吩嗪-1-羧酸发酵培养基配方的初步确定

对本公司自主分离、优化得到的新型农用抗生素吩嗪-1-羧酸的产生菌STH16#生产吩嗪-1-羧酸的发酵培养基配方的初步确定。经实验确定吩嗪-1-羧酸的发酵培养基配方为:甘油15.0g/L、蛋白胨20.0g/L、磷酸氢二钾1.5g/L、硫酸镁2g/L。前体饲喂:在接种后8小时加入质量分数为2.0g/L的MCS。发酵产量可达2500mg/L。     

秦岭地区大林姬鼠(Apodemus peninsulae)的酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶的研究

用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分析了大林姬属(Apodemus peninsulae)心、肝、脾、肾和腿肌的α—酯酶、β—酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶。结果表明3种同工酶的活性在5种器官组织中均有明显差异,其中以肝组织的酯酶活性最高;不同器官组织的酶谱也有明显差别,如脾的β—酯酶仅有B区带;同一器官组织通常以α—酯酶活性高于β—酯酶。苹果酸脱氢酶在碱性溶液中染色,肝组织有明显的AB区。心肌与腿肌的苹果酸脱氢酶活性略高于其他组织。     

献血感染丙型肝炎病毒人群的T细胞免疫及与肝损伤的相关性研究

丙型肝炎是由感染丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)引起的,至今仍是世界公共卫生的严重威胁。为研究HCV感染者的T细胞免疫状态及其对疾病进展的影响,我们招募了62位研究对象,包括20位健康对照、42位HCV感染者。我们通过HCV主要的T细胞免疫原非结构蛋白3(NS3蛋白)多肽库体外刺激外周血淋巴细胞,利用流式细胞方法检测CD8~+T细胞和CD4~+T细胞的γ-干扰素(IFN-γ)、白介素-2(IL-2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌水平。同时,我们检测了研究对象血清中白介素-6(IL-6)和白介素-10(IL-10)的水平。结果表明,HCV感染者外周血中仍持续存在针对NS3的特异性CD8~+T细胞和CD4~+T细胞。感染者血清中IL-6、IL-10显著高于对照人群。相关性分析显示,HCV感染者外周血中分泌IFN-γ和TNF-α的HCV特异性CD8~+T细胞水平及血清中IL-10水平与血清中的谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)呈现正相关。本研究表明,HCV感染者体内针对病毒的特异性细胞免疫持续保持一定的水平,并且可能与病人的肝损伤有关,该研究对于了解HCV感染的细胞免疫特征及研发相应的免疫干预策略具有一定的意义。     

外源乙烯对月季(Rosa hybrida)切花花朵开放的影响与乙烯生物合成相关基因表达的关联

以探讨外源乙烯对月季切花花朵开放的影响及其与花瓣内源乙烯生物合成相关基因表达之间的关联为目的. 试材选用外源乙烯对花朵开放进程影响截然相反的两个品种, 其中, Samantha明显被促进, 而Kardinal则明显被抑制. 经外源乙烯处理, 两品种花瓣乙烯生成量、1-氨基环丙烷-1-羧酸(1-aminocyclopropane -1-carboxylate, ACC)合成酶(ACC synthase, ACS)和ACC氧化酶(ACC oxidase, ACO)活性都被诱导升高. 但是, 以上指标两品种间变化有差异, 其中, Samantha主要表现为峰值提前, 即由未经处理对照的盛开期(开花级数4级)提早到初开期(3级); 而Kardinal主要表现为绝对值剧烈升高, 且远高于Samantha. 从花瓣中克隆到3个ACS (Rh-ACS1, Rh-ACS2和Rh-ACS3)和1个ACO(Rh-ACO1)基因的cDNA, 非放射性Northern检测结果表明, Rh-ACS3和Rh-ACO1基因的表达受到乙烯的诱导, 并且其表达变化在两个品种中都与ACS活性和乙烯生成量相一致. 由此推测, 外源乙烯对切花月季品种间花朵开放影响的差异, 可能与花瓣内乙烯生物合成关键酶转录水平上的诱导差异有关, 并且Kardinal可能对外源乙烯更为敏感. 还明确了月季切花3个ACS基因之间的表达存在发育时间和诱导方式上的特异性.     

