柑橘凤蝶细胞克隆株RIRI-PX1-C24的生物学及重组蛋白表达特性

【目的】研究柑橘凤蝶Papilio xuthus细胞系RIRI-PX1的单细胞克隆株RIRI-PX1-C24的生物学和重组蛋白表达特性。【方法】用野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(wild-type Autographa californica multiple nucleopolyhedrosis virus, wt-AcMNPV)侵染RIRI-PX1-C24与RIRI-PX1,检测细胞对野生型病毒的敏感性;使用重组绿色荧光蛋白杆状病毒(AcMNPV-GFP)、重组β-半乳糖苷酶杆状病毒(AcMNPV-Gal)以及重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(AcMNPV-SEAP)分别侵染细胞系RIRI-PX1-C24和RIRI-PX1,在之后的24, 48, 72, 96, 120, 144和168 h检测3种重组蛋白的表达量;通过简单重复序列区间(inter simple sequence repeat, ISSR)标记比较RIRI-PX1-C24与RIRI PX1的遗传相似性。【结果】亲本细胞系 RIRI-PX1和克隆株RIRI-PX1-C24均能被wt-AcMNPV侵染,其中RIRI-PX-C24对wt-AcMNPV的敏感性较RIRI-PX1有显著提高。3种重组蛋白均能在2个细胞系中表达,其中重组绿色荧光蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平远高于在亲本细胞系RIRI-PX1中的表达水平,但重组β-半乳糖苷酶蛋白和重组分泌型碱性磷酸酶蛋白在RIRI-PX1-C24中的表达水平较在RIRI-PX1中的无显著提高。用10条ISSR引物进行的RIRI-PX1-C24和RIRI-PX1 2个细胞系的指纹图谱分析中,4条引物扩增条带在这2个细胞系间存在差异;2个细胞系的遗传相似性范围在0~83.33%之间,说明克隆株及其亲本细胞系在基因型上存在差异。【结论】通过对柑橘凤蝶细胞系RIRI-PX1进行单细胞克隆,确实获得了使重组绿色荧光蛋白表达水平有显著提高的克隆株RIRI-PX1-C24,其利用价值仍需进一步的研究。     

家蚕胚胎细胞系Bm-Em-1的建立和特性研究

昆虫细胞系在病毒生物学、 基因功能的研究以及杆状病毒表达系统生产重组蛋白的应用中发挥着重要的作用。本研究由家蚕Bombyx mori “大造”品种反转期胚胎建立了一株细胞系Bm-Em-1, 在含10％胎牛血清的TNM-FH培养基中已传代40余代。显微观察表明, 细胞形态主要为圆形和短梭形, 细胞染色体呈短棒状和颗粒状, 数量多、 异倍化, 符合典型的鳞翅目昆虫细胞染色体特征。RAPD鉴定结果表明, 该细胞系来源于家蚕胚胎, 其扩增谱带与BTI-Tn5B1-4和Sf-9等细胞系明显不同。生长曲线测定结果表明, 第28代细胞的群体倍增时间为82.2 h。病毒敏感性测定显示, 该细胞系不能被苜蓿银纹夜蛾Autographa californica核型多角体病毒（AcMNPV）感染, 但对家蚕核型多角体病毒（BmNPV）高度敏感, 96 h的感染率为91.3％。结果说明该细胞系可作为家蚕病毒离体复制、 BmNPV表达系统以及家蚕基因功能研究的理想材料。     

一株新的致倦库蚊细胞系的建立与鉴定

【目的】以致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus初孵幼虫组织为材料建立细胞系并对其进行分子鉴定。【方法】将实验室筛选的对硫磷抗性的致倦库蚊深桂品系的初孵幼虫剪碎后放入添加20%胎牛血清的改良M199培养基原代培养,并对原代细胞用胰蛋白酶传代培养成细胞系;通过显微镜观察其生物学特性以及DNA扩增指纹图谱和内转录间隔区序列鉴定其组织来源。【结果】该细胞系Cxq-1在M199完全培养基中生长良好,已成功传代培养12个月,并于液氮中冻存,并多次成功复苏。通过DNA扩增指纹图谱鉴定,Cxq-1与实验室培养的其他昆虫细胞DNA指纹图谱的条带各异,表明确为同源昆虫致倦库蚊细胞系。通过内转录间隔区序列测定技术鉴定,Cxq-1的r DNA-ITS1和r DNA-ITS2序列与Gen Bank中致倦库蚊相应核酸序列的一致性大于99%,表明其来源组织确为致倦库蚊。【结论】新建立的蚊初孵幼虫细胞系Cxq-1确为致倦库蚊细胞系。该细胞系为实验室今后开展杀虫剂抗性分子机制、蚊媒病毒、寄生虫等研究提供了重要平台。     

