FosB和Glu受体Ⅱ亚型与慢性可卡因成瘾

过去的一段时间里,CREB一直被认为是与药物成瘾有密切关系的明星分子.但随着研究的不断深入发现,急性给予可卡因可引起ΔFosB家族的多种转录因子在伏核暂时性高表达,但慢性给予可卡因却可诱导Fos家族的异型体ΔFosB在伏核长期高表达,类似现象也见于反复给予其他成瘾性药物,因此ΔFosB遂脱颖而出成为又一个新星分子.1999年9月在英国Nature杂志发表的一篇文章报道,ΔFosB的表达增加及其引发的Glu受体Ⅱ亚型的增加可加强慢性给予可卡因引起的成瘾性,这可能与人类成瘾的形成相似.     

伏核内的ΔFosB--吗啡成瘾中的重要调节因子

众所周知,药物滥用能引起神经细胞特定的适应性反应,从而导致成瘾。基因表达的调节可能是导致这种适应性反应的重要机制之一。ΔFosB是一种转录因子,表达后能在脑内维持数周甚至几个月。长期药物滥用能引起伏核内ΔFosB表达稳定地增加,表明ΔFosB的表达可能是药物成瘾的分子转换机制,成为药物成瘾研究中最受重视的转录因子。最近,美国得克萨斯大学西南医学中心的Nestler的实验室利用两种转基因小鼠(一种过量表达ΔFosB,另一种过量表达ΔFosB的拮抗物Δc-Jun),研究了ΔFosB与阿片引起的行为反应之间的关系。在吗啡条件性位置偏爱实验中…     

伏核内的△FosB——吗啡成瘾中的重要调节因子

众所周知，药物滥用能引起神经细胞特定的适应性反应，从而导致成瘾。基因表达的调节可能是导致这种适应性反应的重要机制之一。△FosB是一种转录因子，表达后能在脑内维持数周甚至几个月。长期药物滥用能引起伏核内△FosB表达稳定地增加，表明△FosB的表达可能是药物成瘾的分子转换机制，成为药物成瘾研究中最受重视的转录因子。     

Cdk5在可卡因诱导的药物成瘾中的作用

细胞周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase-5,Cdk5)是细胞周期素蛋白激酶之一,具有很多磷酸化底物,其激动剂p35和p39特异存在于神经系统(CNS)。因此,Cdk5在神经系统中的功能尤为突出,成为神经科学研究热点。目前研究较多的是Cdk5在可卡因诱导的药物成瘾中的作用。在可卡因所致药物成瘾过程中,多巴胺系统,ΔFosB,神经元突触可塑性等发挥重要作用。Cdk5与这些分子相互作用,所以,Cdk5与可卡因诱导所致药物成瘾密切相关。阐明其与药物成瘾的联系,探索新的以Cdk5为靶向的药物,将可能成为成瘾治疗的有效手段。综述了在可卡因诱导的药物成瘾中Cdk5作用,以及Cdk5与相关的信号转导分子之间的相互调节。     

短暂的多巴胺释放可触发可卡因依赖大鼠的自身给药行为

一般认为大鼠可通过压杆获取成瘾性药物 (如可卡因 )。可卡因可阻断多巴胺 (dopamine ,DA)能神经元细胞膜上的DA转运体 ,阻滞DA的重摄取 ,从而引起突触间隙DA浓度增高 ,引起奖赏效应。但美国北卡大学的Phillips等应用快速反应的电化学探头 (可检测 10 0ms内的变化 )置于大鼠脑内伏核中央部 ,记录细胞外液中DA浓度的变化。发现有两种变化 ,一种是紧张性改变 ,其时程达几分钟 ;一种是位相性改变 ,时程小于 1秒。他们发现 ,大鼠经训练后可以自行压杆来获得可卡因的静脉注射。当血液 (及细胞外液 )中可卡因浓度增高时 ,DA能神经元放电频率…     

