豚鼠耳蜗中ATP对一氧化氮/环磷酸鸟苷途径的激活作用

实验研究了豚鼠耳蜗中ATP和一氧化氮／环磷酸鸟苷途径(nitric oxide／cyclic guanosine monophosphate,NO／cGMP pathway)的关系。将40只耳廓反射灵敏的健康白色豚鼠随机分为5组,分别对其离体的耳蜗即刻灌流人工外淋巴基础液(artificial perilymph basic solution,APBS)以及溶于人工外淋巴基础液的ATP、一氧化氮合酶抑制剂左旋-N^G-硝基精氨酸(L-N^G-nitroarginine,L-NNA) ATP、可溶性鸟苷酸环化酶抑制剂1H-[1,2,4]草酸重氮[4,3-a]喹恶啉(1H-[1,2,4]oxadiazolo[4,3-a]quinoxalin-1-one,ODQ) ATP和A-23187(Ca^2 载体),收集耳蜗组织标本,利用放射免疫方法测定耳蜗组织中的cGMP的平均含量,比较各组之间耳蜗组织cGMF平均含量的差异。试验结果显示,向刚离体的耳蜗中灌流ATP和A-23187可以引起耳蜗组织中的cGMP含量升高,而灌流L-NNA和ODQ则可以抑制ATP所引起的耳蜗组织中cGMP含量的升高,提示在耳蜗组织中ATP可以通过升高细胞内Ca^2 浓度的作用而激活NO／cGMF途径。从本实验结果可以提出假说：耳蜗中ATP从神经末梢释放,通过提高细胞内Ca^2 的浓度,有激活NO／cGMP途径的作用,而NO／cGMP又能对ATP进行负反馈调节,两者共同调节耳蜗的生理功能,在耳蜗中存在ATP／Ca^2 -NO／cGMP通路。     

催产素对内耳外毛细胞功能的调控作用

采用耳蜗外淋巴液灌流催产素(OXT),记录由鼓阶电极引导的听神经复合动作电位(CAP)及耳蜗微音电位(CM)的输入—输出(I/O)函数。发现OXT可在90dB(SPL)以下各声强提高短纯音诱发的CM振幅以及短声诱发的CAP振幅,而当声强高于90dB时CM变化不明显。但在用含氯化筒箭毒(dTC)的外淋巴液灌流以阻断橄榄耳蜗束胆碱能传出控制后,OXT不再引起CM改变,而对CAP的作用在低声强段(<60dB)依然存在。这些结果提示OXT可能调节传出神经对内耳的控制,并可能对外毛细胞(OHC)的运动能力有直接影响。     

噪声刺激后豚鼠耳蜗抗氧化能力的变化和α-硫辛酸对声损伤的保护作用

实验探讨了声刺激后豚鼠血清总抗氧化能力(total antioxidant capacity,TAC)和耳蜗组织一氧化氮(nitricoxide,NO)含量的变化及α-硫辛酸的抗氧化和对声损伤的保护作用。将豚鼠(350-400 g)随机分为无噪声对照组(n=20)、噪声+生理盐水组(n=20)和噪声+α-硫辛酸组(n=20)。噪声刺激(4.kHz倍频程,115 dB SPL 5 h)结束后立即测试脑于诱发电位(auditory brainstem responses,ABRs),取血清测TAC,制备耳蜗组织匀浆测NO的水平。所得结果如下:(1)无噪声对照组,动物听阈无明显变化;噪声刺激后生理盐水组,听阈上升的幅度明显高于α-硫辛酸组(P<0.05)。(2)噪声+生理盐水组,TAlC明显低于无噪声对照组(P<0.05);噪声+α-硫辛酸组同噪声+生理盐水组相比,TAC明显升高(P<0.05),同无噪声对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。(3)噪声+生理盐水组,NO含量高于无噪声对照组(P<0.05);噪声+α-硫辛酸组同噪声+生理盐水组相比,NO含量明显减少(P<0.05),同无噪声对照组相比,差异无显著性(P>0.05)。上述结果提示,噪声刺激后血清TAC降低,耳蜗组织内NO含量增加;α-硫辛酸可通过抗氧化机制对噪声性听力损伤(noise induced hearing loss,NIHL)发挥保护作用。     