基于对虾白斑综合症病毒极早期启动子的新型杆状病毒表达载体的构建与分析

摘要：【目的】构建携带有受杆状病毒多角体启动子控制的疱疹性口腔炎病毒糖蛋白(vesicular stomatitis virus glycoprotein, VSV G)和受白斑综合症病毒极早期基因(immediately-early gene 1,ie1)启动子控制的绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)两个表达阅读框的新型重组病毒vAc-G-EGFP,分析其在无脊椎动物和脊椎动物细胞系中表达报道基因的能力。【方法】 利用Bac-To-Bac 系统构建重组杆状病毒,利用病毒感染或转导实验介导报道基因在待测细胞系中的表达,用荧光显微镜和免疫印迹技术分析报道基因在待测细胞系中的实时表达情况。 【结果】成功构建了分别含VSV G 和 ie1启动子两个阅读框的重组杆状病毒vAc-G-EGFP,发现vAc-G-EGFP可以在无脊椎和脊椎动物细胞系中有效表达报道基因EGFP,免疫印迹实验显示,在不同时间点EGFP于这两类细胞中的表达存在差异。【结论】 基于白斑综合症病毒ie1启动子并携带有VSV G表达框的单一杆状病毒载体可以实现同时在不同种类细胞系中有效表达外源基因。本文构建的新型杆状病毒表达载体有希望普遍应用于基础和应用生物学研究。     

苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒fp25k基因的改造及用于稳定转化Sf9昆虫细胞系

【目的】苜蓿丫纹夜蛾核型多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)在昆虫细胞中连续传代以后,会出现从多多角体表型到少多角体表型的转变,这种转变与一个编码25 kDa蛋白的基因（few polyhedra, fp25k）突变失活有关。杆状病毒的fp25k基因突变后产生的包涵体（多角体）衍生病毒粒子变少而出芽型病毒粒子增加,会降低外源基因在杆状病毒表达系统中的表达。本研究拟改造fp25k并构建能持续表达FP25K蛋白的转基因昆虫细胞,以克服杆状病毒, fp25k基因易突变导致的表达系统缺陷。【方法】本实验通过改造杆状病毒, fp25k基因在细胞传代过程中容易产生突变的位点,得到 mfp25k,并将mfp25k构建到pIZT/V5-His载体上,重组载体转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选逐步淘汰未成功转化的Sf9细胞。【结果】成功改造AcMNPV的, fp25k基因的TTAA位点,得到pIZT-mfp25k重组载体。重组载体成功转染Sf9细胞,通过Zeocin抗性筛选后获得基因组中带有mfp25k的Sf9-mfp25k稳定的转基因细胞系。用AcMNPV的fp25k突变型病毒AcP2感染转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系与正常Sf9细胞,发现转基因Sf9-mfp25k昆虫细胞系表达的FP25K蛋白可弥补病毒, fp25k基因突变的缺陷。【结论】建立的Sf9-mfp25k转基因昆虫细胞系通过细胞表达FP25K蛋白,可以弥补因杆状病毒fp25k基因突变产生的缺陷。研究结果为构建稳定的杆状病毒 昆虫细胞表达系统提供了新途径。     

