X-射线对大白鼠胸腺及脾脏中脱氧核糖核酸氢键的破坏作用

(1)将253只大白鼠分成16批,4批为对照組,其余12批以1000伦琴X-射綫整体照射,分別在照射后1/4,1,2,12及24小时将动物砍头杀死。我們将Gulland,Jordan和Threlfall的方法加以改良,提取了大白鼠胸腺和脾脏中的DNA。所提取得到的DNA經过实驗鉴定,証明是接近于天然状态的。并测定了DNA的紫外吸收光譜,特性粘数和电位滴定曲綫,以观察X-射綫整体照射对大白鼠胸腺及脾脏中DNA的二級結构的破坏作用。(2)測定了对照組和照射組的大白鼠胸腺和脾脏中DNA的克原子磷消光系数[ε(P)]及DNA溶液加碱后在259mμ处紫外吸收增高的百分率(△E%)。照射后ε(P)无明显的变化,而△E%;則有明显的变化。对照組动物胸腺DNA △E%的平均值为31.6±0.8,脾脏DNA △E%的平均值为32.2±0.5。照射后1/4小时至2小时內,胸腺DNA的△E%为27.7—29.4,脾脏DNA为24.9—28.9。照射后12小时和24小时导致△E%值进一步的降低。△E%值的降低表明了DNA分子中氫鍵受到了破坏。(3)对照組大白鼠胸腺DNA的特性粘数[η]为50—52,脾脏DNA的特性粘数为48—52。經1000伦琴X-射綫照射后,1/4,1和2小时胸腺DNA的[η]平均值分別为40.5,36.5和38.0;脾脏DNA則为35.5,39.0和38.5。照射后12和24小时脾脏DNA的[η]进一步下降(胸腺未做)。特性粘数的降低表明了DNA分子的变性或降解。(4)用电位滴定法測定了对照組和照射組的大白鼠胸腺及脾脏中DNA的电位滴定曲线。照射后1/4,1和2小时的正向滴定曲綫向逆向滴定曲綫靠攏,而且基本上是一致的。照射后12小时的脾脏DNA的正向滴定曲綫进一步向逆向滴定曲綫靠攏(胸腺未做)。从电位滴定曲綫証明了X-射綫对大白鼠体內胸腺和脾脏中的DNA的氫鍵有破坏作用。(5)大白鼠經1000伦琴X-射綫照射后,在1/4,1及2小时,胸腺和脾脏中DNA的△E%值,特性粘数和电位滴定曲綫均有明显的变化,証明了大白鼠整体致死剂量照射时,射綫对胸腺和脾脏中DNA的二級結构有破坏作用。     

芽殖酵母PHO85基因对细胞周期调控的影响

本文通过同源重组方法,构建了一系列单倍体缺失株:pho85△单缺失株YPH600、pho85△cln1△双缺失株YPH610、cln1△cln2△双缺失株YPH640和半乳糖诱导存活的pho85△chn1△cln2△(GAL1-10PHO85)三缺失株YPH630。比较不同缺失株的生长速度可以看出,PHO85单基因缺失比CLN1、CLN2双基因缺失对细胞生长速度的影响大。在去诱导的不同时间,取细胞进行光学显微镜形态学分析及DNA含量的流式细胞计量分析(FACS)。结果表明YPH630三缺失株的单倍体酵母细胞休止在G1期。     

