成纤维细胞生长因子3-siRNA对肺癌细胞A549侵袭性和基质金属蛋白酶9表达的影响

目的:探讨人成纤维细胞生长因子3(Fibroblast growth factor3,FGFR3)基因沉默对人类肺腺癌A549细胞侵袭能力及其对基质金属蛋白酶9(Matrix metaloproteinases 9,MMP9)基因表达的影响。方法:细胞分为3组:A组:实验组,即FGFR3特异性小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)(siRNA-FGFR3)干扰组;B组:阴性对照组,即FGFR3非特异性阴性对照siRNA(siRNA-NC)干扰组;C组:空白对照组,无siRNA干扰;通过核酸转染试剂脂质体Lipofectamine TM2000(Lipo2000)转染A549细胞;倒置荧光显微镜观察Lipo2000转染效率;转染后A549细胞的侵袭能力用Transwell实验检测;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)用于检测转染前后FGFR3及MMP9 m RNA的表达水平。结果:Lipo2000介导的FAM-siRNA对肺腺癌A549细胞的转染效率可达80%;在转染36 h后,Transwell实验结果显示A组较B组、C组侵袭能力显著降低(P0.01)。Real-time PCR结果显示,A组较B、C组的FGFR3和MMP9基因表达量明显下调(P0.01)。结论:FGFR3基因沉默可明显抑制肺腺癌A549细胞的侵袭能力,并能下调MMP9表达。为肺癌的治疗提供了新的靶点。     

沉默细胞分裂相关基因NUF2的表达对卵巢癌细胞侵袭及迁移的影响

目的:研究沉默细胞分裂相关基因NUF2的表达对卵巢癌细胞侵袭及迁移的影响,并初步探讨其潜在的分子作用机制。方法:用基因表达谱数据动态分析(GEPIA)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测卵巢癌组织和细胞中NUF2的表达情况;将卵巢癌HEY、SKOV3细胞分为空白对照组、control siRNA(si-control)组和NUF2 siRNA(si-NUF2)组,用qRT-PCR检测各组细胞的NUF2 mRNA表达水平以验证转染效果;Transwell小室实验和细胞划痕实验检测沉默NUF2后各组细胞侵袭、迁移能力的改变;蛋白印迹法检测各组细胞中Notch通路相关蛋白Notch1、Hes1的表达水平。结果:NUF2在卵巢癌组织或细胞中均高表达,差异均有统计学意义(P0.05);与空白对照组和sicontrol组相比,si-NUF2组细胞中NUF2 mRNA表达水平显著下降(P0.05),侵袭、迁移细胞数明显减少(P0.05),Notch1和Hes1蛋白表达降低。结论:沉默NUF2表达可抑制卵巢癌细胞侵袭、迁移能力,其分子作用机制与抑制Notch信号通路有关。     

Egr-1基因沉默对A549细胞放射敏感性的影响

目的:探讨Egr-1基因沉默对人肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法:选用A549细胞株作为研究对象,将其分成A、B、C三组,即空白对照组(只加入RPMI-1640培养)、阴性对照组(加入LV3-NC-sh RNA)、实验组(加入EGR1-homo-2294-sh RNA),采用慢病毒介导的sh RNA干扰技术使实验组细胞Egr-1基因沉默表达。利用荧光显微镜、自动化荧光定量细胞成像分析系统分析sh RNA转染,利用FQ-PCR分析Egr-1表达,再利用细胞克隆形成实验检测细胞放射敏感性参数的差异。结果:慢病毒介导的sh RNA成功转染阴性对照组、实验组细胞;空白对照组与阴性对照组Egr-1表达无差异(P0.05),实验组与空白对照组、阴性对照组比较Egr-1均受到明显抑制(P0.05);克隆形成实验中细胞放射敏感性参数D0、SF2实验组细胞与空白对照组、阴性对照组比较均存在明显差异(P0.05)。结论:Egr-1基因沉默使A549细胞放射敏感性降低,Egr-1表达可能与肿瘤细胞对放射的敏感性有关。     

