介绍一种自制的超薄切片机液槽水面调节装置

在作电子显微镜超薄切片时,液槽内水位调节常常会遇到麻烦。槽液过多时,往往会从刀口部位溢出,沾湿了标本块面,致使切片无法进行。这样只能用滤纸吸干溢出的槽液,调节液槽水位。如果污染了刀口,就不得不更换新刀,重新调整块面与刀口距离,才能续继切片;若液槽内水位过低,又不能沾湿刀口时,     

利用恒冷切片机制作肾穿石蜡切片的简易方法

我们在日常工作中,经常会接收到肾穿标本,由于病理诊断的特殊要求,组织切片的厚度只有达到2一3微米才能满足诊断的需要,而且标本取材不易,数量极其有限,肾组织除了要经过特殊慢脱水处理外,在切片之前,蜡块必须要在冰箱里冷却。在切片过程中,还需冰块冷却．在达到适宜温度下,才能切成一张完整切片。过去这种方法,受外界环境温度影响很大．温度的高低都直接影响切片的薄厚,质量和数量,既麻烦又费时效果不理想。为了弥补这一缺陷,我们改用恒冷切片机切制肾穿石蜡切片．根据切片机能随意调节温度而可恒定的特点,首先把蜡块修切整…     

用石蜡包埋制作全眼球切片的改进

制作全眼球切片标本的传统方法是用火棉胶包埋,虽能使眼球切片保持完整,而不易制作较薄的切片,整个制作过程需要的时间也比较长。用石蜡包埋制作全眼球切片的方法已有过报道。由于眼球的结构与致密度差异大,各部位软硬悬殊,要做出比较完美的切片标本是不大容易。为了进一步缩短制片时间,减少脱水程序,防止切片易碎,制作出好切易展的切片,对石蜡包埋制作全眼球切片作了一些改进,方法如下:     

常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片的制作

目的探索一种结合常规染色与特殊染色的多种肌组织混合切片的制作方法。方法取实验动物狗的平滑肌、心肌、骨骼肌。所有组织均采取单一包埋制作蜡块。另取心肌组织块,制作显示心肌闰盘的特殊块染标本的蜡块。将四种蜡块切片的蜡带进行组合粘片,同时粘在一张载玻片上。对除心肌闰盘外的三种肌组织切片进行苏木素伊红染色。再将所有切片浸入二甲苯,最后共同封片。结果获得常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。可在一张混合切片上分别观察到平滑肌、心肌、骨骼肌、心肌闰盘四种结构。不同标本的形态结构保存完好,对比非常清晰。结论采取单一包埋与不同蜡带的组合粘片法,过程简单,操作容易,适合制作常规染色与特殊染色相结合的多种肌组织混合切片。     

怎样使磨刀石磨平

切片刀是显微切片中非常重要的工具。如何保持切片刀的锋利,除了加强对切片刀的保护和熟练的磨刀技术外,磨刀石的平滑与否也是非常重要的。一般市售的磨刀石外观上平滑无疵,但加上滑润剂就显出高低不平了,如果用这样的磨刀石磨切片刀,其刀刃不但不会锋利反而会把刀口磨成弧线,影响切片。所以新磨刀石必须经过磨平加工。方法是将金刚砂(研磨粉,分800、1000、1400号     

介绍一种“贴附剂”

在光镜下观察的生物医学标本中,大多数的标本都要经过制片,在制片中应用较广泛的就是切片标本。而各种组织、器官经切片后又必须把它附在载玻片上,从贴附切片这一问题上,看来是个较小的环节,若标本贴不牢就会脱落,就不能保证实验和观察的顺利进行。实验室里常用的贴附剂有蛋白甘油(过滤后的蛋清     

形态学实验教学中正常与病理混合标本对照法的应用

石蜡切片是形态学实验教学微观部分的主要手段,传统的石蜡切片是在每块载玻片上仅有一个组织切片。为了更好地实现形态学实验课程的融合,不断更新实验内容,我们创新实验课内容,采用混合切片对照法,即在同一载玻片上放置同种组织器官的正常和异常组织混合切片标本块,其中一张为正常组织切片作为对照,其它一张或若干张标本则为同一器官相对应的异常组织切片。混合切片标本在实验教学的优势是,同一张载玻片上观察多个标本,既可节省实验操作时间和操作环节,还可以锻炼学生动手操作和熟练使用显微镜的技能。     

