基因库构建

930110用渡式分拣法分寓的富含在小麦粲色体中的HpaⅡ文摩的构tC英3/Wang,M.L.…I NucleicAcids Res.-1992,20(8).一1897～190l[译自DBA,1992,11(13),92—07265] 由小麦同步细胞培养物分拣出已鉴~IJDNA含量的染色体。由分拣的染色体构建了HpaⅡ基因文库,已分析的克隆DNA序列的一半是唯一或低拷贝致的。用约一半的序列作DNA探针,检测小麦染色体-4A的序列。非甲基化序列并非沿谷类染色体随机分布这一结果表明,其基因可能是相对集中成簇分布的。(朱遐)930111半合成组含的抗体文库-通过麓机谱变构t基因库[羹]/Barbas,n1.C.F.…,Proc…     

基因库构建

922884直接偏选含YAC克隆的cosmid文库〔英〕/Bax“-ndale,5.…/Nueleio Aeids Res一i。。1,1。 (25)一6651〔译自DBA,1992,11(4),92-01865〕 介绍了直接筛选含人类人造染色体(HAC)的cosmid基因文库的方法。从48XXXX人类细胞系的酵母人造染色体(YAC)基因文库中分离出重叠YAC克隆〔YGAS(41okb)和YGAio(4‘okb)〕,置于亨廷顿舞蹈病基因4 p16。3候选区内在紫外光下(36Onm)从凝胶上的酵母染色体带中切下HAC带。用(a一‘ZP)一dGTP和一dATP对D NA进行随机引物标记。通过与人切变胎盘DNA预杂交,从探针和经流式分拣的人第4染色…     

基因库构建

921720与染色体带型及数t有关的人类签因密码子用且类型的明显差异;核普酸序列数据与细胞遗传学数据的关系〔英〕/Ikemura,T.…了Nueleie AeidsRes厂1991,19(16)一4333~4339〔译自DBA,1991,10(22),91一12729〕 目前,DNA数据库中的人类基因组序列约为10Mb,为高分辨率染色体分带平均尺寸的数倍。通过数据考察,有可能弄清人类基因组的球性特征,从而建立基因序列数据(kb水平)与细胞遗传学数据(Mb水平)。对GenBank数据库进行广泛考察,计算2000个人类序列的密码使用率。第三密码子位置上的最高G+C%为97%,在250个序列中则为80%以上。最低G+…     

基因库构建

921317应用吸菌体展示文库制备抗体片段〔英〕/C lack-50。,T。…/Nature。一1991,352(6336)。一624~628〔译自DBA,1991,10(19),91一10869〕921318栽培花生徐州68一4核签因文库的构建〔中〕/梁涛…了莱阳农学院学报。一1990,7(3)。一iei~165 以EMBL4噬菌体多聚克隆载体将栽培花生徐州68一4的核DNA13~20kb片段进行了克隆,共得到重组噬菌体总数分别为5.6xl。,,8.4xl。,和1.3x10。的3个基因组基因文库。(孙国凤)921319弗兰克氏菌若因文库的构建〔中〕/秦敏…了西南农业学报。一1090,3(4)一56~60 采用cosm记质粒pLAFRI为载体,成功地构建…     

基因库构建

923250新的eDNA签因库构建法〔专,日〕/Toa一Fuel/Jo3254一652:05。02.90一JP一025844(13。11.91)05。02。90 as 025844。92一002455/01(21页)〔译自DBA,1992,11(6),92一03088〕 在构建cDNA基因库的方法中包括制备双链 (ds)。DNA、修饰及重新结合。已用此法有效地构建了相对微量。RNA的cDNA基因库。实例:用小鼠Friend细胞的胞质RNA和pol(A)十RNA合成ds eDNA。用NaOH/NaCI修饰此eDNA并通过用含ioXSSC、smM EDTA和50%甲酞胺的溶液处理使之重新结合。回收重新结合的cDNA、连接到噬菌体卜gtl。上并离体包装。测定了cDNA…     

基因库构建

920920分枝杆菌中的播人诱变和异常盆组〔英〕/Kalp-ana,G.V.一了Proe.Natl.Aead.Sei一U.S.A厂1991,88(12)。一5433~5437[译自DBA,1991,10(17),91一09668〕 用质粒pYUB36构建了耻垢分枝杆菌(对了卜o乙act。,艺u二‘拼eg必at云夕)基因组DNA文库。采用转座子Tnsseql,在大肠杆菌中克隆的分枝杆菌 DNA内制备了随机插入产物。含转座子的重组质 粒经同源重组被重新引入到分枝杆菌染色体中。以 此分离到几个随机营养缺陷株。为了将此方法延用 到结核分枝杆菌(M.tubec:105艺s)和BCG中, 将克隆的BCG甲硫氨酸基因在大肠杆菌接受Tns seql…     

