生淀粉糖化酶催化位点氨基酸及酶合成调控的初步研究

通过对Rhizopus OR-1UVN菌种所产生淀粉糖化酶在不同底物不同缓冲溶液条件下酶最适pH的测定,推测出该生淀粉糖化酶活力中心催化位点氨基酸是天冬氨酸(Asp)和谷氨酸(Glu)。实验证明5～50mg/mL浓度葡萄糖对生淀粉糖化酶没有抑制作用。分别以浓度<5mg/mL葡萄糖和淀粉为碳源的培养基进行不同碳源发酵实验,发现以淀粉为碳源的培养基Ⅰ发酵15h开始产生淀粉糖化酶,以葡萄糖为碳源的培养基Ⅱ发酵35h开始产酶(葡萄糖浓度<8mg/mL),而且前者菌体较后者少,由此可知葡萄糖对产酶有阻遏作用。实验还发现解阻遏熟淀粉糖化酶的葡萄糖浓度(15mg/mL)比生淀粉糖化酶的要高。由于葡萄糖的阻遏作用不发生在翻译水平,而发生在转录水平上,而且生淀粉糖化酶(G1)与熟淀粉糖化酶(G2)来自同一条DNA链,可以推测存在mRNA的拼接。通过以生淀粉为碳源的比较实验,发现生淀粉对生淀粉糖化酶形成的诱导作用可能主要是通过mRNA拼接的调节来实现的。     

融合淀粉酶AmyP-Clo对大米生淀粉的高效降解

【目的】获得能高效降解大米生淀粉的α-淀粉酶。【方法】将来源Clostridium butyricum T-7的α-淀粉酶的淀粉结合结构域与能快速偏好性降解大米生淀粉的α-淀粉酶Amy P的催化结构域融合重组表达。【结果】融合蛋白Amy P-Clo保留了野生型Amy P催化优势的基础上,对大米生淀粉的比活为(373.9±8.4)U/mg,4 h内对5%大米生淀粉的最终降解率为(42.7±1.1)%,对大米生淀粉的最高结合率为(71.1±1.6)%,这些数据相比Amy P分别提高了3.1、2.8和1.3倍。【结论】融合蛋白Amy P-Clo能高效降解生大米淀粉,是一个具有优良应用价值的酶。     

不同采样策略对细距堇菜遗传多样性估算的影响

采用水平淀粉凝胶电泳技术对分布于北京金山、檀枯寺、香山樱桃沟的细距堇菜（Ｖｉｏｌａ ｔｅｎｕｉｃｏｒｎｉｓ Ｗ．Ｂｅｃｋ．）的遗传变异和群体分化进行了初步研究。对８个酶系统１１个等位酶位点的检测表明,该种在上述地区的遗传变异水平明显高于多年生草本的平均值,多成位点百分率Ｐ＝７２．７％,等位基因平均数Ａ＝２．４,平均期望杂合度Ｈｅ＝０．２４３;群体间的遗传分化略小于多年生草本的平均值,杂和性基因多样     

葡萄糖异构酶的结构特征及其工业（高产）用酶发掘

葡萄糖异构酶（glucose isomerase,GIase;EC 5.3.1.18）是利用淀粉生产果葡糖浆的关键用酶。筛选和构建适合大规模工业生产的 GIase 一直是研究的热点。本文首先综述葡萄异构酶的基本性质与序列结构和功能特性,在分析比对高生产性能GIase的序列特征和空间结构特征的基础上,发现位于该组GIase 的“催化口袋”上存在12个特有保守氨基酸残基位点,且有5个位点的残基含两性（亲水和疏水）的环状结构。由此提出了“高性能葡萄异构酶存在特有保守位点”的推断假设,并在结合自身实验结果和他人的研究,对基于特有保守位点发掘高生产性能GIase的可行性进行了进一步验证和探讨。该研究思路对高性能商业化GIase的发掘及对其它GIase的性能改造具有重要的参考价值。     

籼稻和粳稻中蜡质基因座位上微卫星标记的多态性及其与直链淀粉含 …

稻米直链淀粉是在由蜡质基因Ｗｘ编码的颗粒结合淀粉合成酶（ＧＢＳＳ）的催化下合成的,最近,在Ｗｘ基因的区段内发现了一段多态性微卫星序列（ＣＴ）ｎ,对７４个非糯籼稻和粳稻材料的（ＣＴ）ｎ多态性进行了分析,并探讨了其与直链淀粉含量之间的关系,在７４个品种（系）中共发现７种（ＣＴ）ｎ片段（Ｗｘ等位基因）邓（ＣＴ）８,（ＣＴ）１０,（ＣＴ）１１,（ＣＴ）１６,（ＣＴ）１７,（ＣＴ）１８,（ＣＴ）１９,在籼粳     