芬戈莫德通过鞘氨醇-1-磷酸信号通路抑制肝癌细胞迁移的实验研究

目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸(SIP)信号通路及其抑制剂芬戈莫德(FTY720)在体外实验中对不同侵袭潜能人肝细胞癌(HCC)细胞迁移能力的作用。方法通过Real-time PCR和免疫印迹的方法比较低侵袭潜能HCC细胞MHCC-97L和高侵袭潜能HCC细胞MHCC-97H中S1P信号通路关键分子及下游促迁移信号通路的表达与活性水平。使用外源性S1P刺激MHCC-97L细胞,并使用siRNA干扰MHCC-97H细胞中S1P受体1(S1PR1)的表达,通过划痕愈合实验和Transwell实验检测HCC细胞迁移能力的变化。最后使用FTY720处理MHCC-97H细胞,观察S1P及其下游信号通路表达及活性的变化,并研究FTY720对MHCC-97H细胞迁移能力的影响。两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析。结果高侵袭潜能MHCC-97H细胞中,S1PR1、鞘氨醇激酶1(SphK1)及鞘氨醇激酶2(SphK2)的相对表达量分别为5.94±0.78、1.64±0.30及1.48±0.28,高于低侵袭潜能MHCC-97L细胞的1.00±0.06、1.00±0.06及1.00±0.09,差异具有统计学意义(t=10.96,3.575,2.841;P均0.05)。MHCC-97H细胞中S1PR1、SphK1及SphK2的蛋白表达水平及活性以及S1PR1下游与细胞迁移能力密切相关的Src、粘着斑激酶(FAK)和Janus激酶2(JAK2)/信号转导子和转录激活子3(STAT3)信号通路活性明显高于MHCC-97L细胞。外源性S1P可促进MHCC-97L细胞的划痕愈合能力。MHCC-97L的Transwell细胞迁移实验显示:S1P刺激组迁移过膜细胞数为(178.33±10.01)个/视野,显著多于空白对照组的(88.00±8.54)个/视野,差异具有统计学意义(F=116.60,P0.01)。相反的,使用siRNA干扰MHCC-97H细胞中S1PR1表达后,细胞的划痕愈合能力受到明显抑制,Transwell实验显示:阴性对照组迁移过膜细胞数为(209.33±4.51)个/视野,而S1PR1特异性siRNA转染组迁移过膜细胞数为(98.67±9.02)个/视野,显著少于阴性对照组,差异具有统计学意义(t=19.01,P0.01)。FTY720作为S1P通路抑制剂,同样抑制了MHCC-97H细胞的划痕愈合能力,Transwell实验同样显示:FTY720处理组迁移过膜细胞数为(58.67±6.03)个/视野,显著少于对照组的(203.33±10.41)个/视野,差异具有统计学意义(t=20.833,P0.01)。FTY720的作用机制可能在于通过下调SphK1和S1PR1,抑制下游促迁移信号通路的活性,并进一步抑制HCC细胞的迁移。结论 S1P信号通路参与了HCC细胞的迁移,而FTY720作为一种具有抗HCC活性的免疫抑制剂,可能通过下调S1P及其下游信号转导,抑制HCC细胞的迁移能力。     

miR-223在结肠癌组织中的表达及促进结肠癌细胞迁移侵袭的机制研究

目的:探讨微小RNA-223 (mi R-223)在结肠癌组织中的表达及对结肠癌HT-29细胞侵袭、迁移能力的影响及机制。方法:检测mi R-223在结肠癌组织与癌旁组织中的表达。通过脂质体转染法将mi R-223模拟物(mi R-223 mimics,mi R-223 mimics组)及microRNA无关序列(mi R-223 NC,NC组)转染入结肠癌HT-29细胞。采用Real-time PCR检测转染后细胞中mi R-223和TWIST的表达,Western blot检测TWIST的蛋白表达,Tranwell检测细胞的迁移与侵袭能力。双荧光素酶报告基因检测mi R-223对TWIST基因启动子活性的影响。采用Transwell迁移与侵袭实验检测mi R-223 mimic及Twist si RNA共转染后人结肠癌细胞系HT-29迁移与侵袭能力的变化。结果:与癌旁结肠组织比较,mi R-223在结肠癌组织中呈现明显高表达(P0.05);与空白对照组和mi R-223 NC组比较,转染mi R-223 mimics后的HT-29细胞中的mi R-223表达显著增加(P0.05)。与阴性对照组和空载转染组相比较,mi R-223 mimics转染组穿透的细胞数目明显增加(P0.05),且mi R-223 mimics转染组的细胞侵袭能力显著增强(P0.05)。与mi R-223 NC组和空白对照组比较,转染mi R-223 mimics的HT-29细胞的TWIST基因m RNA和蛋白表达均显著增加(P0.05)。双荧光素酶检验结果显示TWIST为mi R-223的下游靶基因。共转染TWIST si RNA和mi R-223 mimics的结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭能力较单独转染mi R-223 mimics的HT-29细胞显著减弱(P0.05)。结论:mi R-223可能通过上调下游靶基因TWIST水平促进结肠癌HT-29细胞的迁移与侵袭。     

