抑制浓度下锰铁对啤酒废酵母产LYCD活力影响

目的:探讨锰铁离子对啤酒废酵母产生活性酵母细胞衍生物(LYCD)的活力影响.方法:以啤涌废酵母为研究对象、以废液为培养基,在生长抑制浓度下,分别研究了锰、铁离子的作用浓度与时间对啤酒废酵母产生LYCD的活力影响.结果:废酵母在废液中培养28h可达到对数生长期;当废液中Mn~(2+)、Fe~(3+)浓度分别达到200mg/L、50mg/L时可对废酵母产生生长抑制;当Mn~(2+)、Fe~(3+)的作用浓度分别为220mg/L、60mg/L、应激时间分别是25、45min时,啤酒废酵母产的LYCD活性强.结论:应激培养基中金属离子Mn~(2+)、Fe~(3+)达到一定浓度,在一定时间下可使废酵母产生强活力的LYCD.     

小鼠γ干扰素(mIFN-γ)基因克隆及其逆转录病毒载体的构建和转基因细胞系的建立

本研究自小鼠脾脏淋巴细胞中抽提总RNA,应用RT-PCR技术扩增出mIFN-γ基因,按常规方法构建T载体克隆,酶切鉴定,测序分析.结果表明:获得mIFN-γ基因全长为468 bp,与GenBank中已发表的mIFN-γ基因核苷酸同源性为100%.通过双酶切将该基因片段插入逆转录病毒载体pGEZ-Term中,脂质体法共转染包装细胞293T ,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染L929细胞,72 h 后,加入Zeocin 进行筛选,挑选出能稳定表达抗性的细胞株,经RT-PCR检测出转基因L929细胞株中mIFN-γ基因的转录.结果表明: 构建了含mIFN-γ基因的重组逆转录病毒载体,并筛选出整合有mIFN-γ基因的L929细胞株,为基因治疗的后续研究和大鼠单克隆抗体的研制奠定了基础.     

吡虫啉杀虫剂降解菌Ochrobactum BB -1培养条件的研究

目的:研究培养条件对吡虫啉杀虫剂降解菌苍白杆菌BB -1(Ochrobactum sp.BB -1)生长的影响.方法:采用超声波破碎菌体细胞得到粗酶液;应用单因素试验研究培养条件对吡虫啉杀虫剂降解菌 Ochrobactum BB -1生长的影响.结果:降解酶定域试验表明,BB -1吡虫啉降解酶属于胞内蛋白组分.适合Ochrobactum BB -1生长的最佳碳、氮源分别是甘露醇和酵母膏,浓度分别为30g/L和16g/L;最适培养条件为pH 7.0,250mL三角瓶培养基装液量70mL,培养温度30℃.结论:苍白杆菌BB -1(Ochrobactum BB -1)生长条件要求简单,适于进一步研究其对吡虫啉杀虫剂的降解性能.     

RIP1介导肿瘤坏死因子α诱导的L929细胞凋亡与程序性坏死

肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNFα)诱导的L929细胞死亡是研究细胞程序性坏死的重要模型,但也有报道称,TNFα处理后的L929细胞发生了凋亡。该研究以所在实验室保存的L929细胞(L929-A)和从商业化细胞库购买的L929细胞(L929-N)为模型,进一步鉴定了TNFα诱导的L929细胞死亡类型与调控机制。结果发现,TNFα处理后的L929-A细胞中出现了凋亡特征,且阻断胱冬肽酶(caspase)信号通路可显著抑制TNFα诱导的L929-A细胞死亡,但却促进TNFα诱导的L929-N细胞死亡。此外,受体相互作用蛋白1(receptor-interacting protein 1,RIP1)在TNFα诱导的两种L929细胞死亡过程中都具有关键性的调控作用,表明TNFα处理后的L929-A细胞发生了RIP1依赖的细胞凋亡,而L929-N细胞发生了程序性坏死(necroptosis)。同时,启动细胞程序性坏死的关键蛋白RIP3(receptor-interacting protein 3)在L929-N细胞中表达水平显著高于L929-A细胞,因此,RIP3的这种差异表达可能是决定两种L929细胞在TNFα处理后发生不同类型细胞程序性死亡的重要原因。     

氧化豆油水溶物对离体草鱼肠道黏膜细胞的损伤作用

以氧化豆油水溶物为试验材料,在草鱼肠道黏膜细胞培养液中加入不同浓度氧化豆油水溶物,研究不同剂量氧化豆油水溶物在不同作用时间下对肠道黏膜细胞生长、细胞形态结构的影响。结果显示: 添加111.06-888.48 g/L氧化豆油的水溶物作用6h显著降低细胞活性（P0.05）,细胞集落面积减小、细胞形态改变,其中在444.24 g/L氧化豆油的水溶物作用下培养细胞空泡变性,且脂肪滴沉积,线粒体肿胀。在222.12-888.48 g/L氧化豆油的水溶物作用下,3-9h内培养液中LDH活力显著增高（P0.05）;各时间点培养液中GSH-PX、SOD、T-AOC均有显著变化。结果表明,在培养液中添加111.06-888.48 g/L氧化豆油的水溶物作用12h内,对草鱼肠道黏膜细胞产生了损伤,表现为抑制细胞生长,改变细胞形态、结构,可能引起细胞膜脂质过氧化,导致膜结构破坏,且作用程度与添加浓度、作用时间相关。研究认为氧化豆油水溶物对草鱼肠道黏膜细胞具有显著性的损伤作用。       