NO—样松驰因子在大鼠止血带休克中的作用

为探讨NO-样松驰因子(NO-LRF)在休克中的效应及其病理生理意义,本工作在大鼠止血带休克(ToS)模型上发现离体灌流的主动脉环对去甲肾上腺素的反应性降低,组织cGMP含量增加。用NO前体L-精氨酸(L-Arg)或NO合成阻断剂L-NNA,可溶性乌苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝灌流,分别增强或减轻ToS动物主动脉的上述变化,而且这些药物的作用不受血管内皮是否存在的影响。实验结果提示非内皮细胞源的NO-LRF是引起ToS动物血管低反应性的因素之一。体内实验表明 L-Arg治疗缓解,而L-NNA恶化ToS病程,提示NO-LRF可能参与机体的适应保护机制。     

一氧化氮对心肌缺血/再灌注损伤细胞凋亡和心功能的影响

目的:采取促进或抑制NO的方法,了解在重复可逆性心肌缺血/再灌注所致的心肌顿抑时,血液中一氧化氮(NO)的动态变化与细胞顿抑及心功能的影响.方法:新西兰兔15只,随机分为3组(n=5):对照组、在静脉内注射NO合成底物L-精氨酸为L-Arg组、静脉注射一氧化氮合酶抑制剂L-硝基-精氨酸为L-NNA组.用戊巴比妥钠静脉注射麻醉后,结扎前降支制成心肌缺血/再灌注模型,用电子自旋共振法测定血液中NO含量,同时记录左心室最大上升速率dp/dtmax.将兔心肌缺血10 min,共3次,第1、2次缺血后再灌注10 min,第3次缺血后再灌注120 min.结果:第1次缺血/再灌注5 min时NO升高的顺序依次为L-Arg组最大、对照组次之,而L-NNA组较缺血前降低.而dp/dtmax明显下降的是L-Arg组最大、对照组次之、L-NNA组最小.细胞凋亡指数:L-Arg组最大,对照组次之、L-NNA组最小.结论:再灌注早期NO的大量生成及细胞凋亡参与加重心肌顿抑的过程.     

白细胞介素—8扩血管效应与内皮舒张因子的关系

为探讨内皮舒张因子在白细胞介素-8(IL-8)扩血管效应中的作用,本实验在大鼠离体主动脉条上,观察IL-8对血管反应性及血管组织cGMP含量的影响。实验发现,IL-8显著地扩张离体血管,其作用在去内皮后明显减弱。IL-8还能显著地提高离体血管组织cGMP含量,一氧化氮合成抑制剂L-NNA可阻断这一作用,一氧化氮前体L-精氨酸可逆转L-NNA的效应。结果表明IL-8可以通过促进血管内皮细胞释放一氧化氮而扩张血管。     