人肝内胆管癌细胞PRL-3 的表达与侵袭转移研究

目的:探讨PRL-3在人肝内胆管癌侵袭转移中的作用.方法:利用小RNA技术干扰肝内胆管癌细胞株PRL-3表达,并采用细胞划痕实验和Transwell体外侵袭实验评价PRL-3对肝内胆管癌细胞侵袭转移能力的影响.结果:RT-PCR和Western blot结果均显示转染PRL-3特异性siRNA-2组PRL-3表达明显降低(P＜0.05).PRL-3 siRNA-2组在划痕培养24h后划痕区域宽度占初始划痕区域宽度的百分比为(62.12±6.28)％,阴性对照组为(23.88±2.55)％,空白对照HCCC-9810组为(21.20±6.07)％.PRL-3siRNA-2组细胞的划痕两端距离相比明显较宽,分别与阴性对照组细胞和空白对照HCCC-9810组细胞相比均有统计学意义(P＜0.05),后两者无显著性差异(P＞0.05).Transwell体外侵袭实验结果显示,PRL-3 SiRNA-2组细胞侵袭能力明显减弱,穿膜细胞数为(19.40±2.30)个/HP,明显少于阴性对照组(64.00±2.73)个/HP和正常HCCC-9810组(67.20±3.l1)个/HP,差异有显著性(P＜0.05);正常HCCC-9810组和阴性对照组无明显差异(P＞0.05).结论:PRL-3特异性siRNA能够抑制肝内胆管癌细胞HC-CC-9810中内源性PRL-3的表达,并可以明显抑制肝内胆管癌细胞的迁移侵袭能力.     

人巨细胞病毒US28基因通过HIF-1α途径促进结肠癌细胞的迁移、侵袭

人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)的US28基因在结肠癌内呈高表达趋势且与淋巴结转移、Dukes分期进展密切相关,癌细胞过度的迁移和侵袭是造成淋巴结转移、Dukes分期进展的重要物学环节,US28基因表达的变化提示US28可能参与了结肠癌细胞迁移、侵袭的调控,但具体的作用及机制均未阐明。为研究HCMV US28基因促进结肠癌细胞迁移、侵袭的作用及机制,本研究培养结肠癌COLO205细胞株并分组,阴性对照组(NC组)用不含药物和质粒的DMEM处理,空白对照质粒组(NC质粒组)转染空白的pcDNA3.1质粒,US28质粒组转染过表达US28基因的pcDNA3.1质粒,US28质粒+YC-1组转染过表达US28基因的pcDNA3.1质粒、同时加入缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的抑制剂YC-1。检测细胞的迁移活力、侵袭活力、细胞中HIF-1α及下游迁移基因(HIF-1α、Snail)、侵袭基因(MMP1、MMP9)的表达量。结果显示,与NC组、NC质粒组比较,US28质粒组的迁移细胞数目、侵袭细胞数目及细胞中HIF-1α、Snail、MMP1、MMP9的蛋白表达水平均明显增多(P0.05),细胞中E-cadherin、TIMP2的蛋白表达水平均明显减少(P0.05);与US28质粒组比较,US28质粒+YC-1组的迁移细胞数目、侵袭细胞数目及细胞中HIF-1α、Snail、MMP1、MMP9的蛋白表达水平明显减少(P0.05),细胞中E-cadherin、TIMP2的蛋白表达水平均明显增多(P0.05)。综上,HCMV US28基因能够促进结肠癌细胞的迁移、侵袭且该作用与激活HIF-1α途径、调节下游迁移及侵袭基因表达有关。     

转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭的实验研究

目的:研究转录因子WSTF对肺癌细胞增殖和侵袭作用的影响。方法:采用慢病毒介导的基因转染方法建立A549细胞WSTF高表达细胞系A549-WSTF和空质粒对照细胞系A549-control。细胞增殖实验和克隆形成实验观察ING5过表达对肺癌A549细胞增殖能力的影响;Trans-well迁移实验和侵袭实验观察WSTF对肺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。结果:Western blot验证A549-WSTF细胞WSTF蛋白水平显著高于对照细胞A549-control,P=0.0004。WSTF高表达明显促进了肺癌细胞的增殖能力(1-4天P值分别为0.002、0.0004、0.0002和3.21×10-5)和克隆形成能力(P=0.004);WSTF过表达还显著促进了肺癌细胞从trans-well小室迁移到下室的作用,其OD570值分别为0.626±0.013(A549-WSTF)和0.322±0.010(A549-control),P=2.37×10-5;WSTF还促进肺癌细胞穿透基质胶迁移到下室,其OD570值分别为0.600±0.027(A549-WSTF)和0.333±0.017(A549-control),P=0.0004。结论:WSTF可以促进肺癌细胞的增殖和侵袭能力而发挥促癌作用。     

