分子生物学鉴定为淋病奈瑟氏菌表型的多态性

３０株ＰＣＲ鉴定为淋球菌的变异株，与人工诱导的淋球菌Ｌ型相似，其形态为Ｇ＾＋和Ｇ＾－膨大双球菌或偶呈葡萄状，有细胞壁缺损可滤过性。触酶试验阳性、葡萄糖和氧化酶试验转阴。形态及生化有与金葡菌相似处，借助ＤＮＡ酶和卵磷脂酶试验初步定鉴。     

HGV广东株和香港株NS5区部分基因的克隆及序列分析

采用ＨＧＶＮＳ５特异的２对引物,对两个香港株和一个广东株ＨＧＶＲＮＡ进行逆转录套式ＰＣＲ扩增,ＰＣＲ产物克隆入ｐＵＣ１９,重组质粒转化ＤＨ５α和ＪＭ１０９菌株。ＰＣＲ和酶切法鉴定阳性克隆,双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列并进行同源性分析。结果发现核苷酸变异呈散在分布,三株间核苷酸和氨基酸序列同源性分别为９３．３％～９４％及９７％～９９．２％,与已报道的中国株（ＣＮ）相比,则同源性分别为９０％～９１．２％和９４％～９６．３％,与美国株（ＰＮＦ２１６１及Ｒ１０２９１）相比,为８７．１％～８９．５％和９５．２％～９７％,而与西非株（ＧＢＶＣ）相比,则达９１．４％～９３．８％和９７％～９７．９％。提示ＨＧＶＮＳ５区核苷酸和氨基酸序列相对保守,不同ＨＧＶ株存在一定的地区差异。     

聚合酶链反应快速检测胃组织和唾液中的幽门螺杆菌

针对幽门螺杆菌（ＨＰ）尿素酶Ａ基因设计一对引物进行聚合酶链反应,检测１株ＨＰ标准株和７株临床分离株均阳性,而４株其它肠道菌均阴性,特异性１００％。１０倍系列稀释试验表明敏感性达到１００ｐｇＤＮＡ水平。从３５例胃镜检查者取幽门旁组织块进行快速和常规尿素酶试验,细菌培养及ＰＣＲ检测,１５例ＨＰ阳性者ＰＣＲ检测也为阳性,其中７例阳性者有３例唾液ＰＣＲ检测为阳性,表明ＨＰ确存在于口腔中。本研究采用直接热裂解法处理临床标本,取其粗提物行ＰＣＲ,免除复杂的酚一氟仿抽提步骤,该法简便快速,且损失小,成功率高,在临床实验诊断中有推广价值。     

PCR检测淋球菌的探讨

多聚酶链反应（ＰＣＲ）具有灵敏度高,特异性强,快速高效的特点,在病原微生物检测领域有广阔的前景。本文对４０８例疑似淋病患者的泌尿生殖道分泌物作了ＰＣＲ检测淋球菌的探索,结果１７０例阳性,占４１．７％,而培养阳性（２１．６％）,ＰＣＲ法显著高于培养法（Ｐ＜０．０１）。     

PCR技术在三种男性性病检测中的应用

本文用聚合酶链反应ＰＣＲ技术对３６９例男性泌尿生殖道炎患者进行淋球菌（ＮＧ）,解脲支原体（ＭＰＵ）和沙眼衣原体（ＣＴ）的检测,阳性率分别为３５．５％,３０．５％和１１．６％,同时,我们对高度怀疑为淋病患者７４例及６３例非淋病性尿道炎患者进行细菌培养和ＰＣＲ的同时检测,淋病患者细菌培养阳性检测率为３１．１％,与９２-９４年间所进行的培养检测结果基本一致,均低于ＰＣＲ检测结果（７７．１％）,解脲支原体培养阳性率为１７．５％,亦明显低于ＰＣＲ结果（３０．５％）,此外,对同一患者进行ＮＧ＋ＭＰＵ和ＭＰＵ＋ＣＴＰＣＲ检测,发现约４０％的淋病患者并发ＭＰＵ感染,而ＭＰＵ和ＣＴ复合感染亦在１０％左右。上述结果说明ＰＣＲ方法在性病病原体的诊断中比细菌培养法更为可靠,特别是在多种病原体复合感染情况下更为有效。     

