潞党参多糖的抗补体活性分析

以山西上党地区著名道地药材潞党参为材料,分析其多糖成分的抗补体活性。首先,通过细胞溶血实验,分析潞党参多糖(Lu Codonopsis pilosula polysaccharides,LCPP)对补体经典途径和旁路途径的影响。结果表明,LCPP具有一定抗补体活性,CH_(50)值为2.061±0.127 mg/mL,AP_(50)值为6.725±0.895 mg/mL,并表现为明显的量效关系。随后,利用人HepG2细胞,通过实时定量PCR实验,分析LCPP对补体系统重要成分C3表达的影响,发现LCPP能够显著抑制肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人HepG2细胞中C3的表达。以上结果提示,潞党参是一种潜在的补体抑制剂,在治疗补体过度激活所导致的自身免疫性疾病方面具有应用前景。     

大熊猫血清淀粉酶正常参数测定

大熊猫的生化指标测定,董全等在1991年已作过详细报道。但对于健康大熊猫的血清淀粉酶参数尚未见报道。我们对于21例健康大熊猫血清淀粉酶进行了测定,并提出正常参数值。(一)标本来源大熊猫21例,年龄2—8岁,平均4.7岁,其中雌性15例,雄性6例。两例系贵阳动物园喂养,其余19例均为成都动物     

绵羊红细胞的质量对静脉注射用人免疫球蛋白抗补体活性测定的影响

为了分析IVIG抗补体活性测定出现负值与绵羊红细胞质量的关系。采用CH50试验测定IVIG ACA时,在被检样品和其他试验条件相同的情况下,比较了被污染的和未污染的绵羊红细胞对IVIG抗补体活性测定的影响。结果显示,使用被污染的绵羊红细胞(作为试验材料时所得的)检测10份样品ACA(%)均为负值;使用未污染的绵羊红细胞未出现负值。提示被污染的绵羊红细胞干扰了抗补体活性测定,从而引起CH50试验结果出现偏差。     

补体系统功能研究方面的一些新进展

补体系统功能方面的研究近年来非常活跃。本文主要介绍以下几方面的一些新进展:1.补体膜攻击机制。2.生物膜的组成和补体的活化。3.补体活化通路中的活性小片段。4.补体对巨噬细胞的作用。5.补体受体。 6.C_(1q)。7.补体和心血管疾患。8.补体活化的调节。     

圈养大熊猫全年食竹量观察

1982—1983年,我们在卧龙自然保护区就圈养大熊猫对竹子的食量作了为期一年的试验观察。材料与方法在饲养场选择4只健康的大熊猫,2♀、2♂,年龄3—23岁。冷箭竹(Bashania fangiana)和拐棍竹(Fargesia robusta)取自海拔2500米的英雄沟。给受试熊猫白天喂精料(黄豆、玉米和大米混合料500—700克,鸡蛋1个,奶粉50克),晚上喂竹子7.5—10公斤。投竹时称重,翌日晨收集剩余竹子称重。结果圈养大熊猫日食竹量为2.0—4.2公斤,平均3.1公斤(见表),与胡锦矗(1985)报道的野生大熊猫的日食竹量(12.5公斤)相比,差异极显著。老年熊猫食竹量较低,各月平均日食…     

重组Bt伴胞晶体蛋白Cry5B对大熊猫西氏贝蛔虫的离体杀灭活性观察

大熊猫是中国特有的珍稀物种,西氏贝蛔虫是危害大熊猫最为严重的一种肠道寄生性线虫。针对目前长期药物驱虫导致的大熊猫西氏贝蛔虫耐药及生态污染问题,苏力菌(Bacillus thuringiensis,Bt)晶体蛋白Cry5B因其特异的线虫杀灭活性,是一种理想的新型抗蛔虫病药物候选。本研究拟通过原核表达方式产生Bt YBT-1518重组Cry5B蛋白,并评价其对大熊猫西氏贝蛔虫的离体杀灭活性。结果表明,Bt YBT-1518 Cry5B由1 246个氨基酸组成,分子量(MW)为139.889 kDa,包含Endotoxin_N、δ-Endotoxin_C、Endotoxin_C、Endotoxin_C2、Cry1Ac_D5结构域,与Bt PS86Q3晶体蛋白关系最近。重组Cry5B蛋白在IPTG浓度为1.4 mmol/L时表达量最大,表达于菌体上清液。离体杀灭活性实验表明,重组Cry5B蛋白的大熊猫西氏贝蛔虫抑杀效果具有显著的剂量依赖性,对肠道L4期幼虫第3天的ED₅₀值为14.5 μg/mL,第7天的ED₅₀值为0.16 μg/mL;但对成虫更敏感,仅作用2 d便可显著下降虫体活性,直至死亡,证实重组Cry5B蛋白对大熊猫蛔虫具有较强的毒杀作用。这些结果为后续论证Bt YBT-1518重组Cry5B蛋白可以作为一种新型、环保的抗大熊猫西氏贝蛔虫病药物提供了数据参考。     

