小分子伴侣协助重组人γ-干扰素体外复性研究

考察了小分子伴侣在游离和固定化两种情况下,对重组人γ-干扰素（rhIFN-γ）体外重折叠复性的作用.实验结果表明,小分子伴侣GroEL191～345的加入有效地促进了rhIFN-γ的复性,在初始蛋白质浓度为100 mg/L时,rhIFN-γ复性后蛋白质回收率提高了2.2倍,总活性提高了近3倍;将小分子伴侣固定化在NHS-activated Sepharose Fast Flow凝胶后,不但能重复利用,而且进一步提高了rhIFN-γ复性效率,在初始蛋白质浓度为400 mg/L 时,仍使蛋白质回收率达到46.29%和比活达到1.95×10⁷ U/mg.     

表达人γ-干扰素的重组腺病毒的制备及检测

Ｅ１区缺失的腺病毒载体插入人γ－干扰素ｃＤＮＡ序列,与ｐＪＭ１７质粒通过磷权钙沉淀法共转染２９３细胞,经同源重组,共获得６个病毒噬斑,经ＰＣＲ共扩增检测证实这６个噬斑均为带有人γ－干扰素ｃＤＮＡ的重组腺病毒,受其感染的２９３细胞的上清中,都能测到γ－干扰素的活性,且社种活性可被一定稀释度的兔抗人γ－干扰素多克隆抗体所中和,其中的１号重组病毒纯化后,按不同的ＭＯＩ（Ｍｕｌｔｉｐｌｅｏｆｉｎｆｅｃｉｏ     

表达人γ-干扰素的重组腺病毒的制备及检测

El区缺失的腺病毒载体插入人γ-干扰素cDNA序列．与pJM17质粒通过磷酸钙沉淀法共转染293细胞．经同源重组．共获得6个病毒噬斑。经PCR共扩增检测．证实这6个噬斑均为带有人γ-干扰素cDNA的重组腺病毒;受其感染的293细胞的上清中,都能洲到γ-干扰素的活性,且这种活性可被一定稀释度的兔抗人γ-干扰素多克隆抗体所中和。其中的1号重组病毒纯化后,接不同的M()I(Multiple of infection)值感染复制缺陷型腺病毒不能在其中增殖的B16F10细胞,未出现细胞病变效应(cytopalhic effect,CPE)．而上清中的γ-干扰素活性却随M()I值增大而升高,这证实构建的复制缺陷型腺病毒是能表达井分泌人γ-干扰素的。     

重组羧肽酶原B的复性方法研究*

构建的羧肽酶原B表达质粒在大肠杆菌中获得高表达。但目的蛋白是以包涵体的形式存在。为了获得活性羧肽酶B,必须对其包涵体进行变复性。首先利用稀释复性确定了羧肽酶原B复性的最佳缓冲液;在凝胶过滤复性中,研究了柱长和洗脱流速对羧肽酶原B复性效率的影响;另外对比了稀释复性、透析复性、凝胶层析复性和Ni²⁺亲合层析法等四种方法对羧肽酶原B的复性效果。结果发现,这4种方法的复性效果有以下顺序:凝胶过滤复性>稀释复性>Ni²⁺亲合层析>透析复性。     

食源性病毒及其检测方法*

食源性病毒是指以食物为载体,导致人类发生疾病的病毒。按照病毒的不同来源,食源性病毒可分为肠道食源性病毒和人畜共患的食源性病毒两大类,肠道食源性病毒包括以粪便直接或间接污染食物,通过粪口途径使病毒传播给人类的病毒;人畜共患的食源性病毒是指一些人畜共患,以畜禽产品为载体传播的病毒。本阐述了食源性病毒的种类、生物学特性、流行病学特征、研究现状,阐明了近年来以PCR为基础的分子生物学检测方法及存在的问题,提出了食源性病毒今后进一步研究的发展方向及实际应用前景。     

检测人I型干扰素生物学活性的新方法

为建立一种更简便、安全、有效的检测I型干扰素（IFN）的方法,将可被I型IFN诱导的人6－16基因启动子与表达产物容易被检测的β－半乳糖苷酶基因相连,构建成重组质粒,然后转染人羊膜传代细胞系,筛选阳性克隆,最终建立了一种适用于检测I型IFN的简便、快速、敏感、特异和重复性好的新型方法,其敏感性同标准的细胞病变抑制法相同。     

发酵过程中细胞浓度在线检测系统*

利用微机软、硬件技术,设计了一套比浊法细胞浓度在线检测系统,并应用于5L发酵罐中木糖醇发酵过程细胞浓度在线检测。该系统能及时、较准确地反映发酵过程中菌体浓度随时间的变化情况,在规模化生产中具有较强的适用性、通用性,可为实现其它分析仪器的计算机在线检测系统提供值得借鉴的设计思路和实现方法。     

