两株克隆F9细胞株的初步比较研究

我们用有限稀释法从F9细胞克隆得到了F9-1和F9-3两个克隆亚株,实验结果表明它们在生长行为,分化发育潜能RA诱导提高AKP活力和合成AFP等方面都存在着差异。F9-1细胞是以团块贴壁生长为主,F9-3细胞是以单个和少数细胞的团块悬浮生长为主。将F9-1细胞接种到129/SV-ter小鼠皮下,长出的瘤组织的切片表明,除了EC细胞组成的未分化的神经管样结构外,还含有分化的腺管组成。经RA处理后的F9-1细胞,长出的瘤块中腺管增多并具有分泌功能。不管RA处理与否。从F9-3细胞长出的瘤块中几乎全由未分化的EC细胞构成。F9-1细胞经RA处理72小时,AKP酶活力明显增加,比相应对照组细胞的酶活力提高2—3倍;而F9-3细胞经RA处理后酶活力无明显提高。F9-1细胞经RA处理72小时,AFP免疫酶染色呈现细胞质阳性反应,对照组呈阴性或弱阳性;而F9-3细胞经RA处理后,与不处理的对照组细胞一样,细胞质的AFP免疫酶染色都呈阴性反应。以上结果表明,F9-1克隆株是一株对RA反应比较敏感的EC细胞,能被RA诱导分化,提高AKP活力并诱导合成AFP。F9-3克隆株是一株对RA不敏感的EC细胞,不能诱导分化,AKP酶活力不增加,也不能合成AFP,这些特性似乎更接近于无能EC细胞。     

转化生长因子-β_1单克隆抗体TB21的生物学特性(英文)

转化生长因子-β_1(TGF-β_1)是转化生长因子家族中的一个重要成员,具有多种生物学功能,特别是调节细胞的生长和分化,参与细胞外基质合成,创伤愈合和胚胎形态发生等生物学过程。近年来,发展了一些抗TGF-β_1多克隆抗体和个别重组人TGF-β_1的单克隆抗体,对研究各种细胞的TGF-β_1的合成,定位和其它生物学效应发挥了作用。本文报道了抗人血小板TGF-β_1单克隆抗体TB 21的制备及其主要生物学特性,尤其是它对TGF-β_1免疫识别的专一性,以及调变对TGF-β_1敏感细胞的生长和增殖抑制的活性。结果表明,TB_(21)单克隆抗体为IgG_1亚型;对TGF-β_1有较高亲和力,亲和常数(Kaff)为1.47×10~8M~(-1);Westernblot 显示TB_(21)抗体能专一地结合25 Kd 成熟型分子和其12.5 Kd 的单体分子,对CCL/64细胞生长抑制和对NRK-49 F 成纤维细胞软琼脂集落形成的鉴定都证明TB21单抗对TGF-β_1的生物学效应有专一性的中和作用,可用于TGF-β_1的有关生物学研究。     

TGF-β通过TAGLN2诱导食管鳞癌EC9706细胞侵袭和转移

上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）使上皮细胞极性和细胞间紧密连接消失,并赋予肿瘤细胞侵袭和转移的能力。本研究应用携带TAGLN2特异性沉默序列或无关序列的慢病毒载体感染食管鳞癌细胞系EC9706,建立EC9706 shTAGLN2及阴性对照EC9706 shControl亚细胞系。以5～80 ng/mL不同浓度或40 ng/mL TGF-β刺激EC9706 shTAGLN2和EC9706 shControl细胞,发现与EC9706 shControl 细胞比较,EC9706 shTAGLN2细胞中TAGLN2的表达无明显增加,同时TGF-β诱导的间质标志物如N-cadherin、Vimentin等蛋白质表达无明显升高;上皮标志物如E-cadherin表达无明显降低; TAGLN2的沉默不仅阻断了TGF-β诱导EC9706 shTAGLN2细胞体外迁移和侵袭能力的增加,并抑制TGF-β信号通路下游分子p-Smad2/3的激活。本研究结果提示,TGF-β可能通过TAGLN2促进食管鳞癌的恶性演进,TAGLN2是潜在的食管鳞癌治疗的分子靶点之一。     

ERK1/2信号通路参与人滋养层细胞中转化生长因子-β1对MMP-9表达的抑制作用(英文)

正常滋养层细胞的侵润受转化生长因子-β(TGF-β)的调控。该文研究了人正常细胞滋养层细胞(CTB)中TGF-β1对MMP-2和-9表达的调控。结果表明,TGF-β1抑制CTB细胞中MMP-9mRNA的表达和酶原MMP-9的分泌,但不影响MMP-2 mRNA和蛋白的表达。IL-1β和TGF-β1均能抑制MMP-9 mRNA的表达和酶原MMP-9的分泌,但二者的效应互相拮抗。抑制ERK1/2信号通路导致TGF-β1对MMP-9 mRNA和酶原MMP-9的抑制作用受阻。以上结果表明ERK1/2信号通路参与TGF-β31对人滋养层细胞MMP-9表达的抑制作用。     