重组人可溶性PDGFRβ/Fc在昆虫细胞Sf9中的表达

【目的】利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达血小板源性生长因子受体β (PDGFRβ)链膜外区与人IgG Fc片段的可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc,并检测重组蛋白的特异性和生物活性。【方法】采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒pFastbac-sPDGFRβ/Fc,转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,使目的基因与杆状病毒基因组DNA发生位点特异性重组,获得重组病毒DNA,将其通过脂质体转染昆虫细胞Sf9获得重组病毒。将该重组病毒感染Sf9无血清细胞系,在Sf9细胞中表达sPDGFRβ/Fc,对表达产物进行Western blotting检测和Protein A亲合层析纯化,并进一步通过MTT法检测获得的重组蛋白生物学活性。【结果】重组病毒感染Sf9细胞后,经Western blotting分析,能检测到一条分子量约为97 kDa的特异性条带,与目的蛋白大小相符。通过Protein A亲和层析,获得了纯度达75％以上,表达量为1 μg/mL细胞培养上清的重组融合蛋白,MTT结果显示该重组融合蛋白sPDGFRβ/Fc具有抑制PDGF刺激的Balb/c 3T3细胞增殖的能力。【结论】具有生物活性的重组可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc可在昆虫细胞中成功地得到表达。     

新细胞系──粘虫胚胎细胞系的建立(英文)

一株新细胞系-粘虫（Mythimnaseparata）胚胎细胞系（NEAU－Ms－927311简称Ms937311）被建立。该细胞系多为梭形细胞,少数圆形,贴壁性强。细胞群体倍增时间为58．8h;接种3天后细胞增长速度加快,第5天达到最大值;染色体分析结果表明：染色体聚集成簇,棒球状,呈典型的鳞翅目昆虫细胞核型;酯酶同工酶分析有两条明显的谱带;该细胞系可被同源核型多角体病毒（MsNPV）侵染并形成多角体。     

淡黄蚊蝎蛉染色体特征及其系统发育意义

【目的】染色体特征在昆虫系统发育研究中起着重要作用。然而,长翅目(Mecoptera)蚊蝎蛉科(Bittacidae)昆虫的染色体研究却比较匮乏。【方法】通过室内饲养获得淡黄蚊蝎Bittacus flavidus Huang & Hua各龄幼虫、蛹和成虫。取淡黄蚊蝎雄性末龄(4龄)幼虫、蛹和新羽化成虫精巢细胞进行染色体制片,通过4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(4′,6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)荧光染色,研究染色体核型、减数分裂行为和性别决定机制。【结果】结果表明,淡黄蚊蝎蛉的染色体数目为2n=26+X0,染色体均具有中着丝粒,核型高度对称。二价体绝对长度为(3.20±0.07)~(1.53±0.19) μm,相对长度为(5.31±0.29)~(2.73±0.24),均呈梯度变化。淡黄蚊蝎蛉的减数分裂为交叉型,其中核的平均交叉频率为11.5,二价体的平均交叉频率为0.88。性别决定机制为XX/X0型。DAPI荧光带型显示,粗线期二价体一端呈现高亮的AT富集区块。【结论】染色体特征(包括染色体数目、染色体臂基本数和核型公式等)在蚊蝎蛉科中表现出显著变异,表明染色体重排(尤其是融合、断裂和倒位)在蚊蝎蛉科昆虫的谱系分化和染色体演化中起着重要作用。     

以杆状病毒为载体在鸡原代骨骼肌细胞中表达IBDV VP2基因

摘要：【目的】本研究旨在构建在鸡原代骨骼肌细胞中表达IBDV病毒VP2基因的重组杆状病毒。【方法】从IBDV适应细胞毒中提取RNA,用RT-PCR技术扩增VP2基因,将其克隆到自主构建的杆状病毒转移载体的CMV启动子之下,通过Bac-to-Bac系统获得VP2重组Bacmid,并将其转染Sf9昆虫 细胞,获得了VP2重组杆状病毒。重组病毒经扩增后以50个MOI感染鸡原代骨骼肌细胞,接种72h后裂解细胞收获蛋白。【结果】蛋白样品经SDS-PAGE和Western blot证实VP2蛋白获得表达,分子量约48kDa,与预测蛋白大小一致,且能被IBDV阳性血清所识别。【结论】重组杆状病毒可以有效地将VP2基因导入鸡原代细胞,并在CMV的启动下表达具有抗原性的VP2蛋白,本研究为研制IBDV及其他重要禽类传染病的杆状病毒载体疫苗奠定了基础。     