TALENs介导的CCR5△32/△32突变赋予CD4+ U87细胞抵抗HIV-1感染的能力

CCR5Δ32/Δ32(C C chemokine receptor type 5,CCR5)基因型的骨髓干细胞移植,可以治愈感染人免疫缺陷病毒-1（HIV-1）的患者。本研究运用TALENs结合同源重组技术产生纯合子的CCR5△32/△32突变,并赋予CD4+ U87 细胞抵抗HIV-1感染的能力。首先,采用重叠延伸PCR合成 CCR5△32 donor DNA。构建CCR5-TALENs 和CCR5△1-TALENs质粒,将CCR5-TALENs 及CCR5△1-TALENs质粒分别结合CCR5△32 donor DNA,共转染野生型CD4+ U87 细胞。其次,用T7E1酶切分析转染后的TALENs和CCR5△1-TALENs打靶效率。通过单克隆培养筛选CCR5△32/△32突变的单克隆细胞。最后,将CCR5△32/△32 CD4+ U87 细胞和野生型CD4+ U87细胞进行Bal HIV-1病毒攻击实验,采用ELISA方法检测上清中P24抗原含量。测序结果表明,通过重叠延伸PCR成功获得1 602 bp CCR5△32 donor DNA;CCR5-TALENs 质粒第1轮、第2轮和第3轮转染,打靶效率分别为14.80%, 38.20%和50.40%;从29个单个细胞培养的克隆中成功筛选出1个CCR5△32/△1基因型CD4+ U87细胞,CCR5与CCR5△32 donor DNA之间同源重组效率为1.7%; CCR5△1-TALEN质粒第2轮转染,打靶效率为23.5%,从34个单细胞培养的克隆中筛选出3个CCR5△32/△32 基因型CD4+ U87细胞,CCR5与CCR5△32 donor DNA之间同源重组效率达到8.8%。Bal HIV-1攻击实验表明,野生型CD4+ U87细胞培养上清第2、4、6、8、10、12 d,平均P24抗原含量分别为58.47±2.35、162.23±4.78、458.78±27.34、613.35±26.78、580.35±24.73、483.34±30.85 pg/mL。而CCR5△32/△32基因型CD4+ U87细胞的培养上清平均P24抗原含量分别为11.30±1.76、5.13±0.88、3.43±0.44、3.84±0.69、3.21±0.44、4.24±0.46 pg/mL。本研究表明,TALENs 结合同源重组技术无缝隙地介导了CCR5△32/△32突变,并赋予了CD4+ U87细胞抵抗HIV-1感染的能力。     

卵形鲳鲹耐低温候选基因△6FAD全长cDNA序列的克隆与表达分析

采用c DNA末端快速扩增(Rapid amplification of c DNA ends,RACE)技术克隆了卵形鲳鲹△6脂肪酸去饱和酶(△6FAD)的c DNA全长序列,并对其基因和蛋白序列结构特征进行了生物信息学分析,同时采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)技术分析了该基因在不同温度条件下的表达差异及低温下的时序表达模式。结果显示,卵形鲳鲹△6FAD基因c DNA序列全长1 908 bp,其中开放阅读框为1 329 bp,3'非编码区431 bp,5'非编码区135 bp,共编码442个氨基酸;其编码蛋白属于疏水性蛋白,无信号肽特征,含有大量蛋白质二级结构和该家族典型的组氨酸富集区及细胞色素b5结构域。系统进化分析表明,卵形鲳鲹△6FAD基因与尖吻鲈、军曹鱼的△6FAD基因在进化关系上最为接近,其次是大菱鲆、蓝鳍金枪鱼和点带石斑鱼,但与斑马鱼、小鼠和人△6FAD基因进化关系较远。实时荧光定量PCR结果表明,该基因的表达与环境温度和胁迫时间存在明显相关性,其表达水平在降温过程中随温度降低而先缓慢下降后又迅速升高,在不同的低温环境下表现出不同的时序表达模式:13℃时,随时间延长该基因的表达量呈现先降低后又升高至原来水平的变化趋势,16℃和19℃时则表现出一种随时间延长逐渐降低的反馈式调节方式。     

