快速低压干柱柱层析技术的改进及其在刺苋分离提纯中的应用

快速低压干柱柱层析(Dry-columnflashchromatography)技术是由L.M.Harwood创造的。由于是一项较新的技术,尽管与经典的常压柱层析[1,2]比较具有明显优点,但目前尚不被广泛了解和应用。作者在丹麦皇家药学院药物化学系工作期间曾多次使用该技术,并进行了改良,使其更合理,更符合我国实验室的实际情况,而且应用此项技术分离纯化了一种治疗毒蛇咬伤的中药——刺苋(AmaranthussinosusL.)[3]。1　实验仪器　　玻璃砂芯漏斗,抽滤瓶,抽气器,硅胶GF254(青岛海洋化工厂),TLC硅胶60F254铝板(德国MERCK)。2　实验方法2.1　快速低压干柱柱层析　　…     

种子萌发实验的改进

于课前一周,取4只小瓶(如罐头瓶)分别编号甲、乙、丙、丁。甲瓶中装1/3吸胀的麦种,乙瓶中装麦种后再加过量的水,丙瓶中装干麦种,丁瓶中装煮过的麦种,4瓶均用塑料布封闭瓶口。上课时,让学生观察:甲瓶的中上层麦种已发芽其它则无发芽的。用注射器抽甲瓶中气体注入盛有石灰水上清液的试管中,结果液体变浊。打开甲瓶盖,把燃烧的火柴梗伸入瓶内即灭。用同法,其它瓶则无此现象。最后发给每个学生几粒已发芽的麦种咀嚼品味。此实验证明了:种子的萌发需要有正常的具有生活力的种子;需要水分、空气(和温度);进行呼吸作用并放出二氧化碳;内部物质的转化和分解(即淀粉分解成糖)。     

植物蒸腾作用实验装置的改进

将500毫升吸滤瓶的支管端和一根长约12厘米直径6毫米左右的玻璃管端涂些凡士林,并用4—5厘米长的一段乳胶管将二者连接。把软木塞的中央打一略小于供实验用枝条直径的孔,并把枝条插在孔中(枝条下端露出木塞1—2厘米长)把插有枝条的软木塞塞紧瓶口周围以凡士林密封。玻璃管的另一端插在盛有稀释红墨水的小瓶中。最后把一个叶片套进塑料袋内,扎紧袋口(如     

浅谈无氧呼吸与发酵

呼吸作用包括有氧呼吸和无氧呼吸(或发酵)两大类型。有氧呼吸是在有氧气参与的条件下进行的。而无氧呼吸和发酵一般都不需要氧气参与反应,鉴于这一点无氧呼吸有时被称为发酵,那么,它们是不是同义词呢在无氧条件下,生活细胞把某些有机物分解为不彻底的氧化产物,同时释放能量的过程。这个过程用于高等植物和动物(包括人类),习惯于称为无氧呼吸,用于微生物,则惯称为发酵。具体事实如下。高等植物无氧呼吸可产生酒精,如苹果储藏久了,就会产生酒味,其过程与酵母菌的酒精发酵是相同的,反应如下: C_6H_(12)O_62C_2H_5OH+2CO_2+能量除了酒精以外,高等植物的无氧呼吸也可产生乳酸,例如,马铃薯块茎、甜菜块根、胡萝     

介绍一种简易真空杀虫法

1　材料用具　　注射器 ( 5ml以上均可 )、针头、胶盖塞、透明的玻璃小瓶 (如注射用的青霉素钠瓶 ,头孢曲松钠瓶等 )。2　方法步骤1)将要用的注射器 ,玻璃瓶刷洗干净 ,并把它们擦干备用。2 )将捕捉到的昆虫 ,根据虫体的大小 ,选择合适的瓶子装入 ,塞紧胶盖塞。3)用注射器反复抽取瓶内空气 ,抽至真空为止 ,即注射塞能自动快速返回原位。4 )对于鞘翅目的昆虫 ,如瓢虫类 ,想做飞行状态的标本 ,可直接放入瓶内杀死。也可用薄薄一层脱脂棉将鞘翅与腹部缠绕包裹一起 ,防止其死亡时内膜质翅露出。3　注意事项1)在杀死昆虫时 ,虫体较大者死亡较快 ,…     