低、高频电针诱导原癌基因c－fos／c－jun和阿片肽基因表达及其关系的比较研究

本工作对低频（２Ｈｚ）和高频（１００Ｈｚ）电针引起大鼠中枢Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达和三类阿片肽基因表达进行了详细的比较研究,并用针对ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ的反义寡核苷酸（ＯＤＮｓ）对电针引起的Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达进行选择性阻断,然后观察阿片肽基因表达是否受到影响,以确定Ｆｏｓ／Ｊｕｎ复合物在电针引起阿片肽基因表达中的作用。主要结果如下：（１）２Ｈｚ和１００Ｈｚ电针引起脑内不同部位的Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达;（２）２Ｈｚ电针使前脑啡肽原（ＰＰＥ）ｍＲＮＡ表达大幅度增高,１００Ｈｚ电针也能增加ＰＰＥｍＲＮＡ的转录,但不如２Ｈｚ电针的作用显著;但１００Ｈｚ电针能使某些脑区的前强啡肽原（ＰＰＤ）基因转录加速,而２Ｈｚ电针没有这一作用;（３）用ｃ－ｆｏｓ／ｃ－ｊｕｎ反义ＯＤＮｓ特异地阻断Ｆｏｓ／Ｊｕｎ表达后,电针引起的ＰＰＤ转录加速被明显阻断,而ＰＰＥ表达不受影响。提示Ｆｏｓ／Ｊｕｎ是电针引起ＰＰＤ（而非ＰＰＥ）基因表达的转录因子。     

AGS3蛋白及其与成瘾的关系

作为G蛋白信号传递激活因子（activators of G protein signaling,AGS）之一的AGS3蛋白在大鼠脑组织、睾丸、肝脏、肾脏、心脏和胰腺组织中有不等量的分布,并且有AGS1、AGS2、AGS4、AGS8等家族成员.AGS3既有不依赖受体的Gβγ亚基信号传递激活因子的作用,也有二磷酸鸟苷解离抑制因子的作用.研究发现,慢性给予可卡因的大鼠长期戒断后,AGS3在大脑内的表达持续增加;而且还发现,AGS3与可卡因的复吸有关,它可能是引起阿片类药物成瘾复发的关键物质.     

在吗啡奖赏效应中多巴胺并非必需

多年来大量的实验证明,具有成瘾性的物质通过作用于脑内不同的靶点,最终都会引起伏核内多巴胺含量的上升;而损毁中脑边缘多巴胺系统能够抑制药物的奖赏作用。因此,在成瘾机制的研究中多巴胺处于重要地位。尽管如此,仍然有人质疑多巴胺在成瘾性药物的多种行为反应中的作用,从而提出了不依赖多巴胺的阿片奖赏机制。那么,多巴胺是否是阿片类药物诱导的各种行为反应所必需的呢？     

成瘾性药物对大鼠脑内G蛋白耦联受体激酶5 mRNA和蛋白水平的调控

G蛋白耦联受体激酶5(GRK5)在G蛋白耦联受体信号转导中起重要调节作用。本文研究了单次给予成瘾性药物吗啡、海洛因和可卡因对大鼠脑内GRK5mRNA水平的调控作用,并选取吗啡为代表,观察单次或多次给予吗啡后大鼠脑内GRK5蛋白含量的变化。结果发现：(1)单次给予吗啡(10mg／kg)、海洛因(1mg／kg)或可卡因(15mg／kg)均可引起大鼠大脑顶叶皮层、颞叶皮层和海马的GRK5 mRNA水平显著上升;(2)单次或多次给予吗啡注射可以显著上调大鼠大脑皮层GRK5蛋白含量,而多次给予吗啡显著下调丘脑GRK5含量。我们的结果首次证明成瘾性药物对大脑皮层、海马等脑区的GRK5在mRNA水平和蛋白水平都有调控作用,提示GRK5可能在精神活性物质的成瘾中起作用。     

牛磺酸抑制心肌β受体激动后的蛋白磷酸化

本工作在离休大鼠心脏灌流模型上,观察牛磺酸对异丙肾上腺素（Ｉｓｏ）刺激引起的心肌收缩蛋白（肌钙蛋白Ｉ,Ｔ,Ｃ－蛋白以及Ｐ轻链）和肌浆网的受磷醚蛋白（ＰＬＢ）磷酸化的影响。结果表明：Ｉｓｏ刺激后￣（３２）Ｐｉ参入肌钙蛋白Ｉ和Ｃ蛋白的量校对照组分别增加了５０２．３％和１８６．７％,给予牛磺酸后即明显降低;Ｉｓｏ刺激后￣（３２）ｐｉ参入肌浆网ＰＬＢ的量较对照组增加了５５０．１％,给予牛磺酸后,亦显著降低。表明牛磺酸明显抑制Ｉｓｏ刺激引起的心肌蛋白质磷酸化。提示抑制心肌β受体激动后的蛋白磷酸化,可能是牛磺酸保护心肌的分子机制之一。     