亚洲棉GAE6—3A上游序列的分离及其在烟草中的表达

根据Ｅ６基因保守域设计引物,ＰＣＲ扩增出亚洲棉（Ｇａｓｓｙｐｉｕｍ ａｒｂｏｒｅｕｍ Ｌ．）ＧＡＥ６基因长约４００ｂｐ片段,序列分析表明该片段与海棉（Ｇ．ｂａｒｇｂａｄｅｎｓｅ）Ｅ６基因同源性达９６．８％。进一步合成２个反向引物协助进行ＰＣＲ－９６孔板筛库分离到亚洲板棉ＧＡＥ６－３Ａ克隆。酶切鉴定其插入片段长约８．０ｋｂ,序列测定及分析结果表明其上游和约１．５ｋｂ,将ＧＡＥ６－３Ａ上游序列克 含有     

猪圆环病毒2型ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建

根据ＧｅｎＢａｎｋ中猪圆环病毒２型（ＰＣＶ－２）ＯＲＦ２基因序列,设计一　对引物,应用ＰＣＲ从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症（ＰＭＷＳ）的死亡仔猪组织病料中扩增出ＯＲＦ　２全基因（７０２ｂｐ）。将此片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ　ｅａｓｙ载体,筛选获得重组质粒ｐＴＯＲＦ２,并对此质　粒中的插入序列进行了测序分析,结果表明本试验克隆的ＯＲＦ２与美国ＰＣＶ－２分离株ＡＦ２６４０３９　的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到１００％,与其他ＰＣＶ－２毒株同源性分别为９２．３％～９８．　６％和　９２．３％～９６．６％。重组质粒ｐＴＯＲＦ２经　Ｂａｍ　Ｈ　Ｉ、Ｅｃｏ　Ｒ　Ｖ双酶切,回收ＯＲＦ２基因,转　移入真　核表达载体ｐＳｅｃＴａｇ２／ＨｙｇｒｏＢ的相应酶切位点之间,构建成重组质粒ｐＳｅｃＴａｇＯＲＦ２。此重组表　达载体的构建成功为进一步研究ＯＲＦ２编码蛋白的生物学活性及建立ＰＣＶ诊断试剂盒打下基础。     

沿海地区淋球菌,沙眼衣原体及解脲支原休流行病帝分析

目的 了解中山市性传播疾病（ＳＴＤ）高危人群中淋球菌（ＮＧ）、沙眼衣原体（ＣＴ）及解脲支原体（ＵＵ）的感染状况,采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测１４５２例ＳＴＤ患者的尿道（宫颈）拭子标本。结果３种病原体的总检出率为２５．９２,其中ＮＧ１３．７０％、ＣＴ３１．３４％、ＵＵ３２．７１％,混合感染率以ＣＴ最高（８２．８１％）,ＵＵ次之（７５．７８％）,ＮＧ为４９．２２％。非淋病性尿道炎（ＮＧＵ）、淋病性尿     

利用PCR方法鉴定甲醇酵母转化子的表型

本文以含外源基因的甲醇酵母表达载体ｐＰＩＣ９／Ｅ２Ｆ－１－ＤＢ质粒ＤＮＡ电转化甲醇酵母ＧＳ１１５,小规模抽提所得转化子的总ＤＮＡ,并以其为模板,以乙醇氧化酶（ＡＯＸ１）５’端序列和３’端的ＴＴ序列为引物,进行ＰＣＲ反应。ＰＣＲ产物走０．８％Ａｇａｒｏｓｅ电泳,通过对ＰＣＲ产物的电泳带型分析,鉴定出甲醇酵母转化子的表型,即Ｍｕｔ＾＋或Ｍｕｔ＾ｓ。这一鉴定结果为转化子的诱导表达产物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图     

PCR技术检测性病病原体在男性泌尿生殖系感染中的意义

用ＰＣＲ技术对我院５８８例男性生殖泌尿系感染患者进行淋病Ｋ球菌（ＮＧＦ）沙眼衣原体（ＣＴ）及解脲支原体（ＵＵ）检测,结果淋球菌感染者７５例（１２．７６％）;沙眼衣原体感染者８４例（１４．２９％）;解脲支原体感染者５１例（８．６７％）。淋球菌与沙眼衣原体混和感染者２５例（４．２５％）;淋球菌与解脲支原体混合感染者９例（１．５３％）;沙眼支原体与解脲支原体混合感染者１２例（２．０４％）;未发现有三种病原体同时感染者,并对ＰＣＲ检测性病病原体的意义及性病病原体传播趋势进行讨论。     

葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ外壳蛋白基因的克隆

根据美国报道的葡萄卷叶伴随病毒Ⅲ（ＣＬＲａＶ－３）ＣＰ基因序列,设计并合成一对引物,用ＩＣ－ＲＴ－ＰＣＲ对ＧＬＲａＶ－３进行检测,琼脂糖凝胶电泳表明其大小与预计相符。将其ＣＰ基因克隆到ｐＧＥＭ－３ｚｆ（＋）中,经双酶切和序列分析表明所克隆的是ＧＬＲａＶ－３ ＣＰ基因,它与美国分离物相应序列同源性为９４．１％。     

广州地区急性散发性HEV毒株基因特征和生物学性状的研究

利用ＲＴ－ＰＣＲ技术对我国广州地区急性性戊型肝炎病毒细胞培养分离株Ｇ９３－１、Ｇ９３－２、Ｇ９３－３和Ｇ９３－４基因组聚合酶区部分核苷序列进行检测,ＰＣＲ阳性产物经纯化、克隆后测定。结果Ｇ９３－１、Ｇ９３－３和Ｇ９３－４株病毒的这段序列完全相同,且与我国新疆暴发流行的ＨＥＶ８７Ａ株及ＨＥＶ代表株的同源性为１００％;而Ｇ９３－２株与它们的差异较大,同源性只有７９．９％;但是,它与１９９７年厦门地区急     

呼吸道合胞病毒北京地区分离株G蛋白的基因分析

从经单克隆抗体证实为Ａ亚型的北京地区呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）分离株Ｂ７９中,用ＲＴ－ＰＣＲ扩增出编码Ｇ蛋白的基因片段,克隆至载体ｐＴＺ１８Ｒ中。经核苷酸序列测定证明,我国北京地区分离的Ａ亚型株Ｂ７９与ＲＳＶＡ亚型原型株（Ａ２株）Ｇ蛋白基因的核苷酸同源性为９３．８％,核苷酸的有义突变率达６５％。由核苷酸推导出氨基酸序列的同源性为８９．６％。氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守区的两端,而胞内区和跨膜区相对保守。本文探讨了我国北京地区ＲＳＶ分离株的Ｇ蛋白基因同原型株之间的变异,在疫苗研制中的意义。     

肾综合征出血热病毒基因检测及分型的研究

根据流行于我国的两型ＨＦＲＳＶ代表株汉滩型７６１１８株及汉城型Ｒ２２株Ｍ节段的核酸序列,设计两型共同引物,建立了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）方法,检测３９株从不同地区、不同宿主分离的ＨＦＲＳＶ感染鼠脑及细胞培养物;同时还建立了捕捉ＥＬＩＳＡ法（ｃＥＬＩＳＡ）,检测了３９株中的３６株,每份样本设复孔,以Ｐ／Ｎ≥２．１０且Ｐ－Ｎ≥０．１０者判为阳性。ＲＴＰＣＲ及ｃＥＬＩＳＡ两法的检出率分别为９７．６％与８２．４％,二者符合率８４．６％。此外,对ＲＴＰＣＲ产物进行酶切分型,３８份扩增产物中的１５份可被ＡｌｕＩ切开。根据所获酶切图谱的差异,可分为汉滩型及汉城型两型,显示了酶切分型的潜在价值     

15株中国TT病毒基因型鉴定和部分序列分析

ＴＴ病毒（ＴＴＶ）为一种新鉴定的输血后肝炎相关的病毒。用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）扩增ＴＴＶ ＤＮＡ序列核苷酸１９１５到２１８５之间的片段,并将该片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ Ｅａｓｙ载体。重组克隆经酶切鉴定后,用全自动测序仪测序,发现本组病例中１５侏ＴＴＶ毒株间的同源性在６６．８％到９９．３％之间,与ＴＴＶ日本株比较同源性在６６．１％到９７．４％之间,分析结果显示在我国不仅有国外已报告的不同基因亚型毒株     