基因库构建

922110在噬菌体表面装配组合抗体库:genelll位点〔英〕/Barbaslll,C.F.…/Proe.Natl.Aead.Sei.U.S。A一1991,55(18)一7975~7982仁译自DBA,1991,10(23),13354〕 建成phagemid pCombs系统,以使线型噬菌体M13(克隆于大肠杆菌XLI一Blue)表面的组合抗体Fab库呈单价。Fab片段与gene一111蛋白C-末端区融合。表面带有人抗一破伤风类毒素克隆10C Fab片段的噬菌体与非特异性噬菌体相比抗原覆盖表面积增大1000~100000倍。用此系统分拣预先鉴定的人组合抗一破伤风类毒素Fab基因库,以验证其可用性。此基因库已重新构建于pComb3中,保留了原有的…     

基因库构建

922472 从人21染色体构建并鉴定酵母人工染色体部分文库[英]/Bellis,M.…∥DNA Cell Biol.-1991,10(4).-301～310[译自DBA,1992,11(1),92-00024] 构建酵母人工染色体(YAC)的一般方法是:琼脂糖制备DNA、EcoRI部分酶切、脉冲电场凝胶电泳(PFGE)对片段大小的筛选、反向电场电洗脱(field-inversion electroelution)、连接、用PFGE选择大小并消除未连接载体、洗脱、转化酿酒酵母、铺板于ura~-、trp~-培养基上、复印到尼尤膜上、筛选人源克隆。以体细胞杂交系WA-17(人源部分只有21染色体)在质粒pYAC4中     

基因库构建

930474从一个六体肽裘位文库中得到的一组伴刀豆蛋白A结合肽[英]/Scott,J.K.…,Proc.Natl..Acad.Sci.U.S.A.-1992,89(12).一5398一~5402E译自DBA,1992.11(15),92-08994] 凝集素伴刀豆聋自一A(ConA)能与寡糖非还原端上的口一D一甘露吡喃糖苷(MeaMan)及口一D一甘露糖基结合。从一个建于fd噬菌体载体(分随基六肽)的表位文库中分离到能模拟Mea]Via.与ConA结合的配基肽。在亲和纯化的噬菌体中鉴定出一个同感序列,Co.A能与携有该序列的噬曹体结合。含有该序列的噬菌体与相近的D一甘露糖结合凝集素只能锻弱结合,表明ConA的结合是有高…     

基因库构建

931242.」;·蕊母人造染色体文库的简化构健和鉴珍〔英刀VOI-ina,s二;·1B’io;扛。口.Int一2.。:,召7(儿)一45~53〔译自DBA,1992,11(22),92?正22风〕 利用2种人细胞系和载体质粒pYAC份RC构建了搜盖约。.9人基因组当量、平均擂人钓2。。kb的8个酵母人造染色体(YAC)文库侧与过去采用方法的区别是:1.用稀少的内切酶Clal在低解链点(LMP)琼脂糖块中消化基因组DN奏,tii.用琼脂枯处理后在解链的LMP琼脂糖中消化】州;场.讨宜‘在书敬钙薄晨上进行原生质球再生植板。此外,用一组PC尽引物快遮鉴别文库中的重复性和单拷贝人DN人序列。研究…     

基因库构建

924002有关蛋白结构及其序列的数据库〔英〕/Pasca-rella,S.…/Protein Eng-1992,5(2)一221~23了〔译自DBA,1092,21(10),92-05472〕 构建了将蛋白结构信息和序列信息相联系的数据库。从文库中找到了主链折叠相似的蛋白的结构叠加。将蛋白的初级结构序列与复杂的结构组合联系起来,发现各结构之间的残基同源性至少为50%,至少有50%结构序列残基可相互组合。因此有理由相信,除较不保守的环状区外,初级结构具有四级结构模板的构型。共收集到38个类别,209种四级结构蛋白的高级结构迭加;45种结构没有可叠加的配对,它们是单独发挥作用的。此数据…     

基因库构建

924350由可变基因文库产生抗体的细胞筛选法:存储库的收集[英〕/Hawkins,R.E.…/Eur.J.Im-munol一1992,22(3)一567~570〔译自DBA,1992,11(11),92一06028」 用(4一羚基一3一硝基苯酚)乙酸(NP)一家禽势球蛋白免疫小鼠,初次免疫后7天收集脾细胞。由用抗原包被磁性珠粒筛选的细胞DNA制备重链可变(VH)基因文库,再由未筛选细胞的DNA或mRNA制备基因文库。VH基因文库与V一入一1基因结合,该基因以Fv片段形式在大肠杆菌中表达,并通过结合(4一经基一3一碘一5一硝基苯酚)乙酸一家畜血清清蛋白而进行筛选。抗原结合克隆的频率,筛选细胞DNA或…     

