植物样品组织导电技术

为了解决植物样品导电和二次电子发射率的问题,采用表面真空喷镀(或离子溅射)的办法,使样品表面均匀地蒸镀上一层导电膜(金、铂、碳等),供扫描电镜观察其表面微细结构形貌。由于样品在喷镀过程中要受到热辐射等影响,往往引起样品变形,而且还要受到设备和材料的限制。为了解决样品热辐射变形等影响,电镜工作者寻找了许多方法,如新鲜样品低压观察     

“锇酸—丹宁酸—锇酸”法在扫描电镜术中植物样品制备的应用

用扫描电镜(SEM)观察生物样品,首先要使样品表面导电。现在的常规法是用金属喷镀法来达到这一目的。该方法的主要缺点是金属膜的厚度和膜层的不均匀性,而对一些多孔粗糙的样品要在整个表面喷镀一层连续的金属膜更为困难。随着细胞生物学的不断发展,所观察样品结构的要求也越来越细微,使这一     

扫描电镜研究节肢动物形态的简便方法

<正> 近年来,扫描电镜在研究动物形态时广泛应用。但是,供扫描电镜观察的生物样品的制备比较复杂,需要经过预处理,如临界点干燥,金属喷镀等。一些体表柔软的动物体经过这些处理,受抽真空及热辐射等影响,使样品损伤、变形,或由于镀膜有一定厚度(100—200A),小于此厚度的细节则不能分辨。同时,标本经喷镀后再不能继续保存供其他观察用,故扫描电镜技术的运用受到一定限制。 Howden等(1973)曾探索改进扫描电镜,降低加速电压(1.5—2.5KV),用来观察未喷镀的     

新鲜生物样品扫描电镜低压观察技术

扫描电子显微镜在生物学上的应用已很普遍。用扫描电镜观察生物表面所揭示的细微结构、远比光学显微镜图象清晰、分辨率高,为生物学的研究提供了很好的工具。由于扫描电镜生物样品的常规制备比较烦琐,须经固定、脱水、干燥,表面喷镀金属膜等过程,不但样品制备周期较长,而且因操作环节繁多往往容易造成样品损伤和变形,使图象不够理想。而新鲜     

用电子显微镜直接观测副肌球蛋白分子

将微量电泳及琼脂电泳纯的河蚌(Cristaria plicata,Leach)斧足肌副肌球蛋白溶于pH 8,M乙酸铵盐溶液内,蛋白浓度为0.18毫克/毫升。利用压缩氮气将此溶液从微粒喷雾器内喷至新鲜分开的洁净云母表面上,用铂铱合金真空喷镀,投影角     

高水分、富含淀粉植物组织的扫描电镜制备技术优化

应用常规高真空扫描电子显微镜观察生物样品必须经过脱水和干燥处理,但无论采用临界点干燥还是冷冻干燥方法,都存在样品表面不同程度失真的问题。植物高水分、富含淀粉组织样品经处理后,容易出现淀粉流失、细胞壁变形等现象,从而造成扫描图像粗糙,无法获得真实的细胞内部结构。本文通过对CO_2临界点干燥、化学固定样品冷冻干燥和新鲜样品冷冻干燥3种扫描电镜样品制备技术中后期制样进行机械断裂和液氮脆断改进,优化出两种植物高水分、富含淀粉组织的扫描电镜样品制备方法:(1)样品首先进行FAA化学固定,经冷冻干燥后用液氮脆断,对断面喷金镀膜和扫描电镜观察。利用该方法所得细胞结构完整,细胞壁整齐,淀粉粒和蛋白轮廓明确,可用于分析淀粉粒和蛋白颗粒在细胞内的分布。(2)新鲜样品直接进行冷冻干燥,经液氮脆断后对断面喷金镀膜和扫描电镜观察。利用该方法所得细胞壁整齐,淀粉粒轮廓更清晰,并且无蛋白颗粒干扰,用于分析淀粉粒在细胞内的分布更加理想。     

真菌的冷冻扫描电镜观察

冷冻扫描电镜法是根据低温生物学原理,生物样品经过超低温处理后进行电镜观察的一种方法。经超低温冷冻固定的生物样品可保持其原有的形态特征和生物活性。样品内部水份在超低温(—150℃)下,即使在真空中升华速度     

Ⅰ型胶原蛋白在云母表面自组装的AFM研究

目的：利用原子力显微镜(AFM)观察不同浓度、pH值的I型胶原溶液在云母表面的自组装情况,从而研究样品浓度和酸度对胶原蛋白自组装的影响。方法：配制0．8μg/ml、8μg/ml、0．5mg/ml、1．0mg/ml、4mg/ml的胶原醋酸溶液(pH值2．7—3.0)和0.2mg/ml、0．5mg/ml、1．0mg/ml的胶原PBS溶液(pH值7．2—7．4)。取5μl的胶原蛋白溶液,滴于新剥离的云母表面,空气中在25℃室温下自然干燥后用AFM观察。结果：酸性条件下,低浓度时胶原蛋白在云母表面只是简单的吸附,随着浓度的增加,胶原分子在云母表面开始组装形成网状的结构,当浓度达到饱和浓度时,胶原形成无规线团结构。在中性条件下,胶原更容易行成纤维,随着浓度的增加,纤维的直径和长度都随着增加。结论：胶原蛋白分子有在固体表面进行自组装的特性,自组装的结果与样品的浓度、样品溶液的pH值有着很大的关系。     