MPTP/MPP+ 诱导神经元凋亡的机制研究

1982年人们发现1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)能诱发PD,它的有效成分是1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)。目前,MPTP/MPP+广泛的被用作诱导PD实验模型的有效药物,可诱导神经元细胞发生凋亡性死亡。MPTP/MPP+诱导细胞凋亡的机制牵涉Bcl-2、p53、caspase家族、JNK通路、ERK通路和PARP等多种机制,它们共同参与了MPTP/MPP+诱导的细胞凋亡的调控和执行阶段。本文主要综述MPTP/MPP+诱导的神经元细胞凋亡机制。     

极性生长的细胞中胞嘧啶甲基化的动态变化及其对GABA信号的响应

DNA胞嘧啶(C)的甲基化(5m C)在植物发育过程中具有重要的调节作用,多种环境因子如逆境胁迫、植物内/外源性因子等均会触发DNA甲基化的变化。为探讨γ-氨基丁酸(GABA)对植物发育的可能调节机制,本研究以极性生长的烟草花粉管和拟南芥根为材料,分析5m C的含量及其对GABA信号的响应。结果表明,1.0 mmol/L GABA能显著促进烟草花粉管和拟南芥根的极性生长;同时,GABA处理使烟草花粉管和拟南芥根的基因组中5m C含量显著降低、5-羟基胞嘧啶(5hm C)含量显著增加。5hm C是5m C去甲基化途径中的一个重要中间产物,本研究证实了GABA可以作为一种重要的外源信号调节DNA甲基化的动态变化。     

ROS介导IL-17A诱导的TF表达或有助于治疗TF相关的肝硬化

为了评估白细胞介素IL-17A对肝硬化组织中内皮细胞(endothelial cells, EC)组织因子(tissue factor, TF)表达的调节作用,本研究选择50例肝硬化患者(肝硬化组)和9例创伤性脾破裂患者(对照组)作为研究对象,通过检测两组脾静脉内皮上的TF表达和血清IL-17A水平,以及IL-17A诱导后人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)中的TF表达和活性。另外,考察活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)对肝硬化患者血清中内皮细胞TF表达和活性的影响。研究显示,肝硬化组的脾静脉内皮上的TF表达显著高于对照组,与对照组(24.65±4.02) pg/m L相比,肝硬化组IL-17A水平显著升高(46.78±7.68) pg/mL。用不同浓度和时间的IL-17A诱导HUVEC,可导致TF表达和活性呈浓度和时间依赖性升高。IL-17A (100 ng/mL)处理可诱导HUVEC中活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)水平逐渐升高,6 h以后逐渐降低。使用10 mmol/L NAC (ROS清除剂)和2 mg/mL IL-17受体C抗体(Interleukin-17 receptor A, anti-IL-17RA)预处理HUVEC 2h,可抑制TF表达和活性。添加人IL-17抗体(1μg/mL)和NAC (10 mmol/L)的两组血清TF表达和活性显著降低。另外,对照组血清中IL-17A的添加量达到80 pg/mL时,TF活性及表达水平与肝硬化组一致。本研究初步结论表明IL-17A诱导的TF表达通过活化ROS介导,靶向IL-17A和ROS信号通路可能有助于治疗与TF相关的肝硬化。     

γ-氨基丁酸对烟草MAPK和ACS1基因表达的分叉调节

为探讨γ-氨基丁酸(GABA)在植物生长发育中的调控机理,以含有3种不同浓度的GABA的1/2 MS培养基培养烟草(Nicotiana tabacum)品种‘SR1'种子,结果表明:低浓度GABA(1 mmol/L)促进了烟草幼苗的生长,主根的长度比对照高30%,同时该浓度处理提高了MAPK基因的表达水平;较高浓度(10-100 mmol/L)GABA抑制了主根的伸长,表现出乙烯反应的效应.在叶和根中,ACS1基因表达水平的提高受不同浓度GABA的调节.MAPK和ACS1基因对GABA信号的不同表达模式可能与不同的信号途径有关.     