生物实验教学拾零

1.青霉素瓶在生物实验中用处多废弃的青霉素瓶在生物实验中有许多用途。(1)装清水,供生物实验之用。(2)装染色剂,如装稀释的红墨水、碘酒等。(3)装消毒剂,如装0.01％高锰酸钾溶液对牙签进行消毒。(4)装营养液,如装O.65％和0.9％生理盐水来观察两栖动物、哺乳动物的细胞、组织。(5)装反应剂,如装澄清的石灰水、碘酒溶液等。(6)装分离剂,如装10％盐酸用于解离根尖。(7)装固定液和保存液,如装醋酸酒精溶液对根尖进行固定,然后再放在70 ％酒精中保存。(8)装培养液,如装     

测量培养细胞鲜重和干重的新方法

要精确测定细胞的鲜重和干重,需要最大限度地了解悬浮培养的植物细胞生长的情况。这两种重量一般通过抽滤后干燥的方法测得。然而,抽滤并不总是能除去间隙中所有的水,并且用抽滤法测出的鲜重值常有较大的差异。华盛顿州立大学的科学家Ｄ．Ｒ．Ｍｉｌｌｓ和Ｊ．Ｍ．Ｌｅｅ描述了一种测量植物培养细胞鲜重和干重的更为精确的快速方法。这个方法包括（１）向一个已知重量的微量离心管中加入１ｍｌ悬浮培养液,并称重;（２）在管的尖端切一条约３ｍｍ深的裂缝;（３）把这个管插在另一个离心管中;（４）将整个装置放入一个５０ｍｌ的离心管…     

限制性核酸内切酶BamH1真的识别顺序dG_pG_pA_pT_pC_pC的化学合成

本文报道用硅胶柱层析分离二酯法合成产物的新方法及限制性核酸内切酶BamH1接头dG_pG_pA_pT_pC_pC的化学合成。其合成路线是:(1)以溶剂抽提法制备MMTrG_p~(Bz)G_p~(Bz)A~(Bz)-OH,其3'-OH以磷酸氰乙酯和MSCl反应磷酸化得到MMTrG_p~(Bz)G_p~(Bz)A_p~(Bz)(Ⅰ);(2)用硅胶分离法制备MMTrT_pC_p~(An)C~(An)-OAC,脱去5'-MMTr保护基后得HO-T_pC_p~(An)C~(An)-OAC(Ⅱ);(3)Ⅰ与Ⅱ缩合,脱去保护基后制得dG_pG_pA_pT_pC_pC(图2)。硅胶层析法与抽提法比较,前者有较高的分离效力和速度,并且产品中所含色素较少。硅胶层析法和3'-OH磷酸化方法的应用,加快了DNA短片段的合成。     

限制性核酸内切酶BamH1的识别顺序 dG_pG_pA_pT_pC_pC 的化学合成

本文报道用硅胶柱层析分离二酯法合成产物的新方法及限制性核酸内切酶BamH 1接头dG_pG_pA_pT_pC_pC 的化学合成。其合成路线是:(1)以溶剂抽提法制备MMTrG_p~(Bz)G_p~(Bz)A~(Bz)-OH,其3'-OH 以磷酸氰乙酯和MSCl 反应磷酸化得到MMTrG_p~(Bz)G_p~(Bz)A_p~(Bz)(Ⅰ);(2)用硅胶分离法制备MMTrT_pC_p~(An)C~(An)-OAC,脱去5'-MMTr 保护基后得HO-T_pC_p~(An)-OAC(Ⅱ);(3)Ⅰ与Ⅱ缩合,脱去保护基后制得dG_pG_pA_pT_pC_pC(图2)。硅胶层析法与抽提法比较,前者有较高的分离效力和速度,并且产品中所含色素较少。硅胶层析法和3'-OH 磷酸化方法的应用,加快了DNA 短片段的合成。     