D- 二聚体、血流变学指标对结缔组织病患者诊疗价值研究

目的:探讨分析结缔组织病合并多器官损害患者D-二聚体(DD)、血流变学指标(血浆纤维蛋白原/血浆纤维蛋白降解产物FDP、全血黏度、血浆黏度)水平及指标变化对结缔组织病合并多器官损害患者病情活动期的诊疗价值。方法:本研究共纳入120例患者,其中活动组患者60例,病情缓解组患者60例,分别测定二组患者DD、血流变学指标水平,并采用t检验、灵敏度与特异度进行统计学分析与描述。结果:与缓解组比较,活动组DD、纤维蛋白降解产物(FDP)、全血黏度、血浆黏度、γ球蛋白、补体C4、ESR均具有统计学差异(P0.01),补体C3组间差异也具有统计学意义(P0.05)。各指标对于疾病活动性诊断的准确性,其DDFDP补体C3、C4γ-球蛋白血浆黏度全血黏度ESR。结论:结缔组织病合并多器官损害患者,其纤溶水平、微循环状态与疾病活动密切相关。     

蛇岛产蝮蛇(Agkistrodon halys pallas)蛇毒的柱层析分离及各组分的生理活性测定

应用二乙氨基乙基葡聚糖A—50(DEAE-Sephadex A—50)和盐浓度直线梯度洗脱的方法,对蛇岛产蝮蛇毒进行了柱层析分离,获得16个蛋白峰,并对柱层析的各组分进行了致死活性、出血活性、徐缓激肽释放活性及7种酶活力的测定。     

多胺及其在植物体内的生理作用

多胺研究的历史及其在植物体内的分布多胺(polyamines)是一类广泛存在于原核生物及真核生物中的生物学活性物质,是一类低分子脂肪族含氮碱。常见的多胺(包括二胺)有腐胺(putrescine,put)H_2N(CH_2)_4NH_2、尸胺(cadaverine,cad)H_2N(CH_2)_5NH_2、亚精胺(spermidine,spd)H_2N(CH_2)_4NH(CH_2)_3NH_2和精胺(spermine,spm)H_2N(CH_2)_4NH(CH_2)_4NH(CH_2)_3NH_2。亚精胺又称精脒,是     

甲基乙烯基醚和2′(3′)-O-甲氧乙基-5′-核糖核苷二磷酸的合成

本文报导了一种制备甲基乙烯基醚(MVE)的简易方法,其合成反应途径是:(1) CH_3CHO+CH_3OH+HCl -20℃→CH_3OCH(Cl)CH_3+H_2O(2) CH_3OCH(Cl)CH_3+C_5H_5N -20°→[CH_3OCH(Cl)CH_3·C_5H_5N](3) [CH_3OCH(Cl)CH_9·C_5H_5N] -120°→CH_3OCH=CH_2+C_5H_5N·HCl 在三氟乙酸催化作用下,MVE与各种5’-核苷二磷酸(ppN)反应,用纤维素柱层析方法分离反应产物,制备了五种2’(3’)-O-甲氧乙基-5’-核苷二磷酸(ppN-2’(3’)-O-ME):ppA-2’(3’)-O-ME,ppG-2’(3’)-O-ME,ppC-2’(3’)-O-ME,ppU-2’(3’)-O-ME,以及ppΨ-2’(3’)-O-ME,产率一般为50～70%。     

大熊猫神经营养素-4基因在大肠杆菌中的表达

本通过PCR技术,直接从大熊猫基因组DNA上克隆得到其神经营养素—4的成熟肽编码序列,通过序列分析发现,该基因在进化上具有较高的保守性。将神经营养素—4成熟肽完整编码序列克隆至pGEX—4T—3表达载体,并经IPTG诱导在大肠杆菌中进行原核生物表达,获得了大熊猫重组蛋白神经营养素—4。重组表达蛋白经纯化后,进行大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞神经营养因子的活性鉴定,发现其能够诱导神经细胞分化产生突触,具有预期的生物学活性。对大熊猫神经营养素—4的基因工程研究,为大熊猫癫痫的基因治疗奠定了基础。     