分化抑制因子3的表达调控机理及其功能

分化抑制因子3(inhibitor of differentiation 3,Id3)属于螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)转录因子家族成员之一,该分子参与细胞周期调控过程,在细胞生长与发育.机体的生理及病理过程中发挥重要调控作用.其表达和功能涉及许多复杂的调控机制.     

响应面法优化巨大芽孢杆菌中的聚-β-羟基丁酸(PHB)提取工艺

为获得聚-β-羟基丁酸(PHB)提取的最佳工艺,以氯仿浓度,提取时间,和提取温度为影响因子,在单因素实验结果的基础上,应用Box-Benhnken中心组合方法进行三因素三水平的实验设计,以PHB提取量为响应值,运用响应面法(RSM)对提取条件进行进一步的优化。结果表明:在氯仿浓度69.7%,提取温度59.7℃,提取时间3.0 h的条件下,PHB提取量达到最大值4.430 g/L。     

血液中肾损伤分子-1(KIM-1)和血清肌酐(SCr)对AKI的生物标志物作用

为了探讨血液中肾损伤分子-1 (KIM-1)和血清肌酐(SCr)的表达对外科术后急性肾损伤(AKI)的早期诊断价值,本研究选取医院内2018年3月至2019年3月进行外科手术的患者48例,分为AKI组患者即实验组12例,非AKI组患者即对照组36例,收集所有患者手术后0、3 h、6 h、9 h、12 h、24 h、48 h和72 h的血液样本,检测各个时间点血液中KIM-1和血清肌酐SCr水平,将血液中KIM-1与血清肌酐SCr水平进行相关统计学分析,绘制受试者工作特征曲线(ROC),探究并对比血液中KIM-1和血清肌酐的表达对外科手术后患者发生AKI的早期诊断价值。本研究数据显示,AKI组患者在手术后(3 h, 6 h, 9 h, 12 h)血液中KIM-1水平都高于0 h基准值,并且在6 h达到最大值;与此同时,AKI组患者手术后(0, 3 h, 6 h, 9 h)血液中KIM-1水平明显高于非AKI组患者。AKI组患者手术后血液中KIM-1 (0, 3 h, 6 h, 9 h)水平和手术后24 h的血清肌酐SCr水平呈正相关。本研究表明,3~9 h血液中KIM-1水平升高对患者外科手术后AKI的发生具备较高的诊断价值,血液中KIM-1可以作为早期诊断患者外科手术后发生AKI的一项生物标志物,且血清肌酐SCr的观测效率明显低于血液中KIM-1,可作为辅助诊疗手段。     

猫小脑皮质Glu/GABA表达的老年性变化

衰老导致小脑的生理功能下降,但其神经机制仍然不清楚。为此,利用免疫组织化学方法标记猫小脑皮质内谷氨酸(Glutamate,Glu)和γ-氨基丁酸(γ-Aminobutiric acid,GABA)免疫反应阳性(Glu-IR和GABA-IR)结构,探讨青年猫和老年猫小脑皮质Glu/GABA表达的老年性变化及其可能影响。并利用Image-Pro Express图像分析软件对小脑皮质各层Glu和GABA免疫反应阳性细胞密度及其灰度值进行测量。结果显示:与青年猫相比,老年猫小脑皮质内的Glu免疫反应阳性浦肯野细胞密度、颗粒层Glu免疫反应阳性细胞密度及其两者的免疫阳性反应灰度值均显著下降(P<0.01)(免疫反应强度与平均灰度值成反比);老年猫分子层、浦肯野细胞层GABA免疫反应阳性神经元密度及其免疫反应强度均显著下降(P<0.01);颗粒层GABA免疫反应阳性神经元密度无显著变化(P>0.05),但神经元免疫反应强度显著减弱(P<0.01)。研究结果提示,衰老过程中猫小脑皮质出现神经元Glu的表达增强、GABA的表达减少等,可能是小脑神经元丢失和精确调控能力下降等的重要原因之一。     