丙泊酚对过氧化氢诱导人红细胞氧化应激状态下一氧化氮通路的影响

目的:一氧化氮(nitric oxide,NO)作为体内的一种细胞信使分子,在心血管活动中起重要作用.NO水平及其在体内的合成代谢通路与临床麻醉、危重症、术后恢复等密切相关、本实验通过使用H2O2在体外诱导人红细胞氧化应激反应,观察红细胞NO,eNOS,NO3-和NO2-水平的变化,及丙泊酚对这一变化的影响.方法:健康成年人红细胞制成2％红细胞悬液,分为10组:对照组(C组)、H2O2组(H组)、丙泊酚12.5 μmol/L组,丙泊酚25 μmol/L组,丙泊酚50 μmol/L组,丙泊酚100 μmol/L组,丙泊酚12.5μmol/L+ H2O2组(P12.5+H组)、丙泊酚25 μmol/L+ H2O2组(P25+H组)、丙泊酚50 μmol/L+H2O2组(P50+H组),丙泊酚100μmol/L+ H2O2组(P100+H组).各组H2O2的反应浓度均为200 μmol/L,孵育30 min,测定红细胞NO,eNOS,NO3-和NO2-水平的变化.结果:P50组(4.97± 0.58)NO水平高于其余各组(P＜0.05);H组(4.96± 0.52)NO水平高于其它组(P＜0.05);与C组(1.34±0.29)相比,P50组(2.23±0.33)和H组(2.33± 0.39)eNOS水平升高(P＜0.05);NO3-水平H组(43.78± 2.13)比C组(52.06±2.14)低(P=0.017);NO2-水平H组(13.32± 2.04)比C组(34.14± 1.48)低(P=0.025).结论:丙泊酚和H2O2能够使红细胞NO和eNOS水平的升高;H2O2引起红细胞NO升高和NO3-,NO2-的降低.我们推断,H2O2使体内产生的过量NO,会对机体产生害影响,而丙泊酚通过清除自由基、抑制H2O2诱导的红细胞硝酸盐-亚硝酸盐-一氧化氮通路向氧化相移动来维持NO水平,实现维持NO生物利用率及保护人红细胞抵抗氧化损伤.     

硝基精氨酸抑制巨噬细胞内一氧化氮合成的研究

运用体外分离培养方法,研究硝基精氨酸(N^ω-nitro-L-arginine,L-NNA)抑制巨噬细胞内诱生性一氧化氮合成.发现L-NNA能抑制一氧化氮的合成,而且在一定的范围内,其抑制作用随L-NNA作用剂量的增大而增强;在培养体系中加入L-精氨酸能够逆转这种抑制作用.说明L-NNA可能通过竞争性地与诱生型一氧化氮合成酶(iNOS)活性位点结合,抑制巨噬细胞内的一氧化氮合成.     

一氧化氮合酶应属于氧化还原酶

一氧化氮合酶催化的反应：2L-精氨酸＋3NADPH＋3H^＋＋4O2→2L-瓜氨酸＋3NADP^＋＋2NO＋4H2O其实质是一个氧化还原反应,故按照酶的国际系统分类来分,该酶应属于氧化还原酶类。     

外源NO对UV-B胁迫下红豆杉抗氧化系统的影响

为探讨一氧化氮(nitric oxide,NO)对紫外线-B( UV-B)辐射胁迫下植物抗氧化系统的影响,以盆栽5年生南方红豆杉(Taxus chinensis var.mairei)幼苗为材料,硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)为外源NO供体,设置CK(对照)、SNP(+0.1 mmol·L-1SNP)、UV-B(+4.22 kJ·m-2·d-1 UV-B)及UV-B+ SNP(+0.1 mmol·L-1 SNP+4.22 kJ·m-2·d-1UV-B)4个处理,研究外源NO对UV-B胁迫下南方红豆杉幼苗针叶过氧化氢(H2O2)含量、脂质过氧化程度及抗氧化物质含量的影响.结果表明:UV-B胁迫显著提高了南方红豆杉针叶H2O2及MDA含量(P＜0.05),施加外源NO降低UV-B胁迫下针叶H2O2及MDA含量,提高紫杉醇、类黄酮及类胡萝卜素等抗氧化物质含量(P＜0.05);各处理对抗氧化酶活性影响不同,SNP处理显著提高针叶中CAT和POD活性(P＜0.05),UV-B和SNP+UV-B处理均提高针叶中POD活性,降低CAT活性和APX活性(P＜0.05).本研究证实,外源NO可提高UV-B胁迫下植物抗氧化酶活性和抗氧化物质含量,降低其H2O2含量及脂质过氧化程度,从而在一定程度上缓解UV-B胁迫对植物的伤害.     