RNA干扰技术下调营养缺乏自噬因子1表达对肝癌细胞侵袭转移能力的影响

目的采用RNA干扰手段抑制营养缺乏自噬因子1(NAF1)在肝细胞癌MHCC-97H细胞中的表达,观察其对肝癌细胞侵袭转移能力的影响。方法采用NAF1-si RNA和空白对照NC-si RNA转染肝细胞癌MHCC-97H细胞,设为NAF组和NC组,同时设立未转染空白对照组(Blank组)。荧光实时定量PCR法检测MHCC-97H细胞NAF1m RNA表达。Western blotting法检测MHCC-97H细胞NAF蛋白和基质金属蛋白酶9(MMP9)蛋白表达。细胞划痕实验检测MHCC-97H细胞迁移能力。Transwell实验检测MHCC-97H细胞侵袭能力。荧光素酶报告基因实验检测MHCC-97H细胞核因子κB(NF-κB)信号通路的相对活性。多组间数据的比较用单因素方差分析,两组之间数据的比较采用t检验。结果 NAF组MHCC-97H细胞NAF1-m RNA的相对表达量为(6.50±0.23)﹪,低于Blank组的(100.80±0.60)﹪,且差异具有统计学意义(t=14.17,P=0.02)。NAF组MHCC-97H细胞NAF1蛋白和MMP9蛋白的相对表达量分别为0.12±0.01、0.07±0.01,均低于Blank组的0.79±0.05、0.81±0.02,且差异均有统计学意义(t=5.21、7.45,P=0.00、0.02)。NAF组MHCC-97H细胞的迁移距离明显小于Blank组。NAF组穿膜细胞的数量为(11.28±1.56)个/视野,少于Blank组的(197.87±3.18)个/视野,且差异有统计学意义(t=7.97,P=0.00),NAF组NF-κB信号通路的相对活性值3.25±0.53明显低于Blank组的26.69±7.41,差异具有统计学意义(t=13.33,P=0.01)。结论采用RNA干扰手段抑制NAF1的表达可能成为抑制肝细胞癌侵袭转移的有效手段。     

siRNA沉默整合素beta1 基因对子宫内膜癌细胞侵袭、转移的影响

目的：探讨siRNA 沉默整合素茁1 基因对子宫内膜癌细胞侵袭、转移的影响。方法：选取子宫内膜癌ECC-1细胞系(ER阳性) 和KLE细胞系(ER阴性)，分别转染Integrin beta1 siRNA 质粒(Integrin beta1 siRNA 组)、无义序列siRNA质粒(无义序列对照组)和空载 质粒(空载对照组)，利用实时荧光定量PCR 检测各组细胞中Integrin 茁1 mRNA的表达，Western blot 检测各组细胞中Integrin beta1、 beta-catenin 和C-Myc 蛋白的表达，Transwell 小室检测各组细胞迁移和侵袭能力，MTT 法检测各组细胞的增殖情况。结果：Integrin beta1 siRNA 组ECC-1 细胞和KLE 细胞中Integrin beta1 mRNA 和蛋白相对表达量均低于无义序列对照组和空载对照组(P<0.05)； Integrin beta 1 siRNA组ECC-1 细胞和KLE细胞中beta-catenin 蛋白和C-Myc 蛋白相对表达量均低于无义序列对照组和空载对照组， 差异均有统计学意义(P<0.05)；Integrin beta1 siRNA组ECC-1 细胞和KLE 细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数均低于无义序列对照组 和空载对照组(P<0.05)；Integrin beta1 siRNA 组ECC-1细胞和KLE 细胞的A 值均低于无义序列对照组和空载对照组(P<0.05)。结 论：特异性抑制Integrin beta1 基因可抑制子宫内膜癌细胞迁移、侵袭和增殖，可能与抑制Wnt信号传导有关。     