改装FOK型超微切片机

FOK型超微切片机(图1),适合于切动植物组织的切片,所切之厚薄介于0.05-5微米之间,原机器是使用刮脸刀片作为薄切的刀。有一个固定刀片的台于,刀片按装好;由带有齿轮之轴向前推动,轴之前面有上下跳动之杠杆,调节切片之厚薄,在杠杆前端有按装包埋组织聚合物的固定装置,用手摇动机柄时,螺旋轴问前转动,杠杆上下跳动便可进行薄切,薄切的同时还可以调节厚度。这种机器因为按装的刀片太厚,刀锋又不锐利,一般很难切出0.05微米厚的薄切片,并     

周末组织处理程序的改进

目的探讨周末切取组织处理程序的改进方法。方法收集40例乳腺癌根治术标本,每例连续取3块组织,随机分为日常程序处理组(常规组)、延时程序处理组(延时组)和改进程序处理组(改进组),比较3组切片裂痕或脱片的发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测质量、荧光原位杂交实验结果。结果切片裂痕或脱片的发生率在延时组明显高于常规组,改良组与常规组基本相同;改良组与常规组切片核质对比清晰,红蓝适度,延时组稍不清晰,组织结构稍模糊;免疫组织化学检测阳性率在3组基本相同,但常规组和改良组切片染色更强,背景清晰,而延时组切片染色强度较弱、背景欠清晰;FISH结果阳性率在常规组和改良组相同,而延时组显著低于常规组和改良组。结论改进的周末切取组织处理程序固定、透明、浸蜡3个环节与标准程序相同,而将多余的时间分配给脱水环节,组织脱水彻底,有利于后期制片,特别是有利于后期的HE染色、免疫组织化学检测或FISH检测,值得推荐。     

肺隐球菌病标本在六胺银染色中的最佳温育时间

目的探索肺隐球菌在六胺银染色中的最适当温育时间,以期获得最佳染色效果,提高病理标本肺隐球菌病的诊断率。方法收集厦门大学附属第一医院病理科2017年1月—2017年12月确诊的30例肺隐球菌感染病例,每例病例选取最具代表意义的一个蜡块连续切片3张,不同蜡块为区组因素,将每个蜡块切取的3张切片简单随机化分为3组,每组1张,通过区组随机化将90张切片随机分为A、B、C 3组,A组切片在六胺银染液步骤中采用水温箱60℃温育20～25min,B组切片在六胺银染液中温育30～35min,C组切片在六胺银染液中温育40～50min。以10分制对90张六胺银染色片进行评分,比较3组切片得分情况、显微镜下的染色效果与诊断准确率。结果 B组切片镜下显示:隐球菌染成空心黑色,细胞核呈蓝色,周围肺纤维组织呈淡棕色至棕色,隐球菌与周围肺纤维组织染色对比清晰,染色效果显著高于A组与C组。结论在六胺银染色中,采用六胺银染液在水温箱60℃温育30～35min,病理切片六胺银染色评分结果得分更高、六胺银染色效果更好、肺隐球菌病的诊断准确率更高。     

三种不同脂肪染色方法的比较

目的探讨碳蜡(聚乙二醇)包埋技术、冰冻切片及饿酸染色在脂肪染色中的应用,综合比较几种方法的优缺点,以便在病理工作及科研工作中能找到更适合的脂肪染色方法。方法取新鲜脂肪组织及肝组织,每份标本各取3块组织,分为A、B、C三组:A组和B组标本分别进行碳蜡包埋切片和常规冰冻切片,油红O法染色;C组以饿酸浸染组织块后进行石蜡包埋切片及眦复染。结果 A组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;B组切片脂肪滴呈红色,细胞核呈蓝色;C组切片脂肪滴呈黑色。结论饿酸染色和碳蜡包埋技术在脂肪染色中,具有冰冻切片和石蜡切片的优点,弥补了常规冰冻切片脂肪染色的缺点和局限性,在病理检验及科研中具有一定应用价值。     