人IL-6和TNF突变体重组融合蛋白表达质粒的构建及在大肠杆菌中的表达

本文利用PCR技术,对人肿瘤坏死因子α(hTNFα)基因进行了改造,并将其与人白细胞介素-6(hIL-6)成熟肽编码区cDNA进行融合,构建了5′IL-6-TNF△融合蛋白的表达质粒pBVIL6-TNFA△。DNA序列分析证明,PCR扩增片段核苷酸序列与引物设计序列及相应的cDNA序列完全一致;重组子用限制性内切酶酶切鉴定,含有正确的IL6-TNF△融合cDNA片段;表达产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,分子量约为37kD,与预计的相符合;生物学活性分析初步表明,该融合蛋白具有抗肿瘤活性。     

10月开始HCV检测用DNA探针诊断药的临床试验

第一化学药品公司从10月开始与美国 Chiron 公司共同开发的丙型肝炎病毒(HCV)检测用 DNA 探针诊断药的临床试验。HCV 检测 DNA 探针诊断药进入临床试验还是首次。进入临床的 DNA 探针诊断药采用 Chiron 公司和第一化学药品公司开发的分歧 DNA 技术。这种技术     

NutraSweet公司的经营业务在扩大

NutrawSeet公司(斯科基,伊利诺州)正在努力开发糖精以外的产品,它将支持DNA植物技术公司(辛纳明森,新泽西州)的研究,目的在于开发经济的、天然的蔗糖替换物。这两家公司的协议要求DNA植物公司研究各种能生产更标准可靠热稳定性好的增甜剂植物,这种增甜剂要比糖甜。由于使用这种增甜剂只要较少的量就能获得同样的甜度,因此吸收的卡路里量也比使用糖要少。DNA植物技术公司(DNAP)将参与使之商品化的研究。这项研究计划要连续进行几年。DNAP的董事长Richard Laster说,这项研究大概要花3～     

日本宝酒造委托以色列Orgenics公司研制用于检测混入医药品中的核酸的 DNA探针

日本宝酒造(宝酿酒公司)委托以色列的 Orgenics 公司研制检测混入医药品中的 DNA的 DNA 探针。这种探针将用于检验药盒,以检测由基因重组所制造的医药品中是否混入了DNA。美国有规定,对由基因重组所制造的医药品须标明其中不含有多余的成分,他们利用DNA 探针检测混入的 DNA。但是,日本现在还没有这种规定,也还没有用干检测的制品。今后日本也将扩大研制基因重组的医药品,也将需要有检测 DNA 的检查。     

THC受体基因的克隆为开发新型神经药物打开方便之门

自从25年前弄清△~9-四氢大麻酚(△~9-THC)的结构以来,药物公司花了不少精力来研究其在人体中的作用方式.这方面的努力将达到兴盛期,因为目前已发现并克隆到编码△~9-THC受体的基因.这一发现为中枢神经的研究以及调节人体疼痛、胃口、睡眠、学习、情绪以及心智缺陷(如幻觉、记忆丧失及时空错念等)等的物质的研究开拓了一条金     

金黄色葡萄球菌基因表达的DNA扣除法

[目的]金黄色葡萄球菌作为一种分布广泛的致病微生物和研究革兰氏阳性菌遗传背景的模式菌株,利用real-time RT PCR对相关毒素及调控基因进行表达定量分析,在生物、医学、食品检测等领域具有较大研究价值.[方法]对制备好的反转录(RT,含有cDNA和DNA)和非反转录(RTˉ,仅含DNA)样品进行Real-time PCR检测,根据经典(1 E)ˉ△△Ct相对定量算法并结合PCR效率公式建立一种基因表达相对定量分析的DNA扣除法,将得到的Ct值转换为各样品含量,从RT样品中扣除RTˉ样品的量,无需DNaseⅠ酶解处理就可以去除DNA的影响,RTˉ样品的检测结果还可同时作为稳定的DNA内参.[结果]采用以上方法分析金黄色葡萄球菌肠毒素A基因(sea)、16S rRNA和RNA Ⅲ的表达情况,在含有葡萄糖的NB培养基中sea的相对转录水平随着葡萄糖浓度的增大而升高,RNAⅢ的相对转录水平随葡萄糖浓度的变化而产生小幅度的波动,16S rRNA在菌体生长初期时的表达量较为稳定;与绝对定量法比较,结果差异较小(均小于15%),且差异不显著(p＞0.05).[结论]这种基于DNA扣除法的Real-time RT PCR相对定量方法可以有效的对金黄色葡萄球菌的基因表达进行分析.     