蛋白质突变体基因库构建方法的研究进展

体外定向进化是蛋白质工程中一个非常有效的设计策略。最近几年,在过去常用的寡核苷酸介导的随机突变、易错PCR和DNA改组等方法的基础上又出现了一些新的定向进化方法。本文对这些方法及其特点加以总结,为解决特定问题选取何种方法提供一定依据。最近研究表明：定向进化和理性设计相结合、定向进化和以结构为基础的计算设计方法相结合正成为蛋白质工程中两个新的发展方向。     

快生型大豆根瘤菌基因库的构建

本文报道了用柯斯质粒(cosmid)pLAFRI 作为载体,通过 EcoRI 部分酶切快生型大豆根瘤菌的全部 DNA,获得“目的”DNA 片段,用大肠杆菌 ED8767作为受体菌株,我们构建了一株快生型大豆根瘤菌——B52菌株的基因库。插入的基因片段大小为20～30kb,所获得的抗性菌落数为3.9×10~4,其中外源基因插入频率为70%,重组子数超过“理论”值,达到了希望的建库要求。     

疏水性ELP基因设计与基因库构建

[目的]设计合成疏水性类弹性蛋白(Elastin-like polypeptide,ELP)基因,建立ELP基因库.[方法]选择疏水性最强的异亮氨酸(I1e,I)(疏水参数:4.5)取代ELP五肽重复序列单元(缬氨酸-脯氨酸-甘氨酸-客座氨基酸-甘氨酸,VPGXG)中客座残基X.全基因合成一段含编码(VPGIG)10序列,上游含Dra Ⅲ酶切位点、下游含BglⅠ酶切位点的ELP单元.将Dra Ⅲ和BglⅠ设计为一对同尾酶(Isocaudarner),利用这对同尾酶定向克隆(Recursive directional ligation,RDL)一系列不同拷贝数的ELP基因.为鉴定基因库有效性,随机选取库中ELP[Ⅰ]50基因进行蛋白表达、纯化并测定其相变温度(Inverse temperature transition,Tt).[结果]建立了ELP[Ⅰ]n(n=10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120)基因库.测定ELP[Ⅰ]50的Tt为24.3℃.[结论]首次单独选用I1e(I)作为ELP蛋白质标签中客座残基氨基酸,增加了ELP中疏水性氨基酸的含量,为进一步筛选出表达量高、Tt低、分子量小的ELP标签奠定基础.     

日本科技厅建立基因库的计划

日本科技厅为建立对推动生命工程研究所不可缺少的基因库,决定1985年度预算约为1亿日元。根据1985年起的3年计划,将花5-10亿日元建设费在筑波科学城理化学研究所筑波研究设施基地内新建一座基因库,进行动植物细胞和DNA收集及供应的业务。     

如何丰富作物品种基因库

在作物品种改良中,获得高产、优质、抗逆的新品种,总是以丰富的遗传变异材料为前提的,遗传变异是任何作物育种工作的先决条件。在不同的品种中,某一特征的遗传力、选择强度和遗传优势直接影响着遗传变异的幅度,因此筛选高变异率的材料是非常重要的,而丰富的基因库又为这种选择提供了可能。如何提高作物的遗传变异性,目前的研究工作已从个体水平向细胞水平、分子水平发展。     

日本科技厅建立基因库的计划

日本科技厅为建立对推动生命工程研究所不可缺少的基因库,决定1985年度预算约为1亿日元。根据1985年起的3年计划,将花5—10亿日元建设费在筑波科学城理化学研究所筑波研究设施基地内新建一座基因库,进行动植物细胞和DNA收     

BjαIT的表达、抗血清制备及scFv基因库的构建

根据成熟昆虫神经毒素BjαIT的氨基酸序列,人工合成毒素基因,并克隆至大肠杆菌表达载体pPET-30a（＋）。在IPTG的诱导下,神经毒素在大肠杆菌中融合表达,表达产物经镍亲和层析纯化,纯化蛋白免疫BALB／c小鼠,制备了特异性较高的抗血清,抗体滴度达1：512,000。提取免疫小鼠脾细胞总RNA,通过RT-PCR分别扩增重链可变区（VH）及轻链可变区（VL）基因片段,在连接肽linker的连接下成功构建了包含抗BjαIT的全长scFv基因库。本研究为新型蝎昆虫神经毒素BjαIT的检测奠定了基础。