具有转糖基活性的糖苷酶的分子进化

糖苷酶是糖类合成的重要催化剂,但其催化的反应为可逆反应,产物产量不高。近年来,通过糖苷酶催化位点氨基酸突变、其他位点氨基酸突变、随机突变、C端缺失突变和DNA混编（DNA shuffling）等方法对糖苷酶进行分子进化．使得糖苷酶合成糖类的产量大幅度提高,同时也优化了糖苷酶催化糖类合成时的其他性质,如区域选择性和温度耐受性等。     

海洋环境来源的淀粉酶AmyP对生玉米 淀粉的降解特性

来自海洋宏基因组文库的 α-淀粉酶（AmyP）属于最新建立的糖苷水解酶亚家族GH13₃7。AmyP 是一个生淀粉降解酶,能有效降解玉米生淀粉。在最适反应条件 pH 7.5和 40 °C 下,生玉米淀粉的比活达到 39.6 ± 1.4 U/mg。酶解反应动力学显示 AmyP 可以非常快速的降解生玉米淀粉。对 1%的生玉米淀粉仅需要 30 min;4%和 8%的生玉米淀粉只需 3 h。DTT 可以显著提高 AmyP 对生玉米淀粉的降解活性,1% DTT 促使活性增加 1倍。根据电镜观察和产物分析,认为 AmyP 是以内腐蚀的模式降解生玉米淀粉颗粒,释放出葡萄糖、麦芽糖和麦芽三糖作为终产物。     

优质稻米‘青香软粳’低直链淀粉含量形成分子机制的初步研究

Waxy（Wx）基因在调控直链淀粉含量形成过程中起着重要的作用,是稻米蒸煮食味品质的一个关键决定因素。在本项研究中,我们以直链淀粉含量为8.7%和10.2%的优质稻品种‘青香软粳’和‘南粳46’为主要研究对象,初步分析并探讨了这两个优质稻品种稻米低直链淀粉形成的分子调控机理。结果显示,虽然都为Wx-II型粳稻品种,‘南粳46’的Wx基因在启动子1773位置存在AA/CT的变异,‘南粳46’和‘青香软粳’的Wx基因在启动子＋693位置具有G/A位点多态性。转录水平分析表明,在‘南粳46’和‘青香软粳’稻米发育过程中,Wx基因的表达模式有较大的差异,可能与其启动子序列的多态性相关,AA/CT变异处于Wx基因的转录调控区。Wx基因启动子后＋693位点的多态性与已报道Wxmq多态性位点之一相同,引起Arg158/His158的变异;生物信息学软件分析表明,该位点处于底物进入Wx蛋白催化中心的袋口上,Arg158/His158位点的变异可能影响到底物进入Wx蛋白催化活性中心的速率,从而影响稻米直链淀粉的合成过程和含量。文章丰富了Wx基因多态性的研究,为进一步验证其核苷酸变异与稻米直链淀粉含量的相关性奠定了基础。     

中国对虾（Penaeus chinensis）4个种群的同工酶遗传变异

采用水平淀粉凝胶电泳技术分析了中国对虾（Penaeuschinensis）黄渤海沿岸种群（YP）、朝鲜半岛西海岸种群（KP）和2个养殖种群（CP1和CP2）的同工酶遗传变异水平。每个种群随机选取50尾中国对虾进行同工酶检测。在所分析的12种同工酶编码的20个基因位点中,有4个是多态位点。4个种群的多态位点比例（P0.99）分别为15%、20%、10%和20%。种群平均杂合度（观测值）（Ho）分别为0.014±0.007、0.020±0.010、0.010±0.007和0.033±0.017。4个种群的位点有效等位基因数（Ne）分别为1.015±0.008、1.023±0.011、1.011±0.007和1.042±0.022。杂合子平衡偏离指数（D）分别为+0.037、-0.030、-0.098和-0.030。2个地理种群（YP和KP）的遗传相似性系数（I）和遗传距离（D     

中国人群葡萄糖磷酸变位酶基因频率测定及PGM18-1表型检出

葡萄搪磷酸变位酶(phosphoglucomutase, PGM）是糖元代谢中十分重要的酶,它可逆地 催化下列反应：a-D-葡萄搪-1一磷酸二兰生全 G-1,6-2P a-D-葡萄糖-6-磷酸盐。该酶是由定位于1,4, 6染色单体上PGM PGM PGM,位点上的 等位基因所控制。PGM 广泛分布于体内各种 组织中,其中80-90多为PGM,的基因产物。 红细胞中PGM,编码的同工酶活性与PGM, 活性各占50多,在红细胞中检测不出PG嶙基 因的活性产物。 1964年Spencer等人(47先后证明PGM：具 有多态性。采用淀粉凝胶法检测出PGM, 1, PGM, 2-1和PGM, 2三种遗传表型,它们是 由第1对染色体上PGM,位点上的两个常见 的等位基因PGMi和PGM,所决定。高分辨 的等电聚焦电泳可检出PG城有10种亚型, 是由PGM,位点上的4个等位基因PGMi十、 PGM犷、PG叫十和PG域一所编码121。本文报 告我们应用国产淀粉,采用混合淀粉凝胶方法 测定中国（北京地区）人群的基因频率分布,同 时报道对PGM, 8-1表型的检出。