补骨脂抑制人工关节假体周围骨溶解的研究

目的：探讨中药补骨脂对人工关节置换术后假体周围骨溶解,假体无菌性松动的核因子KB受体活化因子配体-核因子KB受体活化因子受体-骨保护素（RANKL-RANK-OPG）信号通路的作用。方法：取24只200＋5g雌性SD大鼠。随机分为A、B、C组,均注射钛颗粒溶液建立骨溶解模型,术后A组采用中药补骨脂水溶液腹腔注射,B组采用外源性OPG腹腔注射作为阳性对照,C组采用生理盐水腹腔注射作为阴性对照。给药4周后,通过免疫组化及反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组动物体内RANKL／RANK的表达水平变化。结果：用药4周后,3组12只大鼠背部气囊均为厚壁囊腔,骨溶解模型成功建立,免疫组化及RT-PCR检测RANKIJRANK均呈阳性表达。免疫组化RANKL平均光密度（AOD）值A组（0．168±0．017）、B组（0．147±0．009）明显低于C组（0．314±0．011）,差异有统计学意义（P〈0．05）;A组、B组之间比较无明显差异。RANKAOD值测定A组（0．172±0．015）、B组（0．193±0．045）明显低于C组（0．342±0．007）,差异有统计学意义（P〈0．05）;A组、B组之间比较无明显差异。RT-PCR检测RANKL相对量A组（0．575±0．143）、B组（0．543±0．174）明显低于C组（0．951±0．362）,差异有统计学意义（P〈0．05）;A组、B组之间比较无明显差异。RANK相对量A组（0．433±0．025）、B组（0．611±0．209）明显低于C组（0．871±0．211）,差异有统计学意义（P〈0．05）;A组、B组之间比较无明显差异。结论：中药补骨脂对人工关节置换术后假体周围骨溶解,假体无菌性松动具有抑制作用。     

三种手术入路显露男性后尿道的比较（英文）

目的：评价经耻骨上、耻骨下及会阴三种手术入路暴露尿道膜部的优劣。方法：对35具成年男性尸体标本解剖,测量并比较耻骨上缘中点（A）、耻骨下缘中点（B）及会阴部两坐骨结节连线中点（c）分男11到尿道球膜部连接处（D）、前列腺尖（E）及膀胱颈（F）的距离及相关角度;对另20具成年男性尸体标本分别经3种手术入路显露后尿道,标记可能损伤的组织器官并评分。结果：AD=（6．5±0．5）cm,BD=（2．2±0．5）cm,CD=（3．4±0．6）cm,其中BD〈CD〈AD（P〈0．05,SNK法）;AE=（6．6±0．5）cm,BE=（3．0±0．5）cm,CE=（4．4±0．7）cm,其中BE〈CE〈AE（P〈0．05,SNK法）;AF=（5．7±0．6）cm,BF=（4．5±0．5）cm,CF=（6．5±0．6）cm,其中BF〈AF〈CF（P〈0．05,SNK法）。各点连线所成角度中,ZEAD（仅。）=（9．3±2．0）。∠EBD（α2）=（17．4±3．8）°,ZECD（α3）=（9．2±1．6）°,其中α1与α2有显著性差异（P〈0．05,t=11．1）,α3与α2有显著性差异（P〈0．05,t=-12．1）,α1与α3无显著性差异（P〉O．05,t=-0．13）;∠FAE（β1）=（22．7±2．6）°,∠FBE（β2）=（32．9±6．4）°,∠FCE（β3）=（15．0±3．2）°,其中β2〉β1〉β3（P〈0．05,SNK法）。经耻骨上入路损伤评分为13分,经耻骨下为18分,经会阴为15分。结论：暴露从优到劣依次为经耻骨下、经耻骨上、经会阴;损伤从大到小依次为经耻骨下、经会阴、经耻骨上部分。     

下调RALA表达抑制人白血病K562细胞迁移和侵袭

目的 研究小干扰RNA（siRNA）抑制v-ral 白血病致病因子RALA基因表达对人白血病K562细胞迁移和侵袭的影响.方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的RALA siRNA转染体外培养的K562细胞,Real-time PCR检测细胞内RALA mRNA的表达水平;Western印迹检测细胞内RALA蛋白的表达水平;Boyden趋化小室实验检测细胞体外迁移和侵袭能力.结果与随机对照组相比,转染48 h后,RALA siRNA显著下调K562细胞内RALA mRNA和蛋白的表达（P＜0.05）.与随机对照组相比,转染RALA siRNA的K562细胞迁移和侵袭能力显著降低（P＜0.05）.结论 癌基因RALA在人白血病K562细胞迁移和侵袭过程中发挥重要作用,通过siRNA下调RALA的表达可抑制K562细胞迁移和侵袭能力.     