纳米铂黑作为电极镀层的细胞毒性评价

目的:探讨将纳米铂黑作为电极镀层的细胞毒性,初步评估铂黑电镀电极长期植入生物体内的安全性。方法:分别改变混悬液浓度(0.1 mg、0.2 mg、0.3 mg/m L铂黑混悬液)对L-929成纤维细胞培养24 h、48 h、72 h,显微镜下观察细胞形态变化并通过MTS法计算细胞相对增殖率,对细胞毒性进行评级。结果:0.2 mg/m L、0.3 mg/m L的铂黑混悬液中L-929成纤维细胞变成圆形、胞核固缩,细胞稀少,贴壁差;在0.1 mg/m L的铂黑混悬液中上述细胞形态变化则较轻微。0.1 mg/m L的铂黑混悬液细胞毒性为0~2级,且随时间延长而毒性逐渐减弱并呈现出无细胞毒性;0.2 mg/m L、0.3 mg/m L的铂黑混悬液细胞毒性为3~4级,不随时间变化。结论:纳米铂黑其质量体积浓度低于0.1 mg/m L时具有较好的生物相容性。     

tRNA修饰酶NSun2和METTL1影响Hela细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性

<正>甲基转移酶对tRNA进行的非必需修饰在进化上是保守的。已报道这种修饰可以防止快速tRNA降解(RTD)从而稳定成熟的tRNA分子。在酵母细胞中,RNA甲基转移酶Trm4和Trm8分别对tRNA进行m5C和m7G修饰。当酵母细胞处于热应激或者5-氟尿嘧啶处理情况下,Trm4和Trm8协同作用稳定tRNA。若应激条件下Trm4和Trm8功能缺陷,tRNA监控系统则     

重组人内皮抑素对食管癌细胞生长抑制作用的体外研究

目的:探讨重组人内皮抑素(rhES)对食管鳞癌系KYSE-150及TE1细胞生长的影响。方法:应用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,以大鼠成纤维细胞L929为对照细胞,检测rhES不同浓度(0、12.5、25、50、100、200、400、600μg/ml)和作用时间(24h、48h)对食管鳞癌系KYSE-150、TE1和L929细胞的生长抑制作用。结果:大鼠L929细胞经rhES处理后,吸光度A值轻微降低,差异不具有统计学意义(P>0.05),食管鳞癌系KYSE-150、TE1经rhES处理后,吸光度A值明星降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:rhES明显抑制食管鳞癌系KYSE-150及TE1细胞增殖,且呈时间-剂量依赖性。     

tRNA在基因表达中的调控作用

转移核糖核酸（transfer RNA,tRNA）是遗传信息传递过程中的“适配器”分子,它们能够把mRNA所携带的遗传信息准确地翻译成蛋白质的氨基酸序列.然而,近年来的研究表明,tRNA在基因表达过程中还具有重要的调控作用.当生物面临外界某些营养压力胁迫时,空载tRNA可作为效应分子影响细胞整体基因表达水平,从而使机体应对不利的环境.在酵母和某些哺乳动物细胞中,tRNA可以从细胞质逆行回细胞核.这种逆行一方面可以使细胞核的监控系统连续地监控tRNA的完整性,另一方面,在营养缺乏时,逆行回细胞核的tRNA可以有效地降低蛋白质的合成水平.最新研究表明,tRNA并不是绝对稳定的RNA分子.在某些生理或逆境胁迫下,tRNA在其反密码环或反密码环左臂处被内切酶特异性切割成不同长度的片段.这些切割并不是无意义的随机降解现象,而有可能产生一类新的信号分子,如tRNA半分子或sitRNA,它们与生物应激反应中细胞整体代谢的基因表达调控有着密切的关系.关于tRNA调控功能的研究是一个新的前沿领域,它将揭示tRNA结构与功能的多样性及其在遗传信息表达过程中的重要作用.     

弓形虫基因缺陷虫株建立方法的初步研究

目的:应用电穿孔技术转染TgP24基因敲除转染质粒于弓形虫RH,探讨电穿孔技术的应用条件,以及TgP24基因敲除质粒转染虫株在不同哺乳动物细胞中筛选的最适条件.方法:设定所需的电穿孔参数、条件,如电压,电容,脉冲次数,电击杯的大小,电转染缓冲液,电穿孔后,将弓形虫悬浮液分别转移到长有不同贴壁细胞的培养瓶中,37℃,5%CO2(体积分数)的培养箱中培养,观察弓形虫的生长状况,并对不同电穿孔参数、条件下的弓形虫存活率进行比较.12hr后换成加有福来霉素的完全培养基中选择培养,不同时间观察虫体及细胞生长情况;在细胞中选择培养10天后,收集虫体,4℃下福来霉素处理7天,再回复到细胞内用选择培养基培养5天,收集虫体,腹腔注射昆明小鼠,大量收集弓形虫用于提取RNA进行RT-PCR.结果:优化电穿孔条件后的弓形虫存活率得到提高(P＜0.05);在选择浓度为5.0μg/ml-7.5μg/ml的福来霉素培养基中,筛选虫株采用L929细胞做为宿主细胞最为适合;RT-PCR结果显示L929细胞筛选基因敲除虫株的效果较好.结论:初步确定了弓形虫电穿孔技术的应用条件,以及Tg P24基因敲除质粒转染虫株在不同哺乳动物细胞中的最佳筛选条件;获得了较好的转染效率,为进一步研究弓形虫Tg P24基因敲除株的生物学特性打下了良好的基础.