大熊猫精浆中谷草转氨酶活性影响因素的初步探讨

在2004年度大熊猫繁殖季节(2～5月),对5只不同年龄雄性大熊猫的精浆中谷草转氨酶(GOT)活性进行测定,并初步探讨其含量高低的影响因素。结果显示:大熊猫精浆的GOT平均活性为194.89±77.40IU/100mL,GOT含量高低与精子活力呈极显著负相关(r=-0.66,P<0.01);随着年龄增加,GOT活性有升高趋势;在繁殖季节,GOT有下降趋势。     

氯胺酮及其复合麻醉大熊猫的比较研究

本文用氯胺酮和氯胺酮合用安定、二甲苯噻嗪或芬太尼四种配方进行38例次大熊猫(AILUROPO-DA MELANOLEUCA)麻醉,并通过比较显示合用后优点。麻醉期间监察心率,呼吸率和体温以及观察大熊猫麻醉体征,进一步探明氯胺酮麻醉大熊猫引起呕吐等不良反应。 材料和方法 大熊猫15头(4 11),均为动物园中健康观赏动物,年龄5—16岁。性平均体重 115kg(109—141);性平均体重88.6kg(79—105)。药物有四种:(1)氯胺酮是一种环己酮衍生物,起分离麻醉作用;(2)芬太尼是一种短效强麻醉性镇痛剂;(3)安定是苯二氮(十卓)类衍生物,具有镇     

野化培训大熊猫幼仔的食性转换

本文以2010—2020年15只母兽带仔野化培训的大熊猫幼仔为研究对象,基于红外视频监控系统观察和音频颈圈解译获得的行为资料、GPS颈圈跟踪定位采集的粪样数据,分析了野化培训大熊猫幼仔的行为发育进程和食性转换特征。结果表明：随着野化培训大熊猫幼仔的生长发育,与觅食和警戒相关的行为得到充分发育,且具有较强的时间关联性,包括食乳、爬行、走动、玩耍物品、爬树、咬玩竹子、饮水和采食竹子等。8～10月龄的大熊猫幼仔开始取食竹子,其发育性食性转换过程划分为3个阶段：食乳期(1～7月龄)、食母乳—食竹子转换期(8～28月龄)和食竹期(29～39月龄),其中转换期细分为关键期(8～18月龄)和过渡期(19～28月龄)。从统计检验来看,不同食性阶段间差异显著;过渡期的大熊猫幼仔可离开母兽独立生活,此阶段大熊猫幼仔食物组分比例与食竹期相比无显著差异。野化培训大熊猫幼仔的季节性食性转换规律与带仔母兽和野生大熊猫具有相似的格局,即春季主要取食竹笋,夏、秋季则以嫩竹茎和竹叶为食,冬季采食竹叶与竹茎。     

不同粗饲料比例的日粮饲喂亚成体大熊猫的平衡实验

国内外对移地保护饲养中大熊猫 (Ａｉｌｕｒｏｐｏｄａｍｌａｎｏｌｅｕｃａ)的营养学进行过一定量的研究[1～ 6] ;其中日粮中竹子 (粗饲料 )的比例不同能否对亚成体大熊猫的消化、代谢造成显著差异的研究在国内外尚未见报道。因此 ,在数家动物园和大熊猫研究中心的日粮配方基础上 ,设计了一种常规配方和一种新配方 (竹子比例加大 ) ,以期对以上问题作初步探讨。另外 ,由于大熊猫数量稀少 ,以往的研究选取的大熊猫数难以真正满足统计学对实验动物数目的要求 (单组不小于 3只 ) ,本研究首次努力选取两组各 3只、共 6只实验大熊猫。有关结果对…     

