植酸酶高产菌株的诱变选育

以黑曲霉MAO21为出发菌株,经紫外线、亚硝基胍单独处理和复合处理,获得一株植酸酶高产菌株UN-02－10。该菌株具有稳定的遗传性能,在经过优化的摇瓶培养基上发酵108h,其植酸酶活力达到2950～3O15u／ml,是原始出发菌株的3.6倍。     

CN—92植酸酶产生菌的诱变选育及产酶条件的研究

以无花果曲霉IFFI2227为出发菌株,通过NTGT和Co60复合诱变处理,获得5株产植酸酶活力比出发菌株高2．1～2．5倍的高产菌株。其中1株CN－92菌产酶性能稳定,研究了该菌株的最适产酶条件：培养温度30℃,培养基起始pH6．0培养时间72h。适宜于该菌株产植酸酶的优良固体培养基组成为：麸皮、豆饼粉、硫酸铵及少量无机磷,培养基含水率51％。葡萄糖、乳糖和MH4Cl、NH4NO3等不同程度地抑制植酸酶的合成,微量元素如Mn,Zn,Cu等对产酶无促进作用。     

植酸酶高产菌株的诱变选育

无花果曲霉是一种可以产植酸酶的菌株,其代谢产物植酸酶可以将有机植酸磷降解为无机磷。以此菌株为出发菌株,确定了它的最适pH值为1.3~1.4,最适温度为55~60℃。同时,为获得高酶活的突变株,进行亚硝基胍和紫外线处理,经初筛得到99株高效突变株,再经复筛和传代试验,得到1株植酸酶活性是出发菌株2.47倍的突变株NTG-23。     

文摘

产植酸酶的黑曲霉菌株筛选及其植酸酶基因克隆［中］／姚斌…／／农业生物技术学报．－１９９８,６（１）．－１～６从土壤中筛选到产植酸酶的黑曲霉菌株Ａｓｐｅｒｇｉｌｕｓｎｉｇｅｒ９６３,对其所产植酸酶的生理生化性质研究表明具有适合于在饲料中使用的优良性质...     

中性植酸酶高产菌株的筛选及产酶条件研究

以地衣芽孢杆菌为原始出发菌株,用紫外线反复诱变,最终获得一株中性植酸酶高产菌株B.licheniformis LL8,其酶活性约为原始出发菌株的2倍。该菌株具有稳定的遗传性能。通过单因素试验和正交试验对发酵条件进行了优化,当培养温度为55℃,pH为7.5,接种量为10%时,经30h培养后,中性植酸酶活力最高达到2268.4U/mL。     

产胞外青霉素酰化酶菌株的选育

以短小杆菌（B．pumilus）B－97为出发菌株,经过连续两次紫外线诱变处理,分离得一突变株B－U－29。其酶活力为4．56U／ml,较出发菌株酶活力提高113．3％。对B－U－29菌株进行连续两次亚硝酸处理,分离得一正变稳定株B—H－29,酶活力为4．93u／ml,较出发菌株酶活力提高了20％。     

人工合成的黑曲霉NRRL3135菌株植酸酶基因在毕酵母系统中的高效表达

本文以黑曲霉（Aspergillus niger)NRRL3135菌株植酸酶基因为对象,通过基因人工合成的方法去除了该基因的内含子与信号肽编码序列,换用在毕赤酵母（Pichia pastoris）中使用频率较高的密码子以优化其表达。该人工合成植酸酶基因（PhyA-as)以N端融合的方式正确插入到毕赤酵母表达载体pPICZαA。通过电击将重组表达载体整合人酵母染色体DNA中得到重组转化子。SDS－PAGE结果与表达产物酶这性质研究表明植酸酶得到分泌表达,且与天然产物性质基本一致。筛选得若干株高产基因工程菌,其中SPAN－Ⅲ菌株达到了在摇庆培养条件下,每毫升发酵液产生165000u植酸酶的水平,基本满足工业化生产的要求。     