柑橘衰退病毒柚类分离株的分子鉴定

应用限制性片段长度多态性(RFLP)、双向逆转录-聚合酶链式反应(BD-PCR)、序列分析等技术对我国部分地区柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)柚类分离株进行了鉴定分析。结果表明:柚类以受相对单一的CTV株系侵染为主;柚类上的优势流行株系属于p25/HinfⅠRFLP 6组群(占79.4%)和p23/BD-PCRⅢ组群(占84.1%);在对柚类CTV分离株S051~S058及国外CTV分离株PB61、T30、T36、T385、SY568、VT、NUAGA的p23、p25基因序列分析中,S051与弱毒株PB61的同源性最高;S052与弱毒株T30、T385的同源性最高;S053、S054、S055、S056、S057、S058与其它CTV分离株的同源关系均较远,并在系统发生树上形成了独立的分枝。     

条件价值法评估旅游资源非使用价值的可靠性检验

CVM的有效性和可靠性检验在CVM研究中占据愈来愈重要的地位,国内目前该方向的研究还是空白。本文结合武夷山景区非使用价值CVM案例研究,对CVM可靠性作一些探索。案例CVM的研究结果表明:武夷山景区旅游资源非使用价值32.42×108元/a(2006年价格),人均保护支付意愿16.42元/(人.a)。以全国环评工程师为目标人群,相隔半年进行了可靠性检验。PC1、PC2样本数及地域分布基本一致,可靠性检验结果表明:①样本的性别、年龄、经济收入、对旅游的热爱程度、对武夷山景区的偏爱程度及对武夷山的熟悉程度等社会经济特征与相对应的是否具有支付意愿(正WTP率)的相关性分析比照具有较好的重现性。在中国环评工程师这一特殊的目标人群中,男性、到过武夷山景区特别是近期有计划去武夷山者、对武夷山较为熟悉者对于武夷山景区非使用价值通常具有较明显的支付意愿。②样本社会经济特征对支付意愿额度的影响相关性的重现性较好,在环评工程师中具有正支付意愿这-特定目标人群中,其支付额度具有较大的随机性,与被调查者的性别、年龄、对旅游的热爱程度、对武夷山的偏爱程度及熟悉程度均不存在显著性相关,但与收入水平呈弱相关。③WTP中位数与平均数重现性良好。PC1、PC2的中位数相差1.58元(RMB),误差很小。通过本次可靠性检验,武夷山景区旅游资源非使用价值CVM调查结果可靠性得到了保证。     

毛头鬼伞多糖对烟草酶活性和同工酶谱的影响

分析了毛头鬼伞(Coprinus comatus)真菌多糖诱导烟草对烟草花叶病毒(TMV)抗性过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、几丁质酶、-β1,3-葡聚糖酶活性的变化。结果表明,毛头鬼伞多糖可提高POD、PPO、PAL、几丁质酶和-β1,3-葡聚糖酶的活性,接种TMV后毛头鬼伞多糖处理的烟草酶活性显著高于不处理者。上述结果提示,毛头鬼伞多糖处理后烟草酶活性的增强可能与其诱导烟草获得抗性有关。     

围隔藻类水华演替过程中二甲基硫化物的含量动态

于2005年6月至7月,研究了海洋围隔不同藻类水华演替过程中二甲基硫化物的含量动态,并考察了相关环境参数对二甲基硫化物含量的影响。2个围隔实验组均出现未知藻水华-硅藻水华-甲藻水华的演替过程,这3次不同藻类水华分别对应了二甲基硫化物含量的3次高峰,表明藻类水华对二甲基硫化物含量有重要贡献。不同藻类水华的贡献有较大差异,甲藻水华的贡献最大,硅藻次之,未知藻类水华的贡献最小。实验结果还表明PO4^3-、NO2^-和NH4^＋主要通过影响藻类生长状态,进而影响DMSP和DMSO的含量;NO2^-和NH4^＋亦可能通过调节DMSP和DMSO在藻细胞内的生理功能,影响DMSP和DMSO的含量;PO4^3-、NO2^-和NH4^＋与DMS含量无显著相关。     