胃肠道伤害性刺激诱导中缝背核触液神经元Fos表达

本文以ＣＢ－ＨＲＰ逆行追踪和原癌基因ｃ－ｆｏｓ表达技术相结合,观察胃肠道伤害性刺激后中缝背核触液神经元Ｆｏｓ的表达。在中缝背核发现三种标记神经元,包括ＣＢ－ＨＲＰ逆行标记神经元（３０８）、Ｆｏｓ阳性神经元（４２）和ＣＢ－ＨＲＰ／Ｆｏｓ双重标记神经元（５）。本研究提示中缝背核含有一些具有双重功能的神经元,它们既在脑－脑脊液神经体液回路中传递信息,又在胃肠道伤害性刺激的中枢传递和功能调控中起一定的作用     

竹红菌乙素作猝灭剂研究F_o构象方法的建立

线粒体Ｆ１Ｆｏ复合体Ｆｏ部分ａ亚基的色氨酸荧光可被竹红菌乙素（ｈｙｐｏｃｒｅｌｉｎＢ,ＨＢ）猝灭．不同温度下测定ＳｔｅｒｎＶｏｌｍｅｒ图的结果显示,猝灭常数（Ｋｓｖ）随温度的增加而加大,时间衰变荧光的结果显示,荧光寿命随ＨＢ浓度的增加而减小,加入不同浓度的ＨＢ,Ｆ１Ｆｏ复合体的吸收峰没有位移．这些实验结果支持动态猝灭机理．ＨＢ还具有有效猝灭浓度低,不影响酶的活力;在脂相和水相的分布比率可高达１６５６０∶１;实验操作简便等优点．因此ＨＢ可作为理想的疏水相荧光猝灭剂,研究与膜结合的Ｆ１Ｆｏ复合体中镶嵌于膜脂内Ｆｏ的构象变化．     

缺失nifZ的棕色固氮菌突变种钼铁蛋白的特性和结晶

从棕色固氮菌（Ａｚｏｔｏｂａｃｔｅｒ　ｖｉｎｅｌａｎｄｉｉ）缺失ｎｉｆＺ突变种中提纯得到的Δｎｉｆ　ＺＭｏＦｅ蛋白达到ＳＤＳ凝胶电泳纯。每个△ｎｆｉ　ＺＭｏＦｅ蛋白分子含１．５个Ｍｏ和１５．９个Ｆｅ原子,它的Ｆｅ和Ｍｏ比值低于野生型固氮菌ＭｏＦｅ蛋白的Ｆｅ和Ｍｏ比值,而它的Ｃ２Ｈ２、Ｈ＋还原活性及其比率（Ｃ２Ｈ４／Ｈ２（Ａｒ））分别为野生型ＭｏＦｅ蛋白的１６．６％、２１．７％和７７．２％。在与野生型ＭｏＦｅ蛋白结晶条件略有不同的情况下,所得的Δｎｉｆ　Ｚ　ＭｏＦｅ蛋白晶体为深棕色的斜四棱柱体晶体。表明ｎｉｆＺ的缺失可能使突变种ＭｏＦｅ蛋白中的Ｐ－ｃｌｕｓｔｅｒ或数目减少或结构发生变化,从而引起该蛋白的结构和功能发生明显改变。     

吗啡耐受增加福尔马林致痛大鼠脊髓Fos和NADPH-d阳性神经元的表达

运用Ｆｏｓ免疫组织化学、ＮＡＤＰＨ－ｄ组织化学及Ｆｏｓ／ＮＡＤＰＨ－ｄ双标技术,研究了吗啡耐受对福尔马林致痛大鼠脊髓Ｆｏｓ、ＮＡＤＰＨ－ｄ阳性及Ｆｏｓ／ＮＡＤＰＨ－ｄ双标神经元表达的影响。结果观察到：在非吗啡耐受大鼠,福尔马林诱发的Ｆｏｓ－ｌｉｋｅ ｉｍｍｕｎｏｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ（Ｆｏｓ－ＬＩ）主要分布在同侧脊髓背角浅层和颈部,急性静注吗啡可减少Ｆｏｓ－ＬＩ表达;长时间应用吗啡导致福尔马林诱发的     

天然奖赏与药物奖赏

动物和人的中枢神经系统具有奖赏机制来加强和激励对机体有益的行为,以利个体生存和种族繁衍。但这一系统一旦被某些外源性物质反复地异常激活(如药物滥用),则引起神经系统的慢性适应性改变,将对机体造成严重损害。实现奖赏效应的神经结构主要位于中脑边缘系统,中脑腹侧被盖区(VTA)至伏核(NAc)的多巴胺通路是食物和性活动等天然奖赏和成瘾性药物引起奖赏效应的共同通路。本文概述天然奖赏和成瘾性药物奖赏的异同,旨在探讨阻断后者而不损及前者的途径。     

