提高大田作物硝酸还原酶活力测定稳定性的方法探讨

测定硝酸还原酶(以下简称NR)活性的方法有体外和体内法两种,我曾探讨过 NR体内分析法,取样于室内控制条件下培养的稻麦幼苗,用改进的NR体内法所测得的数据较为稳定,可作为鉴定作物品种耐肥性的指标。但是,如果田间取样则不稳定因而影响此法的实际应用。本文试图探求取样于田间植株的较为稳定的NR活性体内测定的方法。     

硝酸还原酶活力的体外测定

硝酸还原酶(NR E.C.1.6.6.1)是硝酸盐同化中的限速酶,在植物生长发育中具有重要作用,可作为作物育种和营养诊断的生化指标,受到植物生理学和农学工作者的重视。但此酶不稳定,酶活测定有一定难度,影响了研究工作特别是应用上的开展。最近,周树和郑相穆对体内测定方法进行了探讨。本文在以前方法的基础上,就粗酶的体外分析法作了改进,条件简化,时间缩短,准确性也有提高。一、植物材料 NR是诱导酶,其活力水平受体内外许多因素的影响,光就是重要因素之一。在诱导和光处理12小时后,光强3000 1x的小麦叶片     

ATP对体外硝酸还原酶活力的影响

硝酸还原酶(以下简称 NR)是高等植物氮素代谢的关键酶,对体内其他代谢也有着重要的影响。最近,我们已报道NR活力能促进ATP的形成。本文则研究了ATP对NR活力的影响。由于外源ATP不有直接进入细胞内,难以观察它对体内NR活力的影响,因此只对它对体外NR活力的影响及其机制进行了研究,并把它与ADP、AMP的影响加以比较。     

钼和6-BA对缺钼番茄叶片中硝酸还原酶活性恢复的影响

硝酸还原酶(NR)在植物的氮素营养上是一个关键酶,NO_3~-进入植物体内,首先须经过NR的催化作用才能被还原为NO_2~-,然后再经过其他种酶的作用被同化到蛋白质上。所以对NR的研究一直受到重视。 Nicholas和Nason证明NR中含有金属钼(Mo),以后又有不少工作者研究了Mo与NR的关系。肯定指出Mo构成NR的辅基,处于该酶的活性中心。但是NR又     

硝酸还原酶的研究动态

NR的研究已有30多年的历史。近年来,(1)在NR纯化的基础上对其结构和特性已积累了大量资料;(2)根据用新的生物学技术的研究结果,提出酶的诱导可能是酶的从头合成或者酶前体的活化;(3)从NR的合成与降解、活化与钝化等方面,对体内NR活力的调节作了进一步阐述;(4)利用植物NR突变体,开展了NR基因的结构和表达的研究,并取得—定进展。     

硫激酶在快速测定辅酶A中的应用

我们早在1960年试制辅酶A 时,使用了磺胺酰化法测定其生物活力。但总觉此法操作麻烦,每一个样品都要绘制一条浓度测定曲线,从线上定出一个Lipmann 单位所代表的实验重量,才能根据标准值折算成百分纯度。后来Le Van Hung 作了部分改进,但测定仍很费时。1967年Abiko 等认为此法专一性低,所得实验值不能正确代表它的实际含量。Miohal 和Bergmeyer 列举了其他四个测定方法。现在国内外专家大多采用磷酸转乙酰酶法,但仍要从细菌中制备酶,较费时。后来我们选用了硫激酶法来测定辅酶A。因此酶取材容易,制备方便,酶稳定且专一性较高,能直接观察到酶反应速度,据此算出辅酶A 的百分纯度。我们并对此酶的制备技术及测定步骤作了一些改进,可不必在无氧中操作。实践证明,此法简单易行,较为准确,也是测定辅酶A 的一个较好方法。     

网织红百分数法测定rHuEPO体内生物学活性的研究

本文通过对网织红百分数法测定rHuEPO体内生物学活性进行研究,找出网织红细胞百分数与rHuEPO浓度线性相关的范围。从而确定了用计数网织红细胞百分数的方法测定rHuEPO体内生物学活性。提出在rHuEPO体内生物学活性测定中选择合适的稀释液至关重要。对(3,3)法测定rHuEPO体内生物学活性进行了统计,批间CV、批内CV均接近10%,单次实验FL%平均数为3126%,并提出鼠间差异是造成FL%较大的主要原因;对(3,3)法与(2,2)法测定rHuEPO体内生物学活性进行比较,发现(2,2)法较(3,3)法更适合用于rHuEPO生产过程中rHuEPO体内生物学活性的测定。     