种子在无氧条件下萌发实验的改进与探究

利用燃烧耗氧的特点设计的新式无氧瓶不仅能用于种子在无氧条件下的萌发实验,还便于对种子无氧萌发的代谢产物二氧化碳和酒精进行检测。实验证明,种子在无氧条件下能进行无氧呼吸并产生少量能量,但其尚不足以使种子成功萌发并生长。同时,由于代谢产物酒精的积累,种子很快会停止生长。该方法操作简单、效果显著,在将初、高中知识有机结合的同时,又可有效提高学生综合运用知识的能力和学科素养。     

舟山近海水样环境DNA获取方法的建立

以曼氏无针乌贼(Sepiella japonica)为研究对象, 通过绝对定量技术建立和优化了舟山近海高浊度水样环境DNA(Environmental DNA, eDNA)的获取方法。研究结果如下: (1)同体积水样采用乙醇沉淀法获得的eDNA产量是滤膜抽滤法的1.76—2.53 倍, 但在实际应用中由于受到采样体积、处理方式、配套设备的限制, 乙醇沉淀法难以发挥出优势; (2)滤网对泥沙等杂质无过滤作用, 添加滤网并不能过滤掉泥沙及增加抽滤体积; (3)滤膜孔径的大小对少量水样的eDNA产量有很大影响, 但对大体积水样eDNA的产量无影响; (4)水样静置处理有可能会增大eDNA产量, 但也有可能会增大eDNA结果的波动性, 使生物量评估结果误差较大; (5)阳离子表面活性剂对eDNA降解有明显的抑制作用; (6)去膜法效果优于碎膜法, 建议使用去膜法进行eDNA消化, 使用时增加离心时间; (7)酚抽除沙法虽然不能提高eDNA产量, 但能明显提高产物纯度。研究首次建立了舟山近海水样大生物eDNA最适获取方法, 为相似水域的水样采集及eDNA提取提供了借鉴参考。     

训练专一性对无氧阈测定的影响

本文对以上肢训练为主的15名优秀皮划艇运动员和以下肢训练为主的14名优秀中长跑运动员在两种常规负荷方式下的无氧阈及最大吸氧量进行了测定分析,以探讨训练专一性对无氧阈测定的影响。采用踏车式功量计和活动平板方式逐级递增负荷,通过与Apple Ⅱ_E辅助联机的Jaeger EOS自动分析系统,以通气和气体交换指标的变化,无创性地测定无氧阈和最大吸氧量。结果表明,训练专一性会影响无氧阈测定结果。欲测得最高的无氧阈值,实验室测试手段就应当尽量模拟训练时的运动形式。此外,能敏感地反映出运动训练专一性适应的是无氧阈时的吸氧量绝对值(1/min),而不是无氧阈的相对值(％Vo_2max)。     

种子萌发实验的改进

取两大 (约 15 0 0 m L)一小 (约 5 0 0 m L)的无色透明塑料饮料瓶各一个 ,取大饮料瓶用剪刀从瓶底往上 12 cm处横向剪断 ,形成一个大杯 ,将小瓶放入大瓶做成的杯中 ,从高出杯口约 1cm处用剪刀横向剪断 ,在小瓶做成的杯身上均匀地打上小孔 (近杯口 2 cm内不要打孔 )。然后 ,将打有小孔的小瓶放入大瓶中 ,在两瓶间的空隙内填入干净的卫生纸、或沙、或土 ,小瓶内加水。另取一大饮料瓶剪出一长条 (长度约 17cm,宽约 5 cm) ,顺向折成 3层 (以增加其强度 ) ,形成一宽约 1cm多的窄长条 ,插入小杯内 ,如图 1。分别取具有萌发力的小麦和菜豆 (或绿…     