小梁切除术中应用丝裂霉素C对角膜内皮细胞的影响

目的：观察小梁切除术中应用丝裂霉素C（MMC）对角膜内皮细胞的影响。方法：收集2010年9月2011年5月在我院行小梁切除术的青光眼患者60例（78眼）,随机分为术中应用丝裂霉素c的36例（46眼）患者为A组,术中不用丝裂霉素c的24例（32眼）为B组。分别观察术前、术后1个月和术后3个月两组眼压（10P）、角膜内皮细胞的密度（co）、平均细胞面积（AVG）及细胞面积变异系数（cv）,分析其数量的改变及两组间的差异。结果：A组术前眼压为（35．4±13．7）mmHg,B组术前眼压为（32．5±13．5）mmHg差异无统计学意义（P〉0．05）,A组术后1个月及术后3个月眼压分别为（15．7±3．7）mmHg、（17．0±3．2）mmHg,均低于B组的（19．4±3．7）mmHg、（20．2±2．1）mmHg,差异有统计学意义（P〈0．05）。A组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为（2475±484）个／mm2、（2199±373）个／mm2、（2164±332）个／mm2;平均细胞面积分别为（431．4±67．6）μm2、（480．6±66．8）μm2、（463．8±46．2）μm2;细胞面积变异系数分别为（31．1±7．4）％、（34．4±6．3）％、（31．2±7．5）％;术后1个月及术后3个月各参数与术前比较,差异均有统计学意义（P〈0．05）。B组术前、术后1个月及术后3个月角膜内皮细胞密度分别为（2342±94）个／mm2、（2185＋215）个／mm2、（2074218）个／mm2;平均细胞面积分别为（453．9土94．8）μm2、（516.3±100．8）μm2、（499．81＋106．4）μm2;细胞面积变异系数分别为（30．2土3．0）％、（32．7±2．9）％、（31．4±4．3）％;除术后3个月角膜内皮细胞与术前比较有意义（P〈0．05）外,余参数术后1个月及术后3个月与术前比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。术后1个月A组的角膜内皮细胞丢失率为10．4％高于B组的6．1％,差异有统计学意义（P〈0．05）;术后3个月A组的角膜内皮细胞丢失率为11．1％高于B组的10．0％,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：小梁切除术中用丝裂霉素C的降压效果比不用丝裂霉素C的效果好,但短期内前者角膜内皮细胞的丢失率高于后者。     

铜绿假单胞菌生物膜悬液和藻酸盐对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

目的探讨铜绿假单胞菌（PA）生物膜和藻酸盐成分对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响。方法用具有生物膜成分的PA悬液分别感染肺部巨噬细胞缺乏小鼠和正常小鼠,比较组织中的细菌数量。提取小鼠腹腔巨噬细胞,藻酸盐作用后加入PA悬液,测定巨噬细胞对细菌的吞噬率。巨噬细胞经不同浓度的藻酸盐作用后,中性红法检测巨噬细胞吞噬能力。结果巨噬细胞缺乏组和对照组肺部组织的细菌数量分别为（4.16±3.36）×10^5/ml和（5.15±1.92）×10^5/ml,t=0.7211,P=0.483。生物膜细菌组的巨噬细胞吞噬率与对照组的吞噬率分别为（13.82±4.71）%和（42.73±11.00）%,Q=12.3231,P〈0.01。表明生物膜细菌组比对照组更能抵抗巨噬细胞的吞噬。加藻酸盐组的巨噬细胞吞噬率与对照组的吞噬率分别为（22.91±6.20）%和（42.73±11.00）%,Q=8.4465,P〈0.01。表明加藻酸盐组比对照组更能抵抗巨噬细胞的吞噬。当藻酸盐浓度为0、25、50、75、100、125、150μg/ml时,以吸光度A（540nm）值表示其巨噬细胞吞噬中性红的能力分别为：0.271±0.044、0.456±0.062、0.445±0.061、0.551±0.065、0.210±0.053、0.186±0.026、0.195±0.025。当藻酸盐≤75μg/ml时巨噬细胞吞噬中性红的能力增强,与0μg/ml组相比P〈0.05;当藻酸盐〉75μg/ml时巨噬细胞吞噬中性红的能力降低,与0μg/ml组相比P〈0.05。结论巨噬细胞有阻止PA入侵的作用。PA生物膜可以抑制巨噬细胞的吞噬。PA生物膜藻酸盐成分在〈75μg/ml时促进巨噬细胞的吞噬,而在较大剂量时抑制巨噬细胞的吞噬功能。     