缓激肽对大鼠背根神经节分离神经元ATP激活电流的调制作用

在新鲜分离大鼠背根神经节（ＤＲＧ）的５６个细胞标本上,应用全细胞膜片箝技术进行记录。胞外加缓激肽（ＢＫ,１０＾－６￣１０＾－４ｍｏｌ／Ｌ）引坊的ＤＲＧ细胞膜反应结果如下：（１）７１．４％的细胞为内向电流,其电流反应的幅值具有明显的浓度信赖性;（２）１２．５％的细胞为外向电流;（３）１６．１％的细胞未引起可检测的膜反应,单独给予ＡＴＰ（１０＾－６￣１０＾－３ｍｏｌ／Ｌ）在大多数受栓细胞（５４／５６）     

应用套式PCR对恶性卡他热病毒在不同动物体内变异的研究

应用本实验建立的三组套式ＰＣＲ（ＰＣＲ１、２、３）和一组以前报道的套式ＰＣＲ（ＰＣＲ４）,对５９份外周血淋巴细胞（ＰＢＬ）ＤＮＡ样品进行了恶性卡他热病毒（Ｍａｌｉｇｎａｎｔｃａｔａｒｒｈａｌｆｅｖｅｒｖｉｒｕｓ,ＭＣＦＶ）核酸序列的检测。这些样品来自５１只羊,以及与羊接触而发病的６头牛和２只鹿。除ＰＣＲ４外,其它三组ＰＣＲ都能扩增现有４个角马型ＭＣＦＶ分离株。有６只羊在４组ＰＣＲ中都呈阴性,其余５３份样品经ＰＣＲ４检测均呈阳性。ＰＣＲ１只能从４５只羊体检出ＭＣＦＶＤＮＡ,未能从牛和鹿体检出病毒ＤＮＡ。ＰＣＲ２检测的所有样品均呈阴性。在ＰＣＲ３扩增中,除２头牛外,其它５１份样品均呈阳性。通过Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和限制性酶切分析,对ＰＣＲ１－４产物的特异性进行了鉴定。此外,敏感性实验表明,四组ＰＣＲ的差异也不明显。因此,本实验结果说明ＭＣＦＶ基因组在不同种动物之间发生了变异,羊体内的变异株可能是导致其它反刍动物发病的病原     

淋球菌的营养分型及质粒的生态分布

淋球菌营养型及质粒类型是其重要的生物表型。我们对９３￣９４年度在长春地区分离的９８株淋球菌,进行了营养型分布,质粒微生态分布的实验研究,结果,属于原养型（Ｗｒ）３８株,占３８．７％;ＡＨＵ＾－型３４株,占３４．７％;Ｐｒｏ＾－型１７株,占１７．４％;Ｓｅｒ＾－型６株,占６．１２％;Ｉｌｅ＾－型３株,占３．１％,未见ＰＡＶ＾－型。所有菌株中,共检出四种类型的质粒,其分子量分别为２．６Ｍｄ,４．５Ｍｄ     

呼吸道合胞病毒在北京地区分离株G蛋白的基因分析

从经单克隆抗体证实为Ａ亚型的北京地区呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）分离株Ｂ７９中,用ＲＴ－ＰＣＲＴ扩增出编码Ｇ蛋白的基因片段,克隆至载体ｐＴＺ１８Ｒ中,经核苷酸序列测定证明,我国北京地区分离的Ａ亚型株Ｂ７９与ＲＳＶＡ亚型原型株（Ａ２株）Ｇ蛋白基因的核苷酸同源性为９３．８％,核苷酸的有义突变率为６５％,由核苷酸推导出氨基酸序列的同源性为８９．６％,氨基酸的变异主要集中在胞外区一个高度保守区的两端,而胞内区     

生物素标记GFV—cDNA探针的制备及在检测葡萄扇叶病毒上的应用

以整合到质粒中的ＧＦＶ－ｃＤＮＡ为模板经ＰＣＲ合成了生物素标记的ＧＦＶ单、双链探针。用合成的探针对提纯的ＧＦＶ－ＲＮＡ２、感染ＧＦＶ的昆诺藜叶及１８株葡萄进行ＤＮＡ－ＲＮＡ杂交检测表明：检测提纯病毒ＲＮＡ２的灵敏度为１．５ｐｇ／斑点,感染ＣＦＶ的昆诺提取液最高稀释度可达４０９６０倍;１１株显示典型扇叶症状的样品均为阳性,且汁液稀４００～８００倍仍能测出,７株不显示典型扇叶症状的葡萄中３株受到ＧＦＶ