微波修复抗原和微波酶消化法同时应用在P16和CyclinD1免疫组织化学方法中的体会

Ｐ１６蛋白和ＣｙｃｌｉｎＤ１是两种常用的抗细胞周期调控因子抗体,Ｐ１６是多种肿瘤抑制基因的表达产物,ＣｙｃｌｉｎＤ１是一种癌基因产物,在肿瘤病理学研究中选用Ｐ１６和ＣｙｃｌｉｎＤ１等作为相反的抗体是十分有意义的［１］。为提高这两种抗体在石蜡包埋切片中的阳性检出率,我们在实验操作中同时应用了微波抗原修复法和微波胰蛋白酶消化法,获得了较为满意的结果,现报道如下：１　材料和方法１１　材料：选取本科手术切除大肠腺癌标本存档蜡块４０例,每例均切６张４μｍ切片备用,切片裱于涂有防脱片剂的干净载玻片上。１…     

淋巴组织H.E染色"发灰"现象的纠正方法

在常规病理制片技术工作中 ,经常发现淋巴组织 (如淋巴结、鼻咽部组织及扁桃体等 )由于处理不当 ,造成切片染色后组织中间出现发灰现象 ,即镜下核浆染色模糊不清或组织成片不着色。这样将给临床病理诊断带来很大困难。为此 ,我们经大量实验 ,对原组织蜡块再切片后采用下述方法进行处理 ,收到了较好的染色效果。材料和方法1.标本来源 :选取 2 5例 H.E染色切片发灰的淋巴组织原蜡块再进行切片 ,切片厚 5μm。2 .切片的处理方法 :(1)将原蜡块所制切片浸入二甲苯 、 脱蜡各 5 min;(2 )无水酒精 、 浸洗各 2 min;(2 )用无水酒精乙醚等量 (1∶…     

冰冻徒手切片

在用显微镜观察植物器官的解剖结构时 ,徒手切片的方法是制作玻片标本常用的最简便的方法。在对幼小植物根、海带带片、蘑菇菌褶、木耳子实体、苔藓植物、又薄又嫩的叶片等难于直接拿在手中的标本进行徒手切片时 ,通常利用萝卜、马铃薯块茎或泡沫塑料等作夹持物 ,将要切的材料夹在其中 ,进行切片。由于这些材料幼嫩软弱 ,有的容易夹坏 ,较难切薄。通过实验发现利用冰冻方法进行徒手切片效果很好。方法是 :将较厚的叶片、木耳子实体、蘑菇、海带带片、较粗的幼根等切成可以手拿方便的条块 ;将较细小的材料如苔藓植物捆成束 ;将较薄的几个叶片…     

改良固定方式以提高淋巴瘤组织的制片质量

目的通过改良两种时段接收淋巴结的固定方式,提高淋巴瘤诊断的制片质量。方法随机收集上午10时左右及下午4时左右接收的132例淋巴结标本,每例各切取2块组织,上午切取的组织随机分为2组,分别行短时间固定处理程序(上午短时间组)和延长固定时间处理程序(上午长时间组)进行固定,下午切取的组织也随机分为2组,也分别行短时间固定处理程序(下午短时间组)和延长固定时间处理程序(下午长时间组)进行固定。回顾性分析并筛选出病理诊断为弥漫大B细胞淋巴瘤的58例,其中包括上午10时左右接收的26例及下午4时左右接收的32例。脱水处理后的4组组织进行包埋后,按常规进行切片、HE染色、CD79a免疫组织化学检测、C-MYC双色分离荧光原位杂交实验(fluorescence in situ hybridization, FISH)。通过比较4组切片出现肉眼可见裂隙、皱折及破碎不全发生率、HE染色质量、免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率,探讨最佳的淋巴结固定方法。结果上午长时间组制片CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率均不如上午短时间组,切片不完整发生率及HE染色质量与上午短时间组无明显差异;下午短时间组制片切片不完整发生率高且HE染色质量、CD79a免疫组织化学检测阳性率、荧光原位杂交成功率明显不如上午短时间组;下午长时间组切片以上指标均与上午短时间组无明显差异。结论上午接收的淋巴结标本应剖开于当天进行隔夜常规脱水,下午接收的淋巴结标本必须剖开后行延长固定程序进行脱水,随后得到的淋巴结组织在切片完整性、HE染色、免疫组织化学检测及FISH检测中能更好地提高淋巴瘤诊断的制片质量。     