云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒因子在灵长类动物内应用的免疫原性研究

眼镜蛇蛇毒因子(CVF)能特异性清除机体循环中的补体C3,从而可能在防治补体介导的损伤或疾病中发挥重要的治疗作用.云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒因子(Y-CVF)较文献报道的其他各种CVF具有更高的活性和较少的用药量.为探讨Y-CVF静脉使用是否诱导灵长类动物体内产生特异性中和抗体和异种天然抗体,给2只正常食蟹猴每两周静脉注射一次治疗剂量(0.05mg/kg)的Y-CVF,共4次,检测注射前后不同时间点血清内补体C3水平、总补体活性(CH50)、抗Y-CVF抗体和抗猪内皮细胞异种抗体的变化.结果显示,前2次注射Y-CVF后均有良好的清除补体效果,第3次注射Y-CVF后补体仪被部分灭活,第4次注射Y-CVF后则基本无效.免疫印迹和酶联免疫吸附试验均证实特异性抗Y-CVF抗体产生,且其滴度随着Y-CVF注射次数增加而递增.多次注射Y-CVF后,并没有在血清内榆测到明显的抗猪内皮细胞抗体的变化.因此,多次静脉注射Y-CVF能诱导灵长类动物产生特异性抗体,从而导致Y-CVF失效,但未发现抗α-Gal异种天然抗体明显增加.     

眼镜蛇毒中一个新的抗补体蛋白质的分离纯化和性质研究

免疫性疾病、急性肺损伤、缺血再灌注损伤等病征的发生与补体异常激活密切相关。抗补体药物研究是新药开发的热点之一。本研究旨在从中华眼镜蛇毒中发现并分离纯化获得新的抗补体活性蛋白质,并对其理化性质和生物学活性加以研究。在抗补体活性追踪的指导下,采用蛋白质层析技术对眼镜蛇毒进行分离纯化;利用MALDI-TOF-MS、SDS-PAGE和葡聚糖凝胶过滤法测定目标蛋白质的纯度及分子量;等电聚焦凝胶电泳法测定其等电点;采用Edman降解法测定目标蛋白质的N-端氨基酸序列;测定目标蛋白质对补体经典途径和旁路途径的抑制活性以及可能的机制;采用MTT法和SRB法检测目标蛋白质对肿瘤细胞的杀伤作用;测定目标蛋白质对多种来源红细胞的溶血活性;采用KB平板扩散法检测抗菌活性。结果表明,通过SP Sephadex C-25阳离子交换层析和RP-HPLC C18反相层析,从中华眼镜蛇毒中分离纯化获得一个均一的抗补体蛋白质,将其命名为CTX-CI。还原性SDS-PAGE测得CTX-CI的表观分子量为12. 7 kD,凝胶过滤法测得分子量为9. 7 kD,MALDI-TOF-MS测得精确分子质量为7. 0 kD;变性条件下测得CTX-CI的等电点为9. 81;N-端氨基酸序列为LKCH。相关活性测定结果表明,CTX-CI能有效抑制人血清补体经典途径,其IC50为0. 046 g/L,但对补体旁路途径无明显抑制作用;机制研究表明,CTX-CI能抑制补体经典途径C3转化酶的形成。同时,CTX-CI对肿瘤细胞株A549、K562和MCF-7细胞表现出抑制作用,其IC50分别为0. 32 g/L、0. 58 g/L、0. 63 g/L;对豚鼠红细胞有轻微的溶血作用;能抑制枯草芽孢杆菌和藤黄微球菌的生长。综上所述,本研究从中华眼镜蛇毒中分离纯化出一个新的抗补体蛋白质-CTXCI,其理化性质和生物学活性表明其属于细胞毒素,CTX-CI能明显抑制补体经典途径,其机制与抑制经典途径C3转化酶的形成有关。     