BMP9对人肺腺癌AS49细胞侵袭、迁移的影响及机制的研究

BMP9属于TGF-β超家族的成员,参与多种细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭、转移过程。以人肺腺癌细胞A549作为目的细胞,采用腺病毒体外感染方式,外源性高表达BMP9。RT-PCR及Westernblot检测重组细胞中BMP9的表达,通过细胞划痕实验、Transwell侵袭实验检测AdBMP9细胞侵袭及迁移改变,RT-PCR及Westernblot检测感染BMP9腺病毒后IL-6的mRNA和蛋白表达：Westemblotg检测NPI3K／Akt信号通路中总Akt和磷酸化Akt蛋白的表达。结果显示：与对照组细胞相比,感染BMP9腺病毒后,A549中BMP9mRNA和蛋白表达明显升高;实验组划痕愈合率由对照的（85．4±2．11％与（86．5±3．4）％上升至（97．4±2．6）％（P〈0．05）;实验组穿膜细胞数由对照的（115．5±13．1）个与（123．3±14．9）个上升至（224．3±24．6）个（P〈0．05）;与对照组细胞相比,AdBMP9组IL-6的表达上调,磷酸化Akt蛋白表达上调。该研究表明,BMP9可能通过上调IL-6的表达,激活P13K／Akt信号通路,促进人肺腺癌A549的侵袭、迁移。     

Rab23对乳腺癌细胞生长增殖的抑制作用

目的：研究Rab23分子对乳腺癌细胞生长增殖的作用,探讨这种作用是否与乳腺癌ER＋/ER-依赖性相关。方法：选取ER＋乳腺癌细胞系Bcap-37、MCF-7和ER-乳腺癌细胞系MDA-MB-231为研究对象,采用质粒转染提高细胞中Rab23基因的表达和RNA干涉技术减少其表达,运用克隆形成实验、BrdU掺入实验、MTT实验等技术检测Rab23分子对乳腺癌细胞生长、增殖的影响。结果：克隆形成实验提示,三种乳腺癌细胞系Rab23质粒转染组的集落形成数量明显少于对照组,而Gli1质粒转染组集落形成数量较对照组明显增加;BrdU掺入实验提示,Rab23转染组的三种乳腺癌细胞BrdU掺入率与对照组有明显减少（P＆lt;0.05）,而Rab23干涉组的BrdU掺入率较对照组升高（P＆lt;0.05）;MTT实验显示Rab23转染组A490值最低,其次为对照组,而Rab23干涉组A490值最高（P＆lt;0.05）。结论：Rab23分子对乳腺癌细胞生长增殖有抑制作用,这种抑制作用可能与乳腺癌ER＋/ER-依赖性无相关性。     

呼吸道合胞病毒感染促进豚鼠产生气道高反应性及其机制研究

目的：通过检测气道反应性和M2受体功能,研究呼吸道合胞病毒（RSV）感染与哮喘发病的关系及机制。方法：34只豚鼠随机分为4组：Hep-2滴鼻＋生理盐水雾化（Hep-2／NS,A）组,RSV滴鼻＋生理盐水雾化（RSV／NS,B）组,Hep-2滴鼻＋鸡卵蛋白（OVA）雾化（Hep-2／OVA,C）组和RSV滴鼻＋OVA雾化（RSV／OVA,D）组,其中A和B纽各9只,C和D组各8只,以A组为对照组。21d通过电刺激迷走神经检测各组气道反应性和M2受体功能,行嗜酸性粒细胞计数以及病理学观察。结果：B组气道内压力（mmH2O）与A组无明显差异（P〉0．05）,给予匹罗卡品,IP下降幅度高于A组,但差别无显著性（P〉0．05）。C组IP明显高于A且（P〈0．05）,且给予匹罗卡品,IP下降幅度明显低于A组,差别有显著性（P〈0．05）。D组IP明显高于C组（P〈0．05）,给予匹罗卡品后IP下降幅度明显低于C组（P〈0．05）。结论：RSV感染可促进过敏原引起的M2R功能障碍,从而促进AHR发生。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对高脂饮食大鼠脂肪组织TNF-α表达的影响及意义