Involvement of nitric oxide in cardioprotective effect of endothelin receptor antagonist during ischemia-reperfusion

The interaction between the cardioprotective effect of endothelin (ET) receptor blockade and nitric oxide (NO) during ischemia-reperfusion injury was investigated. Anesthetized pigs were subjected to 45 (protocol 1) or 30 min (protocol 2) coronary artery ligation and 4 h reperfusion. In protocol 1, five groups were given vehicle, the ET(A) receptor antagonist LU-135252 (LU), the NO synthase (NOS) inhibitor N(G)-nitro-L-arginine (L-NNA), L-NNA in combination with LU, or L-NNA in combination with the NO precursor L-arginine (L-Arg) and LU intravenously before ischemia. In protocol 2, two groups were given vehicle or L-NNA. In protocol 1, the infarct size (IS) was 79 +/- 5% of the area at risk in the vehicle group and 93 +/- 2% in the L-NNA group. LU reduced the IS to 43 +/- 7% (P < 0.001). The cardioprotective effect of LU was abolished in the presence of L-NNA (IS 76 +/- 6%), whereas addition of L-Arg restored its cardioprotective effect (IS 56 +/- 2%; P < 0.05 vs. vehicle and L-NNA + LU groups). In protocol 2, the IS was 49 +/- 6% in the vehicle group and 32 +/- 4% in the L-NNA group (P = not significant). Myocardial ET-like immunoreactivity (ET-LI) increased in the vehicle group of protocol 1. ET-LI in the ischemic-reperfused myocardium was lower in the groups given LU (P < 0.01) and L-NNA + L-Arg + LU (P < 0.05) but not in the group given L-NNA + LU compared with the vehicle group. These results suggest that the cardioprotective effect of the ET(A) receptor antagonist is mediated via a mechanism related to NO.     

丹参注射液对庆大霉素耳中毒豚鼠耳蜗血管纹NOS活性的影响

目的：研究丹参注射液（SM）对庆大霉素（GM）耳中毒豚鼠耳蜗血管纹一氧化氮合酶（NOS）活性的影响及其与听阈的关系,探讨SM对GM耳毒性损伤的保护作用。方法：应用NADPH－黄递酶（NADPH-d）组织化学染色以及图象分析技术,并结合听性脑干反应（ABR）测试。结果：SM－GM组耳蜗血管纹NOS活性和ABR阈值均明显低于GM组（P＜0.01）;且各组NOS活性变化与ABR阈移高庆相关（rcontrol=-0.9464;rGM=-0.9117;rSM GM=-0.8958,P＜0.01）。结论：SM可通过降低耳蜗血管纹NOS活性以减轻GM的耳毒性损伤,从而改善听功能。     

降低外淋巴钙浓度对耳蜗电位的影响

本实验在人工灌流条件下降低鼓阶外淋巴钙的浓度,观察其对听神经动作电位（ＣＡＰ）、耳蜗微音器电位（ＣＭ）以及蜗内直流电位（ＥＰ）的影响,以分析钙离子的作用机制。无钙液鼓阶灌流使ＣＡＰ、ＣＭ幅度可逆地下降,但不明显地改变ＣＡＰＩ／Ｏ曲线的非线性特征。无钙外淋巴灌流并不改变ＥＰ以及用缺氧法得到的负相ＥＰ（Ｎ－ＥＰ）,但使ＥＰ对强声给－撤时的快速变化趋于消失。本文讨论了这些耳蜗生物电改变所提示的钙离子作用的可能机制。     

噪声短时暴露所致的耳蜗电位改变

本实验观察115dB(SPL)白噪声暴露20min对豚鼠耳蜗直流电位(EP),复合听神经动作电位(CAP),微音器电位(CM)的影响。发现此种噪声暴露确可提高源于血管纹的正EP(P-EP),说明有血管纹功能的代偿性增强;而负EP(N-EP)变化不大。AP及CM输入-输出函数的变化说明噪声首先影响外毛细胞的主动运动功能。EP与耳蜗电图的对照分析表明,血管纹功能的改变确能影响噪声性听损伤的发展。     