小方法三则

一、简易的水解装置人们在进行蛋白质的氨基酸组成分析或含有碳水化合物样品的中性糖组份分析时,都要对样品进行水解处理。为了得到准确的数据,必须将样品密封在一无氧的环境下进行水解。目前采用的常规水解管不能重复使用。而且充氮、抽真空及封管等操作也不甚方便。在此,我们介绍一个简易的、可重复使用的水解装置供大家参考。该装置由玻璃真空密封阀及磨口玻璃管组成(图1)。     

原子力显微镜在染色体研究中的应用

原子力显微镜(Atomic force microscopy, AFM)是一种具有超高分辨率的显微成像仪器, 可在空气、真空和液体环境下对样本的表面结构进行实时观察。文章介绍了AFM的工作原理, AFM相对于其他种类显微镜在观察生物样本方面的显著优势, 并综述了AFM在染色体研究中的应用和进展。     

一种制备植物扫描电镜样品的新干燥法：叔丁醇冻结干燥法

叔丁醇冻结干燥法用于植物材料,获得了良好的效果。经常规固定的样品完成脱水以后浸泡在叔丁醇中,然后将含醇样品放入电冰箱中冷冻,待叔丁醇凝固后再转移到真空镀膜机的钟罩里,用机械泵抽真空,冻结的醇在低真空中升华后样品得到了干燥。SEM 镜检表明,样品的表面和细胞断裂面及其深层(可见到内质网的双层膜、线粒体的嵴、高尔基体潴泡叠层、核糖体颗粒等细胞器)的三维图象均优于用临界点干燥法所得到的样品图象,叔丁醇冻结干燥法用于植物 SEM 样品制备,是一种操作简单,干燥质量可靠、值得推广的方法。     

花粉块内花粉粒形态观察的扫描电镜样品制备方法

探讨在扫描电镜下观察花粉块内花粉粒的样品制备方法。以翅萼石斛(Dendrobium cariniferum Rchb.f.)的花粉块为材料,在常规扫描电镜样品制备的基础上,采用导电双面胶带拉断法,暴露出花粉块内部的花粉粒,使用扫描电镜进行观察。在扫描电镜下清晰观察到了花粉块内花粉粒的立体形态、大小和表面纹饰。此法简单易行,操作方便,进一步优化后可作为扫描电镜下观察花粉块内花粉粒形态的通用方法。     

龙眼和龙荔毛被类型及果实形态的研究

本文对龙眼(桂圆)Dimocarpus longan Lour.和龙荔(疯人果)D.confinis(How et Ho)H.SLo的毛被类型和果实形态进行了详尽的比较观察。龙眼的营养和繁殖体上具分枝的星状毛,果皮表面具平滑瘤状或泡状突起;而龙荔的毛被则为单生柔毛或腺毛,果皮表面具圆锥状小刺。这两个种之间基本没有形态过渡,是分类学上区别明显的种。本文还报道了对商业部门送检样品的鉴定结果。龙眼毛被类型和果实形态在送检样品中均可观察到,而且在这些样品果皮表面未见有组织断裂及破损痕迹,因此,它们不可能是由龙荔果实加工处理的假冒商品,而是真正的桂圆。     

龙眼和龙荔毛被类型及果壳形态的研究

本文对龙眼(桂圆)Dimocarpus longan Lout,和龙荔(疯人果)D．confinis(How et Ho)H．SLo的毛被类型和果实形态进行了详尽的比较观察。龙眼的营养和繁殖体上具分枝的星状毛,果皮表面具平滑瘤状或泡状突起;而龙荔的毛被则为单生柔毛或腺毛,果皮表面具圆锥状小刺。这两个种之间基本没有形态过渡,是分类学上区别明显的种。本文还报道了对商业部门送检样品的鉴定结果。龙眼毛被类型和果实形态在送检样品中均可观察到,而且在这些样品果皮表面未见有组织断裂及破损痕迹,因此,它们不可能是由龙荔果实加工处理的假冒商品,而是真正的桂圆。     