转座子介导的多角体基因表达及提高病毒粒子的感染效率

现行的杆状病毒表达外源基因的方法是将外源基因取代病毒中的多角体基因,因而得到的重组杆状病毒感染活体时不能经口感染,只能进行针刺注射,效率低且易引起活体感染其他疾病。将家蚕核型多角体病毒(Bombyx mor inucleopolyhedrovirus,BmNPV)中的多角体基因(polyhedrin,poly)及其启动子片段克隆到转座子载体pigA3GFP中,将其与辅助质粒pHA3PIG利用脂质体介导法导入家蚕细胞中,经过多次筛选获得稳定的转基因家蚕细胞。之后先将BmPAK6(含LacZ)及BmGFP(含GFP)重组病毒分别感染转基因细胞,再将得到的重组病毒经口感染5龄家蚕幼虫。结果显示,重组杆状病毒可以经口感染家蚕幼虫。这些研究表明来自于转基因家蚕细胞的poly基因表达产物可以提高重组杆状病毒经口感染家蚕率,为解决杆状病毒表达系统中重组病毒不能经口感染家蚕幼虫的问题提供新思路。     

中华蜜蜂幼虫原代细胞培养及中华蜜蜂囊状幼虫病毒在培养的细胞中的复制

【目的】建立一种适用于蜜蜂源的细胞培养方法,为蜜蜂源细胞培养和蜂病毒的研究奠定基础。【方法】比较在Grace和WH2两种昆虫细胞培养基中培养的中华蜜蜂 Apis cerana cerana 幼虫原代细胞状况,筛选出适用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的最佳培养基,并通过细胞活力比较,确定用于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养的适宜胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)浓度。在此基础上,用该原代细胞接种中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese sacbrood bee disease, CSBV）,并通过实时定量RT-PCR方法对病毒复制情况进行检测。【结果】相对于WH2培养基,在Grace培养基中生长的细胞大而圆,透明,边缘整齐,无颗粒物,活力明显高于WH2培养,且含15% FBS的Grace培养基更适合于中华蜜蜂幼虫原代细胞培养。CSBV接种在该原代细胞,能够复制增殖,同时伴随宿主细胞快速分裂。【结论】中华蜜蜂幼虫原代细胞培养基在含15%FBS的Grace中能够良好生长,并且CSBV可以在该原代细胞中进行复制。     

Expression of three reporter genes in four cell lines developed from <Emphasis Type="Italic">Papilio demoleus</Emphasis> Linnaeus (Lepidoptera: Papilionidae)

This paper used recombinant baculoviruses that carried three reporter genes, green fluorescent protein (GFP), β-galactosidase, and secreted alkaline phosphatase (SEAP), to infect four new cell lines from Papilio demoleus Linnaeus larvae (named RIRI-PaDe-1, RIRI-PaDe-2, RIRI-PaDe-3, and RIRI-PaDe-4). The expression levels of the three recombinant proteins were detected at 24, 48, 72, 96, 120, and 144 h after infection and compared with Sf9 and High Five cells to evaluate the characteristics of these four cell lines as host cells. The inoculation densities of the tested cell lines were 2?×?10⁴ cells/well (96-well plate) and 1?×?10⁵ cells/well (24-well plate), and adding a volume of virus stock resulted in an MOI of 5.0. The results showed that the four cell lines could be infected by recombinant baculovirus and that cell lysis occurred 96 h after infection. In the four tested cell lines, only a small number of RIRI-PaDe-1 and RIRI-PaDe-3 cells expressed recombinant GFP and showed green fluorescence. The expression was much lower than that of Sf9 and High Five. Comparing the intracellular and extracellular activity of β-galactosidase indicated that the P. demoleus cell system was more suitable for the expression of secreted proteins, and its extracellular β-galactosidase level was close to that of Sf9, but the expression level of SEAP was far lower than those of Sf9 and High Five.     