核酸试纸条检测方法研究进展*

凝胶电泳、实时荧光PCR等常规核酸检测方法存在操作繁琐、设备昂贵、反应时间长等局限性。随着核酸检测市场规模的大幅提升,常规检测方法已无法满足临床诊断、检验检疫的需求。核酸试纸条(nucleic acid detection strip,NADS)是一种新兴的核酸检测方法,具有灵敏度高、操作便捷、结果可视化、成本低且耗时短等优势,在基础研究与临床诊断等领域受到广泛关注。综述近年来NADS的检测方法及研究进展,系统总结该技术的原理、应用及临床潜在转化价值,以期为NADS的进一步开发、利用提供借鉴。     

猪γ干扰素的表达及其抗病毒活性的安全检测

为了提高干扰素抗病毒活性测定的生物安全性,本研究使用含有GFP的复制缺陷型水疱性口炎病毒(VSV△G*G)为指示病毒,分别对经原核表达系统和杆状病毒表达系统表达的重组猪γ干扰素(PoIFN-γ)在MDBK细胞上进行抗病毒活性测定。结果显示:由杆状病毒表达的重组PoIFN-γ具有高度抗病毒活性,其抗病毒活性为105IU/mL,原核表达的重组PoIFN-γ纯化后经缓慢复性也会产生一定的抗病毒活性,其抗病毒活性为32IU/mL。该方法与利用表达GFP的重组水疱性口炎病毒(VSV*GFP)所检测的干扰素抗病毒活性结果完全一致,表明复制缺陷型病毒VSV△G*G可作为复制型重组病毒的替代品,使得干扰素抗病毒活性检测更加安全、准确。     

活性酵母细胞衍生物的初步研究*

活性酵母细胞衍生物(Live Yeast Cell Derivative,简称LYCD)是酵母细胞在人为控制的伤害条件下产生的具有促进细胞呼吸和修复作用的保护性物质。研究结果表明：LYCD对细胞具有明显的促呼吸作用;在过氧化氢的作用下,应激反应发生15min时,所制备的LYCD具有最强的促呼吸作用;发生30min时,LYCD中还原型谷胱甘肽(GSM)的含量最高。对比实验还表明：在不同的应激条件下所制备的LYCD,具有相似的生物活性。     

重组人载脂蛋白AI米兰变体在大肠杆菌中的高效表达*

通过大肠杆菌表达系统来生产重组人载脂蛋白AI_M(proapolipoprote in AI_M,proapoAI_M)。整个proapo AI_M基因被分成两个片断,通过RT-PCR的方法合成。在对该基因的上游部分进行改造后,插入到表达载体pBV220中进行表达。蛋白的表达量达到45%左右,蛋白的表达形式为包涵体。包涵体通过疏水柱进行柱上复性,复性后的蛋白具有良好的生物活性。     

微量液基稀释法测定中药活性成分的体外抗曲霉菌活性*

通过测定中药活性成分肉桂醛和柠檬醛对常见深部条件致病性真菌黄曲霉、烟曲霉的抗菌活性,为建立中药抗曲霉菌药敏试验标准提供参考依据。参照美国国家临床试验标准化委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards,NCCLS)提出的标准,用微量液基稀释法分别测定肉桂醛和柠檬醛对黄曲霉、烟曲霉的抗菌活性。肉桂醛对黄曲霉、烟曲霉最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)分别为：0.100μg/mL,0.050μg/mL,柠檬醛对黄曲霉、烟曲霉的MIC分别为：2．600μg/mL、0．650μg/mL。中药活性成分肉桂醛和柠檬醛具有高效抗曲霉作用。该研究可为制定中药抗曲霉作用评价标准提供参考依据。     

中成药鼻炎片中三种微生物对γ射线敏感性研究*

通过对鼻炎片中大肠杆菌、白色念珠菌、短小芽孢杆菌的存活数与辐照剂量关系的研究 ,建立了在鼻炎片中 3种微生物的存活数与辐照剂量的数学模型 ,确定了 3种微生物的D1 0 值 ,并对影响辐照灭菌剂量的因素进行了讨论。结果表明 ,在鼻炎片中 ,大肠杆菌对γ射线敏感性较高 ,白色念珠菌对γ射线敏感性次之 ,短小芽孢杆菌对γ射线敏感性较低。     