γ-氨基丁酸对烟草MAPK和ACS1基因表达的分叉调节

为探讨γ-氨基丁酸(GABA)在植物生长发育中的调控机理,以含有3种不同浓度的GABA的1/2MS培养基培养烟草(Nicotiana tabacum)品种‘SR1’种子,结果表明:低浓度GABA(1mmol/L)促进了烟草幼苗的生长,主根的长度比对照高30%,同时该浓度处理提高了MAPK基因的表达水平;较高浓度(10~100mmol/L)GABA抑制了主根的伸长,表现出乙烯反应的效应。在叶和根中,ACS1基因表达水平的提高受不同浓度GABA的调节。MAPK和ACS1基因对GABA信号的不同表达模式可能与不同的信号途径有关。     

急性毛细支气管炎并心衰患儿血小板活化因子,血小板源生长因子的表达及临床意义

目的:探讨血小板活化因子(PAF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血小板源生长因子(PDGF)水平变化在毛细支气管炎并急性心衰的变化,探讨它们在该病的发病中的作用方法:58例心衰组患儿分别于治疗前和临床症状消失后采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测PAF、TNF-α及PDGF血清含量,设正常对照组40例比较。结果:心衰组PAF治疗前为370.57±23.6ng/L,明显高于对照组的56.78±19.6ng/L,组间比较差异具有非常显著性意义(t=15.95,P<0.001);治疗后恢复至49.63±14.5 ng/L,与正常对照差异不明显;治疗前后比较,差异具有非常显著性意义(t=3.70,P<0.001)TNF-α治疗前为457.4±40.5 ng/L,明显高于对照组的148.8±21.6ng/L,组间比较差异具有显著性意义(t=2.135,P<0.05);治疗后恢复至162.6±37.61ng/L,与正常对照差异不明显;治疗前后比较,差异具有非常显著性意义(t=7.25,P<0.01)。PDGF治疗前为596.23±199.43)ng/L,较对照组259.76±69.58ng/L增高,组间比较,差异具有非常显著性意义(t=25.52,P<0.01);治疗后降为272.83±116.96ng/L,较治疗前明显恢复,组间比较差异均具有显著性意义(t=7.66,P<0.01)结论:结果表明,PAF、TNF-α、PDGF作为炎症介质不仅参与心衰的发病过程,还提示细胞外基质的异常在心衰发病学中的重要地位     

以Aβ4-11为免疫原制备Aβ1-42多克隆抗体

β淀粉样蛋白1-42(βamyloid 1-42,Aβ1-42)是阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的主要致病蛋白,其抗体一直处于研发当中。现以Aβ4-11耦联KLH免疫2月龄雌兔,ELISA检测雌兔免疫血清中所产生的抗Aβ4-11 IgG滴度,Protein G-琼脂糖亲和层析纯化IgG,Bradford方法进行IgG蛋白含量测定,SDS-PAGE进行IgG纯度测定,最后运用所制备的多克隆抗体采用免疫组化的方法分别对正常小鼠和9月龄APP转基因小鼠进行老年斑的检测,以鉴定此抗体对Aβ1-42的特异性及亲和力。结果显示Aβ4-11具有良好的体液免疫原性,而且以其为免疫原制备的抗体对Aβ1-42表现出良好的特异性及亲和力。结果表明,以Aβ4-11亚单位片段为免疫原制备的Aβ1-42多克隆抗体,可以作为AD的一种有效研究工具,同时也为AD的诊断和治疗提供了一种新的可能。