TGF-β1促进人子宫颈癌细胞Siha的侵袭、迁移及其机制研究

探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人子宫颈癌细胞Siha侵袭、迁移能力的影响及其可能的分子机制。用5 ng/m L TGF-β1作用Siha细胞72 h,通过倒置显微镜、CCK-8实验、单细胞克隆形成实验、细胞黏附实验和Transwell小室实验分别观察TGF-β1作用前后Siha细胞形态、增殖能力、克隆形成能力、黏附能力、迁移及侵袭能力的改变;Western blot检测TGF-β1作用前后基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9、VEGF、CFTR、P50、P65、E-cadherin及Vimentin蛋白表达的变化。结果表明,5 ng/m L TGF-β1作用Siha细胞72 h后,Siha细胞出现上皮细胞向间质细胞形态转变、黏附能力减弱、迁移和侵袭能力增强,伴随MMP-2、MMP-9、VEGF、CFTR、P50、P65和Vimentin表达上调,E-cadherin表达下调。该研究表明,TGF-β1可能通过诱导Siha细胞发生上皮–间质转化及上调MMP-2、MMP-9和VEGF的表达,促进Siha细胞的侵袭转移。     

低氧时肾上腺髓质素对人胚肺成纤维细胞胶原合成和转化生长因子β1表达的影响

观察低长因子β1(TGF-β1)表达的影响.体外培养人胚肺成纤维细胞,分常氧和低氧24、48、72 h组,用[3H]-脯氨酸掺入法反映细胞总胶原合成和分泌,ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1活化蛋白质含量.低氧24、48、72 h,细胞总胶原合成和分泌分别是常氧组的125.88%和124.74%、183.44%和165.73%、152.55%和172.93%(P＜0.01).低氧24、72 h,ADM(10-7mol/L)组细胞胶原合成分泌减少了19.24%和20.76%(P＜0.01)、9.57%(P＜0.05)和10.98%(P＜0.01);低氧48 h,ADM(10-9、10-8、10-7mol/L)组胶原合成分泌分别降低了5.57%(P＜0.05)和9.19%(P＞0.05)、11.09%(P＜0.01)和14.49%(P＜0.05)、35.41%(P＜0.01)和18.57%(P＜0.05).低氧48 h,细胞培养液中TGF-β1上升了24.17%(P＜0.05),加入ADM(10-7mol/L),TGF-β1比对照组下降了17.53%(P＜0.05);低氧72 h,ADM(10-7mol/L)组TGF-β1下降了19.49%(P＜0.05).低氧时ADM通过阻碍成纤维细胞胶原合成而影响低氧性肺血管改建及损伤组织修复过程,ADM与TGF-β1可能通过相互拮抗,共同调节成纤维细胞胶原的生成.     

姜黄素作用PTEN/PI3K/AKT通路诱导食管癌EC109细胞凋亡

目的:研究姜黄素作用食管癌的分子机制。方法:体外培养人食管癌细胞(EC109),15~120μmol/L姜黄素处理后,采用CCK-8法检测姜黄素对细胞的增殖抑制作用,透射电镜观察细胞超微结构,Annexin V-FITC/PI双染激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡,流式细胞术分析15~120μmol/L姜黄素作用EC109细胞后PTEN/PI3K/AKT通路相关蛋白PTEN、AKT、GSK3β和Caspase 3的表达水平。结果:CCK-8检测结果姜黄素能显著抑制EC109细胞的增殖,呈剂量和时间效应关系;透射电镜和激光共聚集显微镜观察发现姜黄素能使EC109细胞发生凋亡;流式细胞仪蛋白水平分析显示姜黄素可增强细胞中PTEN、GSK3β和Caspase 3的表达,抑制AKT的表达。结论:姜黄素抑制EC109细胞的增殖并促进其凋亡的生物学效应与增强PTEN的表达抑制PI3K/AKT信号通路有关。     

细胞因子与酒精性肝病

酒精性肝病(alcoholic liver disease,ALD)的发生发展过程与体内多种细胞因子有关,尤其是肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)在调节肝细胞的凋亡过程中具有重要作用。TNF-α可引起肝细胞凋亡与炎症反应等,抗TNF-α治疗能明显减轻酒精引起的肝损害;TGF-β具有增加细胞外基质的合成和抑制细胞外基质降解的作用,TGF-β1升高与肝纤维化密切相关。细胞因子可能是防治酒精性肝病的有效分子靶点。     