棉阿舒囊霉细胞色素C的纯化、结晶和专一性的比较

棉阿舒囊霉(Ashbya gossypii)细胞色素C可用氯化钠抽提法或乙酸乙酯自溶法从菌体中抽出,经阳离子交换树脂Zeroli*226柱层析、硫酸铵分部沉淀及反透析后,可被纯化和结晶。乙酸乙酯自溶法的抽提得率高于氯化钠抽提法。两种方法抽提及纯化的细胞色素C在电泳中都表I见为均一,但氯化钠抽提之细胞色素C的生物活力略高于用乙酸乙酯抽提的细胞色素C。     

胞浆基质结构性(SCM)测定

胞浆基质结构性是一种近年来发展的萤光技术,利用萤光偏振测定法检测细胞内部某种有序性。自1974年Cercek首次提出SCM概念以来,大部分工作都集中在肿瘤诊断方面,取得一定进展。但是由于SCM测定需要较严格的条件控制,所以成功报告的实验室尚为数不多。本文详细研讨了Cercek的经典方法,并结合本实验室具体条件对淋巴细胞分离液、PBS、羰基铁粉悬液及抽滤过程作了修改,并建立了较稳定的SCM测定方法。实验结果指出:SCM反应淋巴细胞的密度是1.081,对小鼠脾淋巴细胞来说,这一密度的控制要求更严。当用PHA、dBcAMP、同种异型细胞刺激时,15分钟时就可测知SCM变化。SCM应答率RR_(SOM)(P-i/P-c×100%)在80%左右或更低。这些结果与Cercek报告的相近。本文对影响SCM测定的因素,如FDA的酶解、SCM反应细胞群的密度、抽滤程序和偏振值的推算作了讨论。该方法在MLR的检测方面有较成功的应用,细节将另文报告。     

脑啡肽基因的合成——Ⅰ.d-GATCCTAGA的合成

本文报道了脑啡肽基因下链二十六核苷酸中九核苷酸d-GATCCTAGA的合成。合成系采用改良的三酯法,即先合成和三个片段,然后由脱去5'-Dmt基后依次同和向5'端延伸缩合得到产物和是通过和分别同过量的d-T缩合,然后再用对氯苯磷酰双三唑对产物的3'-OH进行磷酰化得到。则是由同反应得到。在所有的缩合反应中,都采用2,4,6-三甲基苯磺酰硝基咪唑为缩合剂,缩合产物都以硅胶短柱层析分离纯化。除保护的九核苷酸未进行硅胶柱层析纯化之外,各中间片段经硅胶柱层析纯化后的收率都在75%以上。合成的全保护九核苷酸用浓氨水和80%醋酸相继脱去全部保护基后,以DEAE-葡聚糖凝胶A-25柱层析(含7M尿素)分离纯化,经去盐后得到d-GATCCTAGA,收率31.7%。产物的5'-OH用~(32)P标记后,同系层析均一,蛇毒磷酸二酯酶部分酶解后,作电泳-同系层析双向图谱,证明核苷酸排列顺序正确。     