准备进行大田试验的重组DNA植物

公司Cib一Geigy生物技木研究公司Mosanto农业公司Mosanto农业公司北卡罗林纳州立大学弗洛里达大学Mosanto农业公司Rohm&Haas公司Poimeer Hi一Bre迁国际公司美国农业部农业研究局Calgene公司 试验内容- 重组DNA玉米/引进混霉素(hygromy-c认)抗性和任葡糖昔酸酶标记基因 通过遗传工程表达苏云金杆菌(Bt(ssp.)Kurstaki)色一内毒素蛋白质的重组DNA玉米 通过遗传工程表达苏云金杆菌(Bt(ssp.)Kurstaki)各一内毒素蛋白质的重组DNA棉花-通过遗传工程表达苏云金杆菌Kurslakl两种HDI菌株卜内毒素蛋白质的重组DNA花草重组DNA花草/引进表…     

多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征

为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断, 选择21号染色体上唐氏综合征特异区域基因片段(DSCR3)为目的基因, 以12号染色体上的磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)为参照基因, 设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针, 在同一个反应管中进行扩增。以相对定量指标△CT值区分唐氏综合征患者与正常人。采用EB 病毒转化技术, 把唐氏综合征患者外周血B 淋巴细胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件, 使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致, 接近100%, 模板浓度在3～300 ng/μL范围内, △CT值的变异系数小于15%, 浓度在30 ng/μL时, 变异系数最小(＜10%), 以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的△CT值重复性好, 变异系数分别为9.8%和13.3%。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常人的血标本, 正常人△CT值范围是-1.90～-1.30, 患者的△CT值范围是-2.95～-2.15, 两组之间无交叉重叠, 有明显差异(P＜0.001)。唐氏综合征患者永生细胞系建系成功 ,染色体核型和DNA 分析表明建系前后遗传是稳定的。因此, 实时荧光定量PCR比较△CT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。     

Applied Biosystems完善反义产品生产设施

Applied Biosystems,Inc.(ABI)(Foster City,CA)已建成大规模(克数量级)生产高品质合成DNA寡核苷酸产品设施.该公司致力于反义技术和DNA探针市场.根据一项合同,它计划生产一批DNA产品,用以满足反义技术公司进行临床实验的需要.ABI已与ISIS Pharmaceuticals(Carlsbad,CA)达成协议,向ISIS提供药用DNA.天然存在于细胞中的某些酶和核酸酶破坏反义寡核苷酸,因此研究者改变了反义RNA和DNA的糖-磷酸     

与冻伤作斗争的细菌病毒

控制农作物冻伤的重组体DNA法将受到一系列细菌病毒的竞争,大学遗传学公司的新冷冻技术子公司正在将后者商品化。该公司提出,把细菌病毒喷洒到植物上可杀死丁香假单孢菌Pseudomonas syringae和草生欧文氏菌(Erwinia herbicola)。     

仙客来的DNA鉴定技术获得成功并应用于培养苗的品质管理

北兴化学工业公司利用RAPD分析法(Random Amplifiled Polymorphic DNA)成功地进行了仙客来DNA鉴别。RAPD分析法已用于植物的品种间和F_1亲子鉴定等。但是,将此技术应用于仙客来的个体识别和亲株与培养株的DNA鉴定等在世界上还是首次。详细的数据于4月在东京召开的日本育种学     