植酸酶产生菌黑曲霉N14的诱变选育及其基因分析

以植酸酶产生菌黑曲霉03214为出发菌株,经紫外线和亚硝基胍诱变,获得了产酶活性较出发菌株提高了22．3％,达422IU／ml发酵液的突变菌株黑曲霉N14,其最适pH值为2．5,最适温度为50℃。通过对黑曲霉N14植酸酶phyA基因进行PCR扩增,获得了一条长约1．5kb的特异性产物。以pMD18-T为载体,构建了含有目的基因片段的重组质粒。DNA序列测定表明,目的基因片段含有植酸酶phyA基因的完整序列(GenBank Accession：AY426977),phyA基因全长1506bp,其中包含一段长102bp的内含子,编码467个氨基酸,有10个潜在的糖基化位点,5’端有一编码19个氨基酸的信号肽序列。实验结果为植酸酶基因工程菌的构建奠定了基础。     

亚硝基胍诱变选育林肯霉素高产菌株

以林肯链霉菌９４７－８（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｌｉｎｃｏｌｎｅｎｓｉｓ９４７－８）为出发菌株（产林肯霉素９４０γ／ｍｌ）。采用孢子热处理方法处理出发菌株孢子,得到变异株９４７－８ｓ,产林肯霉素１０８０γ／ｍｌ。对９４７－８ｓ菌株进行ＮＴＧ诱变处理,得变异株９４７－８ｘ,产林肯霉素为１２１８γ／ｍｌ,且生产能力稳定。     

高产植酸菌株的空气等离子体诱变选育

利用空气等离子体对植酸酶产生菌Aspergillus niget0002进行诱变选育,获得一株高产菌株,其酶活力是出发菌株的1．72倍。实验表明：应用廉价辐射源—空气等离子体诱变选育微生物切实可行。     

妥布霉素产生菌诱变育种的研究

本实验以妥布霉素产生菌黑暗链霉菌（Ｓ．ｔｅｎｅｂｒａｒｉｕｓ）ＡＴＣＣ１７９２０为出发菌株,经紫外线处理,获得一株产量较高且稳定的菌株ＵＶ－５９,其抗生素效价比原株提高９２．３％对ＵＶ＿５９菌株进行高温处理,得到一株Ｔ－５４１菌株,所产抗生素只有两个组分,比原出发株减少一个组份,不再含有出发株产生的氨甲酸卡那霉素;再对Ｔ－５４１菌株进行原生质体制备,分别用紫外线和紫外线加氯化锂以及亚硝基胍诱变处理原生质体,获得四株高产菌株,效价比原株提高１１５～１５０％,且稳定。此外还研究了变异菌株的形态与产量的关系。     

高活力碱性淀粉酶菌种的选育及培养条件研究

通过对产碱性淀粉酶芽胞杆菌Ｂ－９５４５进行紫外线、原生质体亚硝基胍复合诱变等反复处理,获得一株具有较高碱性淀粉酶活力的变异株ＰＮ－６。产酶活力从５４０ｕ／ｍｌ提高到７８０ｕ／ｍｌ,确定的最佳培养条件是：ｐＨ８－１０,３０℃培养４８ｈ。从变异株和出发菌株的生长及产酶曲线看到,变异株的生长速度低于出发菌株,其产酶高峰与出发菌株相比略拖后一段时间,但是酶活力要远大于出发菌株。     

烟曲霉WY-1植酸酶基因的克隆及其在烟草中的表达

大连理工大学环境与生命学院生物工程系王严、高晓蓉、苏乔等生物工程科研工作者以自行筛选的烟曲霉WY-1为出发菌株。通过PCR方法克隆其植酸酶基因，并构建了含有植物信号肽序列的植酸酶基因植物表达载体。他们利用农杆菌介导的叶盘法对烟草叶片进行了遗传转化。     

以耐赖氨酸为标记的金霉素产生菌抗噬菌体变株的选育

本文以金霉素产生菌Ｆ－３０３作为出发菌株,通过ＵＶ＋ＥＭＳ复合处理,双层法不同梯度耐赖氨酸作标记,进行抗噬菌体的金霉素菌株选育,获得Ｆｓ－４８－１４菌株。该菌株不但表达了抗噬菌体的特性,而且产素效价超过Ｆ－３０３。通过无机盐正交条件试验,取得抗性变株最佳的发酵培养基配方。     

产植酸酶菌株的分离筛选研究

研究了产植酸酶菌株分离筛选的方法 ,筛选得到分别适宜液态发酵和固态发酵的酶活力较高的黑曲霉XH和黑曲霉PA两菌株。在液态发酵KH2 PO4 对植酸酶产生有促进作用 ,其最佳用量为 8mg %;在固态发酵KH2 PO4 的添加对植酸酶的产生无明显促进作用。 2菌株所产植酸酶具有相似的酶学性质 ,最适作用温度为 5 5℃ ,当底物 pH为 3～ 5具有较高的酶活力。     