使用规律间隔的短回文重复序列cas9系统研究转化生长因子β1在小鼠黑色素瘤细胞中的作用

目的研究在小鼠黑色素瘤细胞系(B16)中使用成簇的、规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)靶向敲除转化生长因子β1(TGF-β1)后,细胞体外增殖、侵袭、迁移能力的变化。方法使用CRISPR-cas9系统建立敲除TGF-β1的小鼠黑色素瘤细胞系,用细胞培养计数法检测对照组、载体对照组与TGF-β1-组B16细胞的生长速度,用平板克隆与软琼脂克隆实验来检测三组细胞体外增殖能力,分别用Transwell小室与加基质胶Transwell小室检测三组细胞的体外迁移与侵袭能力。结果成功建立TGF-β1敲除了的B16细胞系,生长曲线在24、48、72、96 h测得3组细胞数目之间差异均无统计学意义(P均0.05);平板克隆一周结果显示:TGF-β1-组的克隆形成率0.067±0.032小于载体对照组0.489±0.034,而载体对照组小于对照组0.633±0.041,F=198.710,P=0.000;平板克隆2周时,TGF-β-组的细胞克隆形成率0.443±0.012与对照组0.489±0.064均大于载体对照组0.370±0.005,F=7.599,P=0.023;还发现虽然TGF-β-组的克隆形成数量多,但是克隆的直径小于其他两对照组;软琼脂克隆实验:对照组的形成率0.008±0.0001低于载体对照组0.012±0.0006与TGF-β1-组0.012±0.0007,F=65.39,P0.0001。侵袭能力实验显示:TGF-β1-组穿过膜的B16细胞数目(12±4.359)个明显的低于对照组(101±18.735)个与载体对照组细胞(100±8.889)个,F=52.34,P=0.0002;迁移能力实验结果显示:TGF-β1-组的B16通过Transwell膜的细胞数量(2.037±0.132)个明显的少于对照组(4.07±0.481)个与载体对照组(8.683±1.017)个,F=81.34,P0.0001。结论 TGF-β1敲除后的小鼠黑色素瘤细胞的体外生长、增殖能力并没有受到影响,但是侵袭与迁移能力受到了抑制。     

TGF-β/Smads通路转导蛋白在心力衰竭发病中的研究进展

转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）作用复杂,广泛参与哺乳动物的各种病理生理过程如影响细胞的增殖分化、参与心力衰竭发展。TGF-β信号通路关键的信号传导分子为胞浆蛋白Smads。TGF-β诱导分化心肌成纤维细胞,刺激胶原蛋白等细胞间质成分的合成,促进细胞间质的沉积和抑制弹性蛋白酶等的分泌,刺激蛋白酶抑制剂的表达,从而抑制Ⅰ型胶原成分的降解,促进心肌纤维化发展,进一步了解TGF-β/Smads通路转导蛋白的作用及机制,通过抑制TGF-β/Smads通路转导蛋白作为治疗新靶点为最终防止心力衰竭提供了新的思路。     

TIME RELATIONS OF GROWTH : III. GROWTH CONSTANTS DURING THE SELF-ACCELERATING PHASE OF GROWTH.

Growth curves consist, in all cases, of two major segments. The first major segment is, in the case of higher animals and plants, made up in turn of several (probably five) shorter segments during each of which growth takes place at a constant percentage rate. The transitions between the successive stages are abrupt, the abruptness being of the order of metamorphosis in cold blooded animals. It has been made clear in the first paper of this series that the time rate of growth following the major inflection declines at a constant percentage rate. The junction between the two major segments occurs at puberty in animals and flowering in plants. The two major segments are not symmetrical about the major inflection. The slope of the segment following the inflection is always less than the slope of the segment preceding the inflection. The major inflection does not occur in the center of the growth curve. The instantaneous rate of growth at the beginning of growth is of the order of 100–200 per cent per day (i.e. the body weight is doubled in from 7 to 17 hours). It may be mentioned that 2 months after conception the rate of growth in man is only 8 per cent per day. This is contrary to all the published statements. Thus, Minot concluded that growth begins at 1000 per cent per day; Jackson concluded that in man, growth during the 1st month takes place at 57.5 million per cent per month; during the 2nd month 990 per cent per month; during the 3rd month 390 per cent per month (8 per cent per day is only 240 per cent per month). The reason for the discrepancy between the values derived, by the method adopted by the writer, and the values given in the literature is explained by Fig. 1.     

THE LIGHT GROWTH RESPONSE AND THE GROWTH SYSTEM OF PHYCOMYCES

1. The Roscoe-Bunsen law holds for the light growth response of Phycomyces if the time component of stimulation is short. With exposures longer than a few seconds, the reaction time to light is determined by the intensity and not by the energy of the flash. 2. The possible nature of the very long latency in the response to light is considered in terms of the structure of the cell and its mechanism of growth. It is suggested that during the latency some substance produced by light in the protoplasm is transported centrifugally to the cell wall or outermost layer of protoplasm. 3. The total elongation occurring over a period of 1 to 2 hours is independent of flashes of light or temporary darkening. Light acts by facilitating some change already under way in the growth system, and during the principal phase of elongation is not a necessary or limiting factor for growth. 4. Judged by the reaction time, the original sensitivity is restored in the light system following exposure to light in about one-third the time required for equilibrium to be reattained in the growth system.     

鱼类生长和生长激素分泌活动的调节（综述）

本文综述近十年来在鱼类生长激素分泌和鱼体生长的神经内分泌调节方面取得的研究进展,阐明脑（各种神经内分泌因子）－脑垂体（分泌生长激素）－肝脏（产生类胰岛素生长因子）轴调控鱼类生长的作用,并在此理论基础上提出可供养鱼生产实践应用的基本途径。