眼镜蛇毒中一个新的抗补体蛋白的分离纯化和性质研究

免疫性疾病、急性肺损伤、缺血再灌注损伤等病征的发生与补体异常激活密切相关。抗补体药物研究是新药开发的热点之一。本研究旨在从中华眼镜蛇毒中发现并分离纯化获得新的抗补体活性蛋白质,并对其理化性质和生物学活性加以研究。在抗补体活性追踪的指导下,采用蛋白质层析技术对眼镜蛇毒进行分离纯化;利用MALDI-TOF-MS、SDS-PAGE和葡聚糖凝胶过滤法测定目标蛋白质的纯度及分子量;等电聚焦凝胶电泳法测定其等电点;采用Edman降解法测定目标蛋白质的N-端氨基酸序列;测定目标蛋白质对补体经典途径和旁路途径的抑制活性以及可能的机制;采用MTT法和SRB法检测目标蛋白质对肿瘤细胞的杀伤作用;测定目标蛋白质对多种来源红细胞的溶血活性;采用KB平板扩散法检测抗菌活性。结果表明,通过SP Sephadex C-25阳离子交换层析和RP-HPLC C18反相层析,从中华眼镜蛇毒中分离纯化获得一个均一的抗补体蛋白质,将其命名为CTX-CI。还原性SDS-PAGE测得CTX-CI的表观分子量为12.7 kD,凝胶过滤法测得分子量为9.7 kD,MALDI-TOF-MS测得精确分子质量为7.0 kD;变性条件下测得CTX-CI的等电点为9-81;N-端氨基酸序列为LKCH。相关活性测定结果表明,CTX-CI能有效抑制人血清补体经典途径,其IC50为0.046 g/L,但对补体旁路途径无明显抑制作用;机制研究表明,CTX-CI能抑制补体经典途径C3转化酶的形成。同时,CTX-CI对肿瘤细胞株A549、K562和MCF-7细胞表现出抑制作用,其IC50分别为0.32 g/L、0.58 g/L、0.63 g/L;对豚鼠红细胞有轻微的溶血作用;能抑制枯草芽孢杆菌和藤黄微球菌的生长。综上所述,本研究从中华眼镜蛇毒中分离纯化出一个新的抗补体蛋白质CTX-CI,其理化性质和生物学活性表明其属于细胞毒素,CTX-CI能明显抑制补体经典途径,其机制与抑制经典途径C3转化酶的形成有关。     

圈养大熊猫肠道微生物分离、鉴定及细菌耐药性研究

对中国卧龙自然保护区大熊猫研究中心-碧峰峡基地64只大熊猫分别采取粪样,用选择性培养基分离大肠杆菌、沙门氏菌,根据形态特征及16S rDNA序列对菌株进行鉴定;用PDA培养基分离真菌,真菌通用引物ITS4、ITS5进行扩增鉴定。采用K-B法(CLSI)药敏试验测试大肠杆菌和沙门氏菌对18种药敏纸片的耐药性。形态学与rDNA-ITS序列鉴定表明,共分离到真菌19株,鉴定为8个属。分离出大肠杆菌88株,沙门氏菌47株;大肠杆菌对各抗生素的耐药率为0%~35.22%,耐药率为TET(35.22%)、AML(12.50%)、S3(12.50%),共产生17种耐药谱,其中TET、AML-TET谱型占优势;沙门氏菌对各抗生素的耐药率为0%~42.55%,耐药率为TET(42.55%)、AML(40.43%)、S3(38.30%),也产生了17种耐药谱,AML和AML-TET谱型占优势。通过对细菌和真菌的分离鉴定以及细菌的耐药性试验,了解大熊猫肠道微生物与不同个体的关系,为研究大熊猫的营养及消化等奠定基础,对预防和诊断大熊猫肠道疾病,提高大熊猫的存活率提供依据。     

基于过程模型的青藏高原湿地甲烷排放格局评估

甲烷(CH_4)是大气中最丰富的碳氢化合物,是仅次于二氧化碳(CO_2)的温室气体。湿地是甲烷的重要来源,在全球碳循环中发挥着重要作用,其排放的甲烷占所有天然甲烷排放源的70%,占全球甲烷排放总量的24.8%。青藏高原平均海拔4000 m以上,占有中国约三分之一的湿地。近几十年来,由于全球气候变暖和降水增加,该地区甲烷排放率和湿地面积都发生着巨大变化,因此,青藏高原湿地CH_4排放的长期变化在很大程度上仍存在较大的不确定性。利用TRIPLEX-GHG模型模拟了青藏高原湿地1978—2008年CH_4排放的动态特征,研究结果表明:(1)1978—2008年青藏高原湿地CH_4排放速率呈逐渐增加趋势。(2)青藏高原大多数湿地区域CH_4排放速率为0—6.13 g CH_4 m~(-2 )a~(-1);东北部分湿地区域CH_4排放速率为6.14—20.19 g CH_4 m~(-2 )a~(-1);较高的CH_4排放速率分布于青藏高原南部湿地区域,为56.14—74.97 g CH_4 m~(-2 )a~(-1)。(3)青藏高原湿地CH_4排放量在1978、1990、2000年和2008年分别为0.21、0.23、0.27和0.32 Tg CH_4 a~(-1)。在1978—1990年,尽管CH_4排放速率增加,但湿地面积减少,因此这一时期青藏高原湿地CH_4排放量并未发生明显变化。随后由于降水增加和冰川融化,使得湿地面积逐渐增加,青藏高原湿地CH_4排放量也呈现增加趋势。