海洋异养细菌利用溶解有机碳的定量评估

【目的】惰性溶解有机碳(refractory dissolved organic carbon,RDOC)是海洋总有机碳的主体组分,RDOC在深海中可保存数千年,构成了巨大的碳储库,在调节气候变化中有重要作用。但RDOC的定量评估尚未有统一的标准方法。通过测定环境中能被异养细菌利用的溶解有机碳(biodegradable DOC,BDOC)可以反过来评估RDOC的量。本文对BDOC测定中一些关键步骤进行验证,为制定海洋RDOC评估标准奠定基础。【方法】本文评估了3种过滤方式及5种滤膜对DOC测定的影响,并评估了瓶子效应和稀释效应对细菌生长和DOC利用的影响。【结果】研究发现,(1) GF/F滤膜、GF-75滤膜、聚四氟乙烯(PTFE)滤膜(孔径0.2μm)、聚碳酸酯(PC)滤膜(孔径0.2μm)和聚四氟乙烯材质针孔过滤器(HA)(孔径0.2μm) 5种滤膜不会引入DOC污染;抽滤过滤和重力过滤方式过滤效果稳定、无污染,而在线过滤效果不稳定,易污染;(2)不同大小培养体系(30–480 mL;表面积/体积比为:1.64–0.67 cm–1)之间的细菌生长速率和DOC利用量没有显著性差异;(3)培养体系稀释度越高,细菌生长速率越高,对数生长期细菌丰度及DOC利用量越低。【结论】综合考虑,建议BDOC和RDOC测定实验中采用抽滤过滤的方式及不进行稀释的培养体系;常用的滤膜和培养体积对BDOC评估无显著影响。结合研究结果,我们提出了评估海洋RDOC的方法。     

大熊猫、小熊猫和黑熊血红蛋白的组份分离、结晶及氨基酸组成分析

 聚丙烯酰胺凝胶电泳和羧甲基纤维素柱层析都表明大熊猫(Ailuropodmelanoleuca)、小熊猫(Ailurus fulgens)和黑熊(Selenarctos thibetanus)的血红蛋白各有两个组份。在近似的条件下得到了它们的晶体。三种动物血红蛋白的氨基酸组成相似,而且N-末端氨基酸都是Val。有待进一步测定全部氨基酸顺序,以揭示它们之间的异同和亲缘关系。     

鲢滤食不同藻类的磷吸收及排泄过程研究

为探究滤食性鱼类对水体营养元素地球化学循环过程的影响开展了室内实验,研究了鲢(Hypophthalmichthys molitrix)对藻类的滤食效率,测定了滤食过程中鲢对磷的吸收和排泄,并分析了排泄对水体中氮、磷的影响。结果表明:(1)鲢通过滤食作用降低了藻类密度,且对不同藻类的滤食效率无显著差异;(2)在水体中,鲢滤食藻摄入磷并排泄溶解性磷(SRP),在食物充足时可维持水体总磷(TP)相对稳定,在食物不充足时,鲢消耗自身营养并持续排泄SRP,成为新磷源;(3)鲢摄入食物后以高氮磷比(N﹕P)向环境再供应无机营养,食物中大部分氮和少部分磷以无机营养形式排泄,使滤食组水环境N﹕P显著高于control组,其中滤食蓝藻组水环境N﹕P显著高于硅藻、绿藻组,提示鲢对藻的滤食促进水体营养向磷限制转换,尤其是滤食蓝藻可能加强这种趋势。总之,鲢不仅可通过摄食压力降低藻密度,同时能以高N﹕P排泄再分配营养影响藻生长,其对水体营养循环的作用值得关注。     

噬菌体T4诱导的核糖核酸(RNA)连接酶的分离和纯化

本文介绍了一种可以同时提取多核苷酸激酶(利用硫酸链霉素沉淀部分)DNA连接酶(DE一52柱层析峰I)和RNA连接酶(DE-52柱层析峰III)的方法。RNA连接酶的分离纯化步骤,除粗酶提取与DEAE纤维素柱层析两步与DNA连接酶的分离纯化方法一样外,以后只要再经过羟基磷灰石柱层析,葡聚糖凝胶(sc曲adex-G 100)过滤,和单链DNA琼酯糖凝胶亲和层析三步就可以达到纯化的目的。最终酶浓度达到每毫升24,800交换单位,即500个标准连接单位。用’H标记的聚腺苷酸作底物测不出Rnase杂酶活力,而且成功地应用于核糖十二核苷酸和十六核苷酸的定向合成。此外还做了一些初步的连接试验,表明RNA连接酶对受体寡核苷酸中戊糖是核糖还是脱氧核糖有较明显的专一性,对受体寡核苷酸的组成和顺序有一定的选择性。5'-脱氧胸腺嘧啶寡核苷酸d(pT)。也是个相当好的供体。