要工具酶,在不对称合成中具有巨大应用潜力.传统的色谱分析方法通过检测底物及相应的产物去测定酰胺酶活性及立体选择性,十分费时费力.根据显色法、荧光法、NMR等原理,较为全面地综述了近年来国内外发展起来的高通量酰胺酶筛选方法.为酰胺酶筛选中筛选效率低、可靠性差等难题提供借鉴,也可为其他水解酶筛选模型的建立提供思路.     

密度梯度离心分离大鼠卵巢卵泡膜细胞

探讨用密度梯度离心法快速、有效地分离大鼠卵泡膜细胞.选取23～25 d雌性大鼠卵巢,用Percoll密度梯度离心法将卵泡膜细胞分离纯化,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)组织化学染色用于卵泡膜细胞纯度检测.分别用0.1 U/mL和1.0 U/mL卵泡刺激素(Follicle-stimulating hormone,FSH)及黄体生成素(luteinizing hormone,LH)处理细胞,无血清培养48 h后,酶联免疫法检测培养液中雄烯二酮和雌二醇的水平.分离所得细胞中,3β-HSD染色阳性细胞与总细胞数之比大于90％; LH组的雄烯二酮水平显著高于对照组和FSH组(P＜0.05),LH组中1.0 U/mL组的雄烯二酮水平又高于0.1 U/mL组.各组均未检测到雌二醇及孕酮.3β-HSD组织化学染色可快速有效地检验所分离的卵泡膜细胞的纯度,分离所得的卵泡膜细胞可对LH产生反应,且其中几乎没有混杂颗粒细胞.     

基于硒化镉量子点磁微球的微悬臂梁式免疫传感器片上磁分离

应用了以硒化镉量子点为荧光探针,具有磁性和抗体双重靶向功能的聚苯乙烯磁微球.设计了基于此种磁微球的新型微悬臂梁式免疫传感器,满足在液相环境中,借助嵌入到聚苯乙烯磁微球的荧光探针及微球表面的特异性抗体探针,达到生物分子的定性检测,借助具有纳米机械响应的微悬臂梁及微平面电感线圈,达到生物分子的定量检测及传感器的复用性,解决传统微悬臂梁式免疫传感器的不足.着重对三种粒径尺寸的硒化镉量子点进行了表征,同时针对片上磁分离的机理,梁上微电感线圈的结构,微磁场对磁微球的吸引进行了研究,设计并优化出满足新型微悬臂梁式免疫传感器所需的蛇形微平面电感线圈.通过生物磁分离实验,验证了设计及优化的结果,实现了用于生物分子分离的片上磁分离技术.     

雌二醇对鳟免疫功能的影响

伴随着性腺的成熟,大麻哈鱼属鱼类的抗病能力降低,其中的许多种在排卵（精）后死亡。虹鳟在繁殖季节后虽然不至于死亡,但极容易受许多病原菌的感染而发生病患,我们以前的研究提示,疾病的易感性可能与性激素的水平相关,但那些研究主要集中于雄激素对虹鳟免疫功能的影响,雌二醇是重要的雌激素之一,本研究运用酶联吸附免疫法、酶联吸附斑点法以及微量活性氧测定法,主要探讨了雌二醇在体内或体外对抗体的水平、产生抗体的细胞的数目和噬细胞产生活性氧的水平的影响。实验结果表明：（1）口服雌二醇能够提高未成熟虹鳟血浆中的雌二醇水平,这种提高能显著地降低血浆中的免疫球蛋白M（IgM）的浓度;（2）在离体的条件下雌二醇也能按剂量依赖方式降低自成熟红鳟血液、头肾和脾脏的淋巴细胞中产生抗体的细胞数量以及抑制头肾的巨噬细胞产生各种活性氧。这些结果提示随着性腺成熟,免疫功能的降低可有与血液中雌二醇水平的升高有关,免疫功能的降低可能是导致生殖季节雌性虹鳟易受许多病原菌感染的原因之一。     

酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的结果观察

目的:比较酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的结果,以探讨酶联免疫法和胶体金法在检验与病理科乙肝表面抗原检测中的应用价值。方法:选择2017年1月~2019年12月我院进行胃镜检查的100例上消化道疾病患者,均在胃镜检查前检测乙肝表面抗原,对照组使用胶体金法进行检测,观察组使用酶联免疫法进行检测。比较酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的阳性率、敏感度以及特异度。结果:酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的阳性率分别为35.00%(35/100)和33.00%(33/100),两种方法相比较没有明显的差异(P>0.05);酶联免疫法在胃镜检查前检测乙肝表面抗原的敏感度(97.34%)与特异度(98.12%)均明显高于胶体金法(P<0.05)。结论:酶联免疫法和胶体金法在胃镜检查前对乙肝表面抗原均有比较高的阳性检测率,但是酶联免疫法具有更高的敏感度以及特异度,仍然是现今检测乙肝表面抗原的主要方法,胶体金法由于检测方法更加简便和直观、方便携带、结果更加快捷,而且不需要特殊的仪器设备,更加适用于临床上紧急状态下患者的检测以及感染者初筛等情况。     

用A蛋白夹层酶联免疫吸附法对黄瓜花叶病毒的血清学鉴定

用A蛋白夹层酶联免疫吸附法(PAS-ELISA)对两个来自日本蓉茄和一个来自中国青椒植物上的黄瓜花叶病毒分离物进行了血清学鉴定和比较。该方法利用A蛋白和酶联A蛋白分别作预包被和检测结合于抗体一抗原一抗体夹层中的抗体,并通过底物反应,间接反应出病毒抗原的量。对经过两次差速离心纯化的病毒进行检测的结果表明,这三种黄瓜花叶病毒(CMV)分离物与黄瓜花叶病毒P、Q两株系同属一个血清型,即可能均属于黄瓜花叶病毒中的ToRS组。讨论了这种间接酶联免疫吸附法检测植物病毒的优越性和几个CMV分离物的提纯、保存方法。     

抗HIV-p24单克隆抗体细胞株的建立及初步应用

拟建立抗HIV-P24蛋白的单克隆抗体细胞株及双抗体夹心法,用于检测艾滋病人血清中的P24抗原。用纯化的基因工程表达的HIV-P24蛋白免疫BALB/c小鼠。取免疫小鼠的脾细胞和小鼠骨髓瘤Sp2/0的细胞融合,有限稀释法克隆细胞,ELISA筛选特异性抗体。结果克隆筛选出12株细胞,初步建立了检测HIV-P24抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验。本方法为监控艾滋病病毒感染的窗口期和艾滋病病人临床治疗效果提供了检测手段。