霞水母提取物抗凝血作用的初步研究

本文研究了霞水母提取物对小鼠抗凝血作用的影响。采用断尾法和毛细玻管法分别测定霞水母提取物对小鼠体内出血时间和凝血时间的影响;采用试管法测定霞水母提取物对小鼠体外凝血时间的影响,通过试剂盒测定小鼠活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)。结果显示,霞水母提取物能不同程度地延长小鼠体内凝血时间、出血时间和体外凝血时间,且能显著提高小鼠的APTT和PT。从而表明,霞水母提取物具有抗凝血作用。     

两种分离斑马鱼卵母细胞方法的比较

对培养斑马鱼卵母细胞体外成熟中的两种分离方法进行了比较。结果表明,在卵母细胞的分离过程中,机械分离法获得的完整卵细胞的比例(87.0%)显著多于EDTA-胰酶消化法(33.2%)(P<0.01)。但机械分离法较费时,其平均分离每个卵细胞所用的时间(0.69min)显著多于EDTA-胰酶消化法(0.17min)(P<0.01)。此外,经过18h 27℃培养,机械分离法获得的卵细胞的存活率(88.2%)显著高于EDTA-胰酶消化法所获卵细胞的存活率(60.1%),而采用机械分离法和消化分离法对所获卵细胞的成熟度-GVBD%分别为83.9%、77.5%,无显著差异(P>0.05)。基于数据所示,机械分离法可以获得存活率高、完整性好的卵细胞,但所需操作时间较长;EDTA-胰酶消化法操作便捷,但其分离出的卵细胞的活力较差;两种方法对卵细胞体外培养成熟率的影响无明显差异。     

番茄叶片中硝酸还原酶活性的“稳定因素”

硝酸还原酶(NR)是一种不稳定的酶,离体的NR在0℃下保藏几小时后,它的活性会显著丧失,有时甚至测不出它的活性。这一情况一直是进一步研究NR的生理生化的主要障碍。1979年,Sharrad首先发现小麦叶片中有二种因素能增进 NR活性,他认为这二种因素可能是蛋白类物质。我们(1980)证实番茄叶片中也有蛋白类物质能活化脱辅基NR酶蛋白。Purvis(1980)发现棉花种子及子叶中有一类热稳定的蛋白类物质,能稳定NR活性。现在对这类物质的认识刚刚开始,对它的性质和在植物之间的分布有待进一步研究。     

网织红百分数法测定rHuEPO体内生物学活性的研究

本文通过对网织红百分数法测定ｒＨｕＥＰＯ体内生物学活性进行研究,找出网织红细胞百分数与ｒＨｕＥＰＯ浓度线性相关的范围。从而确定了用计数网织红细胞百分数的方法测定ｒＨｕＥＰＯ体内生物学活性。提出在ｒＨｕＥＰＯ体内生物学活性测定中选择合适的稀释液至关重要。对（３,３）法测定ｒＨｕＥＰＯ体内生物学活性进行了统计,批间ＣＶ、批内ＣＶ均接近１０％,单次实验ＦＬ％平均数为３１．２６％,并提出鼠间差异是造成ＦＬ％较大的主要原因;对（３,３）法与（２,２）法测定ｒＨｕＥＰＯ体内生物学活性进行比较,发现（２,２）法较（３,３）法更适合用于ｒＨｕＥＰＯ生产过程中ｒＨｕＥＰＯ体内生物学活性的测定。     

大孔吸附树脂固定猪胰脂酶的初步研究

目的：为促进脂肪酶在工业上的应用,对以大孔吸附树脂为载体的猪胰脂酶固定进行了研究。方法：以吸附法固定,用单因素法考察了吸附条件对固定的影响。按Eadie—HOfstee法测定了固定化酶及游离酶的表观米氏常数,并具体研究了固定化酶的操作稳定性、热稳定性等性质。结果：固定化酶的比酯交换能力比游离酶上升6倍;最优的吸附条件为：pH7．0,酶加量300mg/g,水分含量20％;吸附时间4h;固定化酶在含水量10％时可稳定操作5批次;同时固定化酶有比游离酶有更好的热稳定性。结论：以大孔吸附树脂为载体对猪胰脂酶进行固定是可行的;与游离酶相比,所得固定化酶有着更高的比酯交换能力和更好的稳定性,更为适用于工业化生产。     

厦门若干果树的硝酸还原酶活力初探

硝酸还原酶(NR)是植物体内氮代谢的关键酶,对植物生长发育有重要的作用。NR活力与作物耐肥性的相关性和作为作物营养诊断指标可能性的研究已引起国内外学者的广泛兴趣^[1]。     

紫外分光光度计法与酶标仪微量法测定酚氧化酶蛋白含量及活力的比较

分别采用紫外分光光度计比色法与酶标仪微量法测定菜青虫Pieris rapae(L.)体内酚氧化酶蛋白含量和活力,以水杨醛缩对硝基苯胺为抑制剂,对2种方法的结果进行比较。结果表明,微量法和比色法在检测酚氧化酶(PO)蛋白含量、酶活力和抑制剂对PO抑制作用时结果无显著性差异。因此,微量法可以替代比色法,使用试剂量大大降低,重复性好,操作简单、快捷。     