癫痫模型大鼠海马原癌基因c-fos mRNA和蛋白质表达时程的研究

为了探讨癫痫发病机理与原癌基因的关系,将马桑内酯注入侧脑室,于大鼠癫痫发作后不同时间点取材海马,用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹杂交和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹分析技术对海马ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ和Ｆｏｓ蛋白表达的动力学进行了定量研究,激光扫描仪定量分析表明：（１）ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ在０．５ｈ表达最高,依次渐减,至４ｈ几无表达;（２）Ｆｏｓ蛋白在１ｈ开始表达,２ｈ最多,以后渐少。以上结果表明：ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ和Ｆｏｓ蛋白的表达随癫痫的发生发展出现规律性变化,ｃ－ｆｏｓｍＲＮＡ是快速,一过性表达,Ｆｏｓ蛋白的表达滞后且延长。提示：ｃ－ｆｏｓ在癫痫发病的基因机制中发挥作用,本文对此进行了讨论。本实验为深入研究癫痫发病的分子机制奠定了基础。     

芦苇叶中Rubisco对干旱生境的响应

从分布于甘肃省河西走廓的沼泽芦苇和沙丘芦苇叶中提纯的Ｒｕｂｉｓｃｏ,大、小、小亚基分子量无明显变化,但沙丘芦苇与沼泽芦苇与沼泽芦苇相比较,Ｒｕｂｉｓｃｏ的氨基酸组成中,亲水性氨基酸相对含量增加,疏水性氨基酸相对含量减少,酶分子的疏水性降低,且酶分子中可被ＰＣＭＢ滴定的ＳＨ基数仅为沼泽芦苇的５０％。这说明,芦苇在长期适应沙丘干旱生境过程中,其Ｒｕｂｉｓｃｏ无论在结构与功能上,均发生有适应性的改变。     

水浸束缚应激及电击足底应激诱导的大鼠脑内FOS蛋白表达

目的和方法：本实验观察水浸束缚复合应激源与电击足底单一应激源诱导的大鼠脑内Ｆｏｓ 表达。结果：①水浸束缚和电击足底均引起脑内边缘系统、间脑、脑干等许多核团内Ｆｏｓ 表达;②在边缘系统,水浸束缚应激１ｈ 的Ｆｏｓ 表达较为显著,以后逐渐减弱;③随着水浸束缚应激时间的延长,间脑和脑干各核团Ｆｏｓ 表达逐渐增强。实验还观察到水浸束缚应激各组的胃粘膜都有不同程度的溃疡形成;电击足底应激组无异常变化。结论：水浸束缚和电击足底都是加工性应激源,首先激活边缘系统;随着水浸束缚应激时间的延长,间脑和脑干Ｆｏｓ 表达也逐渐增强,这可能与持续应激和胃溃疡的形成有关     

FasL—Fas／APO—1（CD95）系统

Ｆａｓ配体（ＦａｓＬ）与Ｆａｓ受体（Ｆａｓ,即ＡＰＯ－１,又称ＣＤ９５）分别属于肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）及ＴＮＦ受体（ＴＮＦＲ）家族,以膜分子或可溶性分子形式存在于哺乳类机体内。ＦａｓＬ或Ｆａｓ单克隆抗体（ＦａｓｍＡｂ）与Ｆａｓ结合可引起Ｆａｓ了性反应细胞的功能增强,继而出现程序性细胞死亡（ＰＣＤ）。ＦａｓＬ与Ｆａｓ相互作用及其所介导的信息途径是目前ＰＣＤ研究的重要内容之一。     

促肾上腺皮质激素引起大鼠肾上腺c—fos原癌基因表达的免疫…

采用冰冻切片免疫组化法观察了注射促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ,７５Ｕ／ｋｇ）,胰岛素及正常对照大鼠中肾上腺务部分ｃ－ｆｏｓ原癌基因表达产物Ｆｏｓ蛋白的出现和分布特点。结果表明注射ＡＣＴＨ后９０ｍｉｎ,大鼠肾上腺皮质网状带出现Ｆｏｓ蛋白染色阳性细胞,阳性染色物集中于细胞核,肾上腺皮质束状带仅见少数Ｆｏｓ蛋白染色阳性细胞,肾上腺髓质则未见Ｆｏｓ蛋白染色阳性细胞。与注射ＡＣＴＨ相反,注射胰岛素引起肾上腺髓