综合遗传学公司推出食品沙门氏菌快速诊断试验盒

综合遗传学(Integrated Genetics)公司最近推出它的第一个产品--检出食品沙门氏菌用的快速诊断试验盒。它被称为GENE-TRAK,是以DNA杂交技术为基础的。目前只能用于沙门氏菌的检出。该公司的科学家已分离出DNA探针,含有与沙门氏菌DNA互补的碱基序列模式。分离出可能存在于食品样品中的任何微生物的DNA链后,将沙门氏菌DNA探针加入样品中,若探针与存在于样品中的DNA单链杂交,则表明其中有沙门氏菌存在。     

基于[Ru(phen)2(bpip)] 2+-DNA相互作用的共振光散射增强建立纳克级DNA的测定方法

通过研究钌多吡啶类配合物［Ru(phen)2(bpip)］2+与DNA相互作用的共振光散射等光谱,我们发现［Ru(phen)2(bpip)］²⁺与DNA相互作用的方式包括插入作用和静电作用模式.同时基于［Ru(phen)2(bpip)］²⁺ DNA体系增强的共振光散射现象,建立了一种简单、快速的测定纳克级核酸的新方法.实验结果表明体系在373 nm处共振光散射强度的增强与DNA的浓度呈线性关系.线性范围为0.025～1.250 mg/L,线性公式为△I_RLS=283.14C+2.26 (mg/L),相关系数为0.9983,DNA的检出限为5.7 ng/mL. 应用到实际样品的分析中,结果令人满意.     

用于传染病诊断的DNA检测试剂

根据 Frost 和 Sullivan 的最新研究,传染病诊断将垄断 DNA 探针试剂的最初市场,但在近十年之内,该试剂在遗传病和癌症中的应用将日益广泛。虽然预料个别公司在这个仍处于萌茅状态的产业中的命运还为时过早,但是《在医学中的 DNA 探针》这两卷报告的确预见到了将财政和市场力量列入议事日程的旧系统诊断试剂制造商和正在推动产业的新型生物工程公司之间日益加强的联合。DNA 探针(其使用的原理是这些遗传链有寻找其配对物并与之结合的能力)目前只能     

胶质细胞源性神经营养因子(△N39)-R9神经营养活性和透过血脑屏障的研究

为了研究胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在中枢神经系统疾病中的治疗应用,运用基因突变、蛋白质融合表达和蛋白质纯化技术获得分子质量较小的GDNF(△N39)活性片段.将HIV-1 Tat蛋白转导区(protein transduction domain,PTD)的9个碱性氨基酸49RKKRRQRRR57模拟物9个精氨酸(R9)与GDNF(△N39)活性片段融合表达,获得纯度达95%以上的GDNF(△N39)-R9融合蛋白.将GDNF、GDNF(△N39)、GDNF(△N39)-R9分别加入原代培养的中脑多巴胺能神经元和转染GDNF受体GFRαl和Ret的PC12细胞中,观察它们的神经营养活性和毒性.运用脑微血管内皮细胞株B-Endo 3,观察GDNF(△N39)-R9蛋白穿越血管内皮细胞膜的功能;运用脑血管内皮细胞和Matrigel铺板模拟血脑屏障,Transwell法检测Tat-GDNF(△N39)蛋白穿越脑血管内皮细胞和外周胶质膜的能力.结果显示:GDNF(△N39)-R9蛋白具有类似GDNF的神经营养活性,促进原代培养的中脑多巴胺能神经元和稳定表达GFRα1和Ret受体的PC12-GFRα1-Ret细胞株的存活,没有显示毒性,并且能很好地穿过脑微血管内皮细胞层和模拟的血脑屏障.     

Beta~((β))干扰素开始临床试验

对大规模生产和临床试验干扰素(重组DNA方法制造的)的巨大兴趣已集中在alpha,(α)干扰素并在一定程度上集中在gamma(Υ)干扰素上。目前,重组beta (fibroblaα)干扰素,即抗病毒和癌的干扰素的临床试验,将在与Shell oil公司达成协议之后,用Cetus公司的产品开始进行