昆虫器官横切标本的简易制作法——徒手石蜡切片法

<正> 为了研究昆虫的形态,掌握昆虫有关器官的详细构造、器官的位置及相互关系,我们常常将一些器官横切做成玻片标本后进行观察。用切片机来切制这类标本,一则工序复杂需要数天才能完成,二则切片机切制的标本太薄,立体感不强,不易形成整体的组合概念。目前有的农业中学、技校及基层农业科研单位没有切片机。为解决上述矛盾,我们采用徒手石蜡切片     

一种重包埋方法的应用

目前普遍使用的简单定向方法,是先在包埋对使样品定向,以后再将聚合好的包埋块切一张大面积的1—2微米的厚切片,经光学显微镜检查找出所需要的部位,做好标记,然后对照厚切片修整样品再作超薄切片。Grimley 曾报道一种简单的重包埋方法,将包埋的组织块简单地切成一张1—8微米的厚片,贴在盖玻片上染色后,在光学显微镜下找出需要进行电镜观察的部位,标上记     

乳腺穿刺组织冰冻快速制片及注意事项

乳腺肿瘤是女性最常见的疾病之一,其早期诊断和早期治疗对预后至关重要。目前,对于乳腺肿块,临床常采用细针穿刺获得组织,送病理科进行快速冰冻切片确诊。冰冻切片质量的好坏直接决定诊断的准确率,但由于乳腺穿刺标本组织小,脂肪、纤维成分较多,给制片和诊断带来一定的困难,常出现切片不全、组织切完、脱片、染色不均匀、冰晶等现象,为解决上述问题,近年来,我们经过500多例乳腺穿刺标本的实践摸索,获得了一些经验,现介绍如下：     

乳腺恶性肿瘤标本固定方法比较

目的 通过对比3种乳腺根治术标本的取材方式和固定时间,摸索制备高质量乳腺根治术标本切片的最佳固定方法。方法 随机收集上午、下午接收乳腺根治术标本50例,上午每例标本各取一块肿物、腺体组织和淋巴结组织,固定9 h后放入脱水机;下午每例肿物、腺体和淋巴结各取2块,1块固定4 h后放入脱水机,另1块固定28 h后放入脱水机。各组织常规脱水、石蜡包埋、切片后,进行HE染色、E-cadherin酶标法免疫组织化学检测和Her-2荧光原位杂交染色。比较3种固定方法的制片质量,探讨乳腺根治术标本最佳固定方法。结果 固定4 h即开始脱水的肿物和腺体组织的切片不完整发生率显著高于固定9 h和28 h;固定4h和9h的淋巴结切片不完整发生率高于固定28 h;固定4 h、9 h、28 h肿物、腺体HE染色质量无明显差异,但固定9 h与28 h的肿物、腺体E-Cadherin酶标法免疫组织化学正常率高于固定4 h,固定28h淋巴结染色质量高于固定4 h与9 h;固定4 h肿物Her-2荧光原位杂交成功率低于固定9 h与28 h。结论 乳腺根治术标本的肿物与腺体固定9 h后即可放入脱水机,淋巴结则需延长固定时间...     

乙二醇甲基丙烯酸包埋技术用于蜱切片的观察

<正> 为了研究节肢动物的组织结构以及某种药物或微生物在节肢动物各器官中的定位等,常常需要通过组织切片进行观察。由于节肢动物有几丁质的外骨骼,它既坚硬又不溶于水也不溶于有机溶剂以及煮沸的硷类和稀的无机酸类等溶液中。用一般的石蜡包埋切片时,几丁质容易折断,不易切完整,需先经透明软化剂(Diaphanol)处理,手续较烦琐,效果也不理想。60年代以来,国外逐步采用冰冻切片配合萤光抗体染色的方法,研究了蜱体内立克次体、Powassan病毒以及蚊体内乙型脑炎病毒等的增殖情况。冰冻切片的方法固然快而简便,但几丁质也影响切片质量,而且用于带毒的标本时,污染较严重,需在无菌室内操作,要求的条件较严格。1965年Rohde报告用甲基丙烯酸乙醋和丁酯的混合物做为包埋剂包埋节肢动物后,Ruddell(1967)、Kuo(1969)等