紫外线诱变选育碱性蛋白酶高产菌株

本实验以枯草杆菌A4－3为出发菌株,发酵产生碱性蛋白酶,其野生型菌株产酶为2412u／ml。采用孢子热处理方法处理出发菌株孢子,得到变异株As—4,产酶2732．8u／ml。对As—4菌株进行紫外线绣变处理1min,得变异菌株AX—46,产酶为3213．8u／ml,且产酶能力稳定。     

表面展示表达植酸酶的重组酿酒酵母构建及酒精发酵

以淀粉为原料的同步糖化发酵是目前乙醇生产的主要途径之一。然而原料中含有的植酸不仅影响酒精发酵效率,而且也会导致环境中难以被植物吸收的磷含量的增加,加剧环境污染。将来源于大肠杆菌的植酸酶基因与酵母编码α-凝集素C端编码序列连接并置于α-因子分泌信号肽下游,构建植酸酶表面展示表达重组载体pMGK-AG-phy并转化工业酿酒酵母,成功获得了在细胞表面锚定表达植酸酶的重组菌PHY。重组酵母的植酸酶表达水平达到6.4 U/g(菌体湿重),其最适温度为55℃,最适pH 4.0,在pH 3.5–4.5范围内具有较高的活性。以玉米粉为原料的同步糖化发酵实验表明,重组酵母PHY的生长速度高于出发菌株,同时酒精产量相较于出发菌株提高了3.7%。更为重要的是发酵后酒糟中植酸磷含量与对照相比降低了91%。构建的表面展示表达植酸酶的重组工业酿酒酵母能够有效降低植酸含量,提高了酒糟的利用价值,减少磷排放,对燃料酒精的环境友好生产具有重要的借鉴意义。     

阿维菌素高产菌株的选育Ⅰ

目的：全面了解阿维菌产生菌S.avermitilis的生长特性并获得阿维菌素的高产菌株。方法：以S.avermitilis Y20为出发菌株,考察该菌株的菌落特征和发酵特性,分别利用紫外线（UV）、亚硝酸（HNO3）及亚硝基胍（NTG）并结合L－异亮氨酸（L－Ⅱe）诱导等手段对出发菌株Y20进行诱变处理。结果：获得高产阿维菌素变异株H336,发酵单位达到852μg/ml。结论：与出发菌株相比,突变株阿维菌素的产量稳定,发酵单位提高了10倍以上。     

梧宁霉素产生菌诱变选育的研究

以不吸水链霉菌（Ｓｉｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓａｈｙｇｒｏｓｅｌｃｎｓ）ＮＳ—２３为出发菌株。菌种斜面孢子萌动后采用紫外线（ＵＶ）、硫酸二乙酯（ＤＥＳ）、秋水仙素及加底物等物理化学因子进行诱变处理,经两代连续处理,从ＵＶ、ＤＥＳ的复合处理中选育出一株产素较高的突变株ＵＤＡ２５７－Ｃ－２４,产素效价比出发菌株提高了２９１．７２％     

南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变筛选研究

通过对链霉素对南昌霉素（Nanchangmycin)产生菌NS－41－80菌株孢子的致死浓度测定基础上,采用诱变剂甲基磺酸乙酯（EMS）的不同诱发剂量对菌株孢子进行诱变处理,诱变处理的孢子涂布在含链霉素（10ug/mL)致死浓度的高氏平板上,获得了大量的链霉素抗性基因（str)突变株。然后从3,000株链霉素抗性基因（str)突变株中通过初筛获得比诱变出发菌株产素能力提高20％以上的菌株202株,再进一步通过摇瓶复筛,获得比出发菌株产素能力分别提高100％,200％,300％高产菌株为48株,7株和1株,分别为复筛菌和初筛菌株的23．76％和1．60％,3．46％和0．23％,0．5％和0．03％,将产素能力提高240％以上5个菌株连同出发菌株连续3批次进行摇瓶发酵结果,5个突变株的产素能力均比出发菌株的产素能力提高57％－96．4％,其中突变株80－5．3－165菌株摇瓶发酵单位达6,000ug/mL以上,3批次摇瓶平均发酵单位达5,855ug/mL,建立了南昌霉素高产菌株的链霉素抗性基因突变诱变快速高效的筛选方法。