用于组织工程软骨支架的改性水凝胶初步筛选

目的:本研究对水凝胶材料加入不同复合成分进行改性后,通过细胞在材料表面的生长增殖情况,筛选适宜作为组织工程软骨支架的复合材料。方法:PEGD水凝胶中分别以8:2和6:4两种比例复合NVP或HEMA;大鼠骨髓基质干细胞(MSCs)接种到改性后的复合材料表面共培养。以扫描电子显微镜(SEM)观察细胞在复合材料表面的生长状况。根据SEM观察结果,选择适宜的复合材料成分及比例,分别以等离子处理、丙烯酰胺接枝、真空干燥法和冻干法处理材料表面,再次接种MSCs,并以扫描电镜观察细胞生长;适宜材料在接种细胞前后的抗压强度也进行了评价。结果:根据SEM结果,(8:2)的PEGDA/HEMA和PEGDA/NVP表面完全无细胞生长;而在6:4比例的PEGDA/HEMA和PEGDA/NVP材料表面MSCs都有生长,其中以PEGDA/HEMA细胞增殖更明显。选择(6:4)PEGDA/HEMA复合材料分别进行三种方式表面处理,MSCs接种后在各种表面处理方式的材料都有生长,但以等离子处理后的材料表面细胞生长最旺盛,形态最好。细胞在(6:4)PEGDA/HEMA表面复合培养前后,材料的抗压强度没有统计学意义上的显著差别(P0.05)。结论:PEGDA/HEMA(6:4)具有良好的细胞相容性,尤其经等离子处理表面后细胞生长更优,可以作为组织工程软骨的支架材料。     

一种快速、简易的扫描电镜植物样品干燥新方法

扫描电子显微镜是观察植物样品表面超微结构的有效方法,大部分新鲜植物样品需经过干燥处理才可以进行扫描电镜观察。该研究在传统叔丁醇冷冻干燥法的基础上,建立了叔丁醇一步冷冻干燥法,省略了固定、脱水、置换等步骤,简便易行,干燥后的样品形态饱满,最大程度保持了样品原貌。用叔丁醇一步冷冻干燥法干燥的样品可以与CO_2临界点干燥法和常规叔丁醇冷冻干燥法的效果相媲美。通过对不同的样品进行干燥处理,结果证明,该方法具有广泛适用性。     

一类不具有K88和K99抗原的大肠杆菌对仔猪小肠上皮的粘着性和电镜形态观察

由北京市农业科学院畜牧兽医研究所提供的苇沟5、巨山1及大兴1三个仔猪黄痢病原性大肠杆菌菌株,都不具有K88和K99抗原,但它们对仔猪都有很强的致黄痢作用。它们的菌体O抗原部属O64,同时具有一个共同的K(L)抗原。这三个菌株均能强烈地粘着于仔猪迥肠和空肠的粘膜绒毛上皮上。电镜形态观察,可见菌体表面有多条菌毛样结构,在铬喷镀投影标本中,这种菌毛可长达4μm。这类不具有Kss和K99抗原的肠病原性大肠杆菌菌株同时具有另一种与菌毛有关的表面粘着素K抗原。     

介绍两种简便的生化样品浓缩方法

在生理生化实验中,经常要将某些样品进行浓缩。现在介绍我们实验室中曾经用过的两种简便方法,以供大家参考。一真空减压透析浓缩法真空减压透析浓缩法的基本原理是利用浓缩装置内外的压力差,将所欲浓缩样品中     

三种显微技术对人毛囊蠕形螨的观察和研究

目的 采用荧光显微镜、扫描电镜和激光共聚焦显微镜对人体毛囊形蠕形螨进行形态学观察.方法 选用5 μg/mL碘化丙啶(propidine iodide,PI)对虫体进行荧光染色,避光染色15 min,分别置于荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察;2.5%戊二醛固定虫体标本,梯度酒精和叔丁醇脱水,金喷镀后扫描电镜观察.结果 荧光显微镜下碘化丙啶对虫体有很强的结合力,虫体荧光信号均匀展示于细胞表面,充分展现虫体形态,扫描电镜更加清楚、细致地展示人体毛囊型蠕形螨的超微结构,激光共聚焦显微镜将虫体分层扫描图片进行三维重建,真实、完全、直观地展露了虫体.结论 三种显微技术均可展示蠕形螨超微形态.PI对虫体有很好的荧光染色作用,使激光扫描共聚焦显微镜能够获得更加精准的超微形态结构,结合三维重建技术有着广泛的应用价值.     

川东北二叠系-三叠系界线附近微生物岩微观表面特征观察研究

对采自四川通江平溪坝二叠系-三叠系界线(PTB)剖面发育的微生物岩样品,选用2.5%盐酸、10%盐酸、10%氢氧化钠溶液、20%双氧水、10%醋酸以及0.1M乙二胺四乙酸钠(EDTA)进行处理,根据微生物岩表面处理结果的异同,和在扫描电镜(SEM)图像上的表现,确定最适合于微生物岩表面结构观察的化学处理方法是使用2.5%盐酸处理样品表面。用该法处理,并通过SEM观察发现,通常被当作白云岩的PTB微生物岩,实际上只是含有白云岩微晶的泥晶灰岩,微生物岩中含有与硫酸盐还原菌有关的大量的纳米级微球粒与形似草莓状黄铁矿的颗粒。通过实验结果对比分析了不同层位的微生物岩与白云岩的SEM微米级的特征和区别,以及建造微生物岩的微生物群落对其层位上下地层的影响。