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对高脂饮食大鼠脂肪组织中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达的影响及其与胰岛素敏感性的相关性.方法 将30只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常饮食组（ND组,n=10）和高脂饮食组（HFD组,n=20）.喂养16w,当两组大鼠体质量出现显著差异后（P〈0.05）,将HFD组按随机区组原则分为单纯高脂组（HFD组,n=10）和EGCG干预组（HFD＋0.32%EGCG,EGCG组,n=10）.干预16w.留取血清及附睾周脂肪组织.检测每组大鼠空腹血糖（FBG）、胰岛素水平（FINS）及游离脂肪酸（FFAs）,并计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）;应用Real-time PCR及Western blot方法检测附睾周脂肪组织中TNF-α表达水平.结果 （1）与HFD组相比,EGCG组FINS水平显著下降[分别为（13.83±0.79）mIU/l vs.（31.71±3.61）mIU/l,P〈0.05];HOMA-IR值下降[分别为（3.36±0.31） vs.（7.59±0.99）,P〈0.05];FFAs值亦明显下降[分别为（0.38±0.08）mmol/l vs.（0.81±0.11）mmol/l,P〈0.05];三组大鼠FBG水平无明显统计学差异（P〉0.05）.（2）与ND组相比,HFD组脂肪组织中TNF-αmRNA水平显著升高[分别为（0.0033±0.00070）vs.（0.0010±0.00008）,P〈0.01];而EGCG组较HFD组则明显下降[分别为（0.0018±0.00037）vs.（0.0033±0.00070）,P〈0.05];同时,EGCG组TNF-α蛋白表达量低于HFD组[分别为（0.42±0.09）vs.（0.67±0.09）,P〈0.05];（3）EGCG组与ND组无明显差异（P〉0.05）.结论 EGCG改善高脂饮食大鼠胰岛素敏感性可能与减轻脂肪组织TNF-α介导的炎症状态相关.     

青年女性三阴性乳腺癌的临床病理学特征及其影响预后的多因素分析

目的:探讨青年(年龄≤35岁)女性三阴性乳腺癌(TNBC)和非三阴性乳腺癌(NTNBC)腋窝淋巴结转移(ALNM)患者的临床病理学特性与影响预后的危险因素。方法:回顾性分析2005年1月至2008年12月在青岛大学附属医院住院手术治疗并经临床病理学证实的136例青年女性乳腺癌患者的临床资料。根据免疫组化检测结果将其分为TNBC组(75例)和NTNBC组(61例);对比分析两组青年女性乳腺癌患者在年龄、婚姻、妊娠、生育、哺乳、乳腺癌家族史、病程、临床病理学分类、肿瘤组织学分级、肿瘤最大直径、ALNM、脏器转移及临床分期与生存期之间的相关性。5年总生存期(OS)和无瘤生存期(DFS)分析采用Ka-plan-Meier法。影响预后的因素采用Cox比例风险回归模型分析。结果:本组青年女性乳腺癌136例,占同期手术治疗乳腺癌1063例的12.79%;在218例(20.51%)TNBC患者中,青年女性TNBC患者75例(34.40%);青年女性NTNBC患者61例,占845例NTNBC患者的7.22%。在乳腺癌家族史(21.33%vs5.19%)和病程5个月(29.33%vs19.67%)等临床特征中,两组乳腺癌患者比较有统计学意义(P0.05)。在肿瘤最大直径5 cm(20.00%vs8.20%)、肿瘤组织学分级Ⅲ级(46.67%vs31.15%)、临床分期Ⅲ期(25.33%vs11.48%)、术后局部复发(17.33%vs11.48%)、ALNM(57.033%vs39.34%)以及脏器转移(16.00%vs4.92%)等临床病理学特征性指标中,两组乳腺癌患者比较存在明显差异(P0.05)。5年OS和DFS分别为76.47%和67.65%;TNBC 5年OS和DFS分别为69.33%和60.00%,NTNBC 5年OS和DFS分别为85.25%和77.05%。比较两组乳腺癌的5年OS及DFS存在明显差异(x2=4.374,P=0.030;x2=4.4684,P=0.035)。Cox回归分析结果表明:病程和乳腺癌家族史是TNBC患者的隐匿性和易感性因素;肿瘤最大直径、肿瘤组织学分级、术后局部复发、临床分期、ALNM和脏器转移等6项指标是影响青年女性TNBC患者预后的危险因素(x2=6.684~5.058,P=0.048~0.025)。结论:青年女性TNBC患者具有乳腺癌家族倾向、病情隐匿、临床分期晚、增殖侵袭性强、复发转移率高、预后较差的临床病理学特征,也是影响预后的危险因素。