海洋放线菌124092细胞毒活性和化学成分研究*

采用MTT法对海洋放线菌124092正己烷提取物进行细胞毒活性筛选,结果显示对小鼠B16黑色素瘤细胞有一定的生长抑制活性。用硅胶真空柱层析法将正己烷提取物粗分为6个组分(Fr1~Fr6),细胞毒活性追踪显示Fr6组分为活性部分。为确定其中的活性成分,运用GC/MS对Fr6组分的化学成分进行了分析,结果显示其主要成分为:棕榈酸(Palmitic acid,11.76%)、油酸(Oleic acid,12.16%)、亚油酸(Linoleic acid,14.77%)和乳杆(菌)酸(Lactobacillic     

酶分子体外定向进化的研究方法*

酶分子体外定向进化不仅可大幅度提高酶分子的进化效率,短期内在实验室完成自然状态下需要千百万年的进化过程,还可使酶分子按照人们期望的特定目标进化,因此对酶工程今后的发展非常重要。本对酶分子体外定向进化的研究方法进行了归纳总结。     

冰核真菌的冰核活性及其种类鉴定*

作者从1993年起至今,从已分离和搜集到的500多株真菌中筛选出在-5℃具有冰核活性的真菌6株,它们-5℃的冻滴率高低顺序为F9502（100%）=F9501（100%）＞F9401（96％）=AS3．494（96%）＞F9801（94%）＞F9802（92%）,结冰点高低顺序为F9502（-2．7℃）＞F9501（-3．4℃）＞F9401（-4.4℃）＞AS34594（-4.5℃）＞F9801（-4．7℃）＞F9402（-4．8℃）,以F9502菌株活性强而稳定。经鉴定确定：F9401和F9402菌株为FusartumSportFichioldesSherb．;AS3．4594菌株为FavenaceumSacc．;F9501和F9502菌株为F.gramlnearumSchwabe;F9801菌株为F．monilijormeSheldon。F．Sportrlchloides和F．graminearum作为冰核真菌未见报道。本结果为揭示冰核真菌与植物冻害关系及冰核真菌开发应用研究提供了菌种资源,有重要应用价值。     

阿魏蘑多糖理化性质及免疫活性研究*

以阿魏蘑Pleurotus ferulae Lanzi子实体和菌丝体为试验材料,采用水浸法提取阿魏蘑多糖,分别得到子实体粗多糖A和菌丝体粗多糖B。将A经Sevag法去蛋白、透析、CTAB络合、乙醇沉淀、NaCl溶液溶解、透析,得到多糖A1。紫外光谱分析鉴定多糖A1为均一组分。苯酚—硫酸法测得多糖A1糖含量为82.9%。凝胶渗透色谱法测得多糖A1数均分子量Mn=141088,重均分子量Mw=142897。气相色谱分析多糖A1单糖组成及其摩尔比为Xyl∶Gla∶Glc=1∶1.102∶2.899。巨噬细胞吞噬作用试验、迟发型变态反应试验、白细胞介素-2（IL-2）的诱生与检测试验测得粗多糖A、粗多糖B具有免疫活性。     

细菌聚羟基脂肪酸酯检测方法研究进展*

细菌聚羟基脂肪酸酯（polyhydroxyalkanoates,PHAs）是存在于许多细菌细胞内的聚合物,是一种新型的生物材料,在生态研究中可作为营养指标。回顾有关PHAs的研究方法的同时介绍用PT-IR技术从细胞水平快速定性和定量分析细菌PHAs。     

光合细菌转化槲寄生制剂抗肿瘤活性初步研究*

通过急性毒性实验比较各制剂组的毒性,MTT法考查各制剂组对人体外癌细胞的生长抑制率,体内实验考查各制剂组对移植性肿瘤的抗肿瘤作用。结果表明,光合细菌(PSB)制剂组、光合细菌转化槲寄生(PSBT)制剂组无毒,PSBT降低了槲寄生的毒性;PSBT制剂组对人体外癌细胞BGC-803、A2780、KB和小鼠体内S₁₈₀肉瘤、H₂₂肝癌、Lewis肺癌均具有明显抑制作用,且抗肿瘤活性高于其他制剂组。     

共培养海绵微生物诱导抗菌活性物质的研究*

从大连潮间带繁茂膜海绵中分离得到10株放线菌,对各菌进行抗枯草芽孢杆菌活性检测。结果显示：当各菌单独培养时,10株菌中有3株菌显示抗菌活性;当菌Hp-053与其余9株菌分别共培养时,9个共培养体系中5个显示出高于单培养的抗菌活性。进一步对部分共培养发酵液乙酸乙酯提取物进行薄层层析显色分析、生物自显影分析,证明共培养能诱导海绵相关微生物产生不同于单培养的代谢产物和抗菌活性物质。共培养可能是一条重新开发利用一些由于无活性或低活性而被忽视的海洋微生物菌种的新途径。