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一种快速提取小麦叶片总RNA的方法 总被引:17,自引:0,他引:17
从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键.同种植物不同器官的组织由于组成分的差异,提取RNA的方法也存在不同的难点.在苯酚法和氯化锂沉淀法的基础上,改进并提出了一种适合小麦叶片总RNA的快速提取方法,消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染.该方法提取的小麦叶片总RNA,完整性好、纯度高,可用于RT-PCR、N orthern杂交、RACE等实验操作,而且简单经济、快速、实验结果稳定,重复性好,还适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取. 相似文献
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脂肪组织具有贮存能量、隔热保温和产生释放激素等多种生物学功能[1]。人和动物的脂肪组织有黄色和白色两种。后者与脂肪酸、葡萄糖等代谢密切相关。成熟的白色脂肪细胞特异地转录出与肥胖相关的基因──肥胖基因(obesegene)的mRNA[2.3.4],其翻译产物苗条素(leptin)在调节肥胖及其相关疾病如糖尿病、高血压、高血脂等方面起到重要作用[5,6]。由于脂肪组织细胞组成复杂,脂肪细胞中充满大量脂滴使得细胞核被挤向贴近胞膜[4],从中提取核酸有一定困难。为研究中国人的肥胖基因,本文在参考前人工作经验的基础上改进建立了适合脂肪组织… 相似文献
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干种子高质量总RNA的快速提取方法 总被引:1,自引:0,他引:1
高效快速提取高质量的种子RNA是种子分子生物学研究的基础。现有的提取方法难以高效快速地从种子中得到高质量的总RNA。本试验有机地将改进SDS法和异硫氰酸胍法相结合,采用改进的酸性SDS提取液、不溶性PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)阻止酚类氧化、KAc去除多糖、异丙醇沉淀RNA,可以高效地从0.01~0.1g水稻、大豆、蚕豆、芸豆、花生等干种子中提取到高质量总RNA。此法提取的总RNA,能够满足分子生物学研究的要求,可以进行反转录和RT-PCR反应,用于基因表达研究,并为从具相似成分的其他物种干种子提取总RNA提供参考方法。 相似文献
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一种丹参高质量总RNA的提取方法 总被引:1,自引:0,他引:1
高质量RNA的获得是开展丹参分子生物学研究的基础。采用异硫氰酸胍(Guanidine Thiocyanate,GT)法、尿素法、CTAB法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法.以丹参组织培养的幼苗为材料,进行丹参RNA的分离试验,发现所采用的几种方法获得的RNA都有不同程度的降解。分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种次生代谢成分造成的。在分析现有结果的基础上对GT法进行了改良,在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10%~20%)沉淀20min对于高质量总RNA的获得效果较好。琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT法无论对于组织培养中幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA分离效果。mRNA电泳检测发现所得mRNA集中分布在500b~3kb之间且质量较高,完全可以满足丹参各种RNA相关的分子生物学实验要求,为丹参RT—PCR、Northern杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。 相似文献
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从血液中提取总RNA的一种快速高效方法 总被引:6,自引:0,他引:6
血液中含有大量的RNA酶 ,可引起RNA的降解 .防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键 .目前提取RNA的方法较多 ,但有些方法尚不能完全防止RNA降解 .将TRIZOL方法稍加改进 ,将TRIZOL与异硫氰酸胍联用提取血液淋巴细胞总RNA .琼脂糖凝胶电泳结果表明 ,其 2 8SRNA与 18SRNA的比值为 2∶1,优于单独使用其中任何一种试剂者 .此方法同样适用于从其它细胞中提取RNA . 相似文献
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描述了两个从以含大量羟基磷灰石(钙)和细胞密度、数量甚低为特点的矿化的成年骨组织(成年大鼠颅骨)提取总RNA的改进方法.紫外分光光度法(A260、A280和A230)和1%甲醛变性琼脂糖凝胶电泳予以鉴定.进而以其逆转录的cDNA为模板扩增出β-actin和BMP-2基因,均表明所得总RNA完整和模板活性俱佳.总RNA产量平均为560μg/g骨组织. 相似文献
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石斛总RNA提取方法的研究 总被引:3,自引:2,他引:1
采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD260nm/OD280nm接近2.0,具有较高的纯度。其它三种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良的RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增,出现清晰的条带,进一步证明改良的RNA提取方法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。 相似文献
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Mangroves form unique communities in tropical coastal regions and tidal lowlands. Isolating RNA from mangrove leaves is difficult
because of high amounts of secondary metabolites and polysaccharides. Conventional extraction methods produce poor-quality
mangrove RNA. We present a simple, fast, and convenient protocol for isolating RNA from 5 mangrove species:Aegiceras corniculatum, Bruguiera gymnorrhiza, Ceriops tagal, Kandelia candel, andSonneratia apetala. Isolating RNA from other mangrove species is also possible. Obtained RNA was of high quality and used in an RT-PCR reaction
that amplified 0.6 kb of theA. corniculatum CPI-1 gene. 相似文献
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目的:比较以确定适用于野生稻总 RNA 提取的方法.方法:用改良的异硫氰酸胍法、TRIZOL 法、SDS 法和 CrAB 法分别提取云南 3 种野生稻和栽培稻滇超 6 号在灌浆期颖果的总 RNA.结果:SDS法能够提取的普通野生稻和疣粒野生稻的总 RNA 的纯度高,其A260/A260 介于1.9938~1.9267;而 TRIZOL 法只适用于栽培稻滇超 6 号,CTAB 法对于疣粒野生稻和药用野生稻提取效果一般,电泳条带不很清晰,其A260/A280 介于1.8243~1.6928;而新建立的改良的异硫氰酸胍法都能提取完整性好、高得率(浓度介于0.9358~1.2008μg/μl)和高纯度的 RNA(A260/A280 大于1.8),电泳 28S rRNA 和 18S rRNA 条带清晰,且该方法操作简单、耗时少、效率高.结论:改良的异硫氰酸胍法适合于野生稻颖果总 RNA 的提取,提取的总 RNA 完整性好、得率高. 相似文献