椒葛软胶囊溶出度的研究

目的:建立椒葛软胶囊体外溶出度及测定方法。方法:以0.1M盐酸胃蛋白酶溶液900ml为介质,转速为200r/min;采用HPLC法测定椒葛软胶囊的体外溶出度。结果:在60分钟椒葛软胶囊的溶出度均大于标示量(70%)。结论:该法测定椒葛软胶囊的溶出度,方法稳定、可行。     

伤寒Vi多糖菌苗多糖含量及分子大小测定试验

伤寒Ｖｉ多糖菌苗是我国新近研制成功的一种多糖菌苗。为了严格控制该制品的质量,经反复试验,建立了多糖含量和分子大小的测定方法。本文报导了（１）用火箭电泳法测定伤寒Ｖｉ多糖菌苗多糖含量。经对不同实验条件进行比较,选择出较为理想的条件。用该法测定８批样品。结果均符合规程要求。对其中５批样品进行６次重复试验表明,该法的重复性好,操作简单,是测定多糖含量较为理想的方法。（２）用琼脂糖柱层析法对２８批伤寒Ｖｉ多糖菌苗的分子大小进行测定。对用该法所得柱层析收集液分别用Ｈｅｓｔｒｉｎ法和２０６ｎｍ扫描法测定其多糖回收率,对测定结果进行比较。结果表明,两种方法的测定结果无显著性差异（Ｐ＞０．０１）,而且重复性均好。可根据实验室条件选择测定方法。     

硝酸还原酶的研究——Ⅲ.硝酸还原酶钝化蛋白的专一性及其对硝酸还原酶的水解作用

以同样的提取方法,分别从小麦叶片、曼陀罗愈伤组织中提取的硝酸还原酶(NR)钝化蛋白均可明显钝化小麦、水稻、玉米等叶片的NR,而从水稻、豌豆叶片中提取的NR钝化蛋白也均可明显钝化小麦叶片NR的事实显示出植物体内NR钝化蛋白存在的普遍性及不同植物种间这种钝化蛋白作用的共同性。水稻叶片及曼陀罗愈伤组织NR钝化蛋白只能钝化NR,而不能钝化与NR同为植物氮素同化关键酶的亚硝酸还原酶(NiR),小麦叶片NR钝化蛋白只能钝化NR而不能钝化与NR同为诱导酶的α-淀粉酶又表明NR钝化蛋白对NR的钝化作用具有一定的专一性。在小麦叶片NR钝化蛋白(部分Ⅰ)与NR一起保温时,同时加入作为水解酶抑制剂的大豆胰蛋白酶抑制物或丝氨酸酶抑制物PMSF,均可部分解除钝化蛋白的钝化效力,可作为此种钝化蛋白是个水解酶的进一步证明。     

用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测白喉毒素的抗体

<正> 本文叙述了定量测定白喉毒素抗体的酶联免疫吸附测定法(ELISA)。用ELISA技术与单间免疫扩散测定法比较,其结果能很好地相关,而且ELISA技术更为敏感一万倍。比在家兔体内皮肤试验法也至少敏感10倍。 绪言 某些方法用于定量测定白喉毒素的抗体,它包括体内和体外测定试验。体内测定如在家兔去毛的背上作皮内中和滴定试验,有利于测定实际中和毒素的抗体。虽然,在体内进行中和抗体滴度的测定是不可缺少的,但这些方法需要精心操作,代价高而又费时,另外,如果不进行大量的动物实验,     

骨骼肌基因靶向转移研究进展

近年来,骨骼肌靶向基因转移主要有两条途径;一是间接体外基因修饰成肌细胞后将植入骨骼肌组织;二是直接体内骨骼肌内注射,原位转染成熟的非分裂肌细胞。间接体外实验周期长,临床适用性较差,但易获得较高水平和较长期的外源性基因的体内表达;直接体内法直接简便,接近临床应用的实际情况,本文对两条途径进行的基因免疫,基因治疗及外源性基因在骨骼肌中表达的调控有关进展进行了一综述。     

真菌漆酶的酶活测定方法评价

目前真菌漆酶酶活的测定方法多样,没有统一的标准,致使不同研究之间的漆酶酶活无法进行比较分析,也造成漆酶产品在酶活质量意义上的混乱。因此,对测定真菌漆酶酶活的各种不同的分光光度法进行了综述和比较分析,认为采用ABTS法作为测定漆酶酶活的方法较具合理性和科学性,建议作为漆酶酶活测定的统一方法。