甲状腺激素对豚鼠卡那霉素中毒性耳聋的预防作用

卡那霉素、庆大霉素等抗生素常引起耳聋,目前尚无较好的防治方法。卡那霉素对内耳的毒性作用,主要先影响有关的酶功能,继而破坏毛细胞而致聋。甲状腺激素具有促进蛋白质合成、增强细胞生物氧化的功能。因此可能具有减轻卡那霉素耳毒性的作用。本实验以耳廓反射、内耳生物电及耳蜗铺片为指标,观察甲状腺激素对卡那霉素耳中毒的预防。实验豚鼠分两组,各13只,对照组每天注射卡那霉素300mg/kg,共10天;甲状腺素组先隔天服甲状腺片20mg共四次,以后给予与对照组相同剂量卡那霉素,同时仍隔天服甲状腺片20mg直至停药后16天,前后总共服17次。结果:(1)耳廓反射阈变化,对8、4、2KHz三个频率听力均下降的耳,对照组为11只耳,甲状腺素组为3只耳,两者差异显著。听力下降的频率范围及程度,对照组比甲状腺素组更大。对照组听力下降开始出现的时间明显早于甲状腺素组;(2)内耳生物电,0～80dβ不同程度短声引起的耳蜗微音器电位与听神经动作电位幅值甲状腺素组动物均高于对照组;(8)耳蜗铺片,对照组大部分动物耳蜗各回的毛细胞严重变性缺损,甲状腺素组耳蜗病变仅局限在底回。以上结果表明甲状腺激素能减轻卡那霉素的耳毒性,为耳毒性抗生素致聋的防治提供了一条新的研究途径。     

Effect of motilin on the contractility of gastric smooth muscle via NO pathway in guinea pigs

This study investigates the gastroprokinetic effects of motilin and erythromycin A (EM-A) and its potential mechanism in guinea pigs Cavia porcellus in vitro. Guinea pig stomach strips were mounted under organ baths containing Krebs solution. Motilin,EM-A,Nω-Nitro-L-arginine (L-NNA),L-arginine (L-AA) were added to the bathing solution in a non-cumulative way. Then the effects of motilin and EM-A was studied during electrical field stimulation (EFS) in the absence and presence of L-NNA and L-AA in the gastri...     

NO介质在大鼠红藻氨酸诱导癫痫发作中的作用

目的：进一步探讨脑内一氧化氮(NO)介质(NO或NO衍生物)在复杂部分性及全身强直阵挛性癫痫发作中的作用。方法：采用红藻氨酸(KA)诱导大鼠癫痫发作,以NO合酶抑制剂L-硝基精氨酸(L-NNA)或NO前体L-精氨酸(L-Arg)予以预处理,观察其癫痫发作行为及海马结构内NO含量(NO2^-/NO3^-)的变化。结果：给予大鼠惊厥剂量KA(10mg/kg),15min时出现湿狗样抖动(WDS),1～3h出现全身痉挛;经L-NNA(50mg/kg)或L-Arg(40mg/kg)预处理的大鼠,注射相同剂量的KA后,其癫痫行为发生明显变化,L-NNA预处理的大鼠癫痫发作行为明显加重,表现为全身痉挛的潜伏期缩短、时间延长、死亡率提高;L-Arg预处理的大鼠癫痫发作行为减弱,WDS和全身痉挛的潜伏期均延长,发作程度减轻、时间缩短,观察时间内无一例死亡。KA给药后30min海马结构内的NO2^-/NO3^-含量迅速增多,7d时仍持续增高;与NS预处理组相比,经L-Arg预处理的动物,KA给药后3h及3d,其NO2^-/NO3^-浓度升高明显。结论：兴奋诱导性癫痫发作过程中内源性NO介质的变化可能具有重要的抗发作作用。