Establishment and characterization of cell clones from the Papilio cell line RIRI-PaDe-3 by a high-efficiency clonal method

Cell cloning is of great importance in keeping particular properties of cultured cells, and interesting cells can be selected by cloning from heterogeneous cell populations. In addition, continuous cell lines usually from primary culture are prone to heterologous constitution and genetic instability, so that supplementary cloning steps are necessary for achieving a homogenous cell population. In this study, limiting dilution culture and feeder layer culture were originally used for cloning RIRI-PaDe-3 cell line, but both failed. Afterward, we designed a cloning protocol which was composed of two steps: cells in semisolid medium with seeding density in the range of 3.05?×?10⁵–6.10?×?10⁵ cells/mL formed colonies from monodispersed cell suspensions; 40 well-dispersed colonies were removed from the suspended state by using micromanipulator system and finally scaled up. To determine whether this method can isolate cell lines possessing characteristics different from the parent population, we made an evaluation of cells monoclonal in biological characteristics. Significant differences have been found among clones isolated from the RIRI-PaDe-3 insect cell line in cell morphology, chromosome numbers, and genetic background. Thus the indicated modified semisolid medium cloning protocol was advantageous to the convenient and genuine cloning from the previously heterogeneous population.     

N-Linked glycosylation of a baculovirus-expressed recombinant glycoprotein in insect larvae and tissue culture cells

The potential of insect cell cultures and larvae infected with recombinant baculoviruses to produce authentic recombinant glycoproteins cloned from mammalian sources was investigated. A comparison was made of the N-linked glycans attached to secreted alkaline phosphatase (SEAP) produced in four species of insect larvae and their derived cell lines plus one additional insect cell line and larvae of one additional species. These data survey N-linked oligosaccharides produced in four families and six genera of the order Lepidoptera. Recombinant SEAP expressed by recombinant isolates of Autographa californica and Bombyx mori nucleopolyhedroviruses was purified from cell culture medium, larval hemolymph or larval homogenates by phosphate affinity chromatography. The N-linked oligosaccharides were released with PNGase-F, labeled with 8- aminonaphthalene-1-3-6-trisulfonic acid, fractionated by polyacrylamide gel electrophoresis, and analyzed by fluorescence imaging. The oligosaccharide structures were confirmed with exoglycosidase digestions. Recombinant SEAP produced in cell lines of Lymantria dispar (IPLB-LdEIta), Heliothis virescens (IPLB-HvT1), and Bombyx mori (BmN) and larvae of Spodoptera frugiperda, Trichoplusia ni , H.virescens , B.mori , and Danaus plexippus contained oligosaccharides that were structurally identical to the 10 oligosaccharides attached to SEAP produced in T.ni cell lines. The oligosaccharide structures were all mannose-terminated. Structures containing two or three mannose residues, with and without core fucosylation, constituted more than 75% of the oligosaccharides from the cell culture and larval samples.      

海南紫斑环蝶形态特征及生物学特性观察

【目的】明确海南紫斑环蝶Thaumantis hainana各龄期的形态特征和生物学特性以及寄主植物。【方法】野外采集海南紫斑环蝶雌成虫,通过三角袋内套卵的方式获得受精卵。采用恒温饲养箱,在26℃、相对湿度40%、光周期16L∶8D下利用获得的卵供以美丽针葵Phoenix loureirii,饲养幼虫,并进行形态特征的观察,记录其各龄幼虫的体长与头壳宽,以及其他各龄期的部分形态学数据。【结果】海南紫斑环蝶共经历卵、幼虫、蛹、成虫4个龄期。卵圆球状,光滑,直径2.5~2.8 mm;幼虫5龄, 随着幼虫龄期的增长,体长与头壳宽度逐渐增加;悬蛹;成虫雌雄同型。【结论】本研究基本明确了海南紫斑环蝶各龄期的形态特征,并观察了部分生物学特性,确定了海南紫斑环蝶的一种寄主植物为美丽针葵,完善了该物种的基本资料。     

泽兰实蝇内生殖器官的结构及其发育状况

【背景】泽兰实蝇属双翅目实蝇科,是杂草紫茎泽兰的重要专性天敌。该蝇幼虫可蛀入紫茎泽兰内部形成虫瘿,有效控制紫茎泽兰的扩散,许多国家都利用泽兰实蝇控制紫茎泽兰的危害。【方法】通过光学显微法观察了泽兰实蝇成虫内生殖器官的结构及其发育动态。【结果】雌性泽兰实蝇的内生殖系统主要由卵巢、输卵管、受精囊、雌性附腺等器官组成,雄性生殖系统由精巢、输精管、雄性附腺、射精管组成。在成虫发育过程中,雌虫卵巢的长度在第4日龄时达最大值,宽度在1日龄时达最大值,与其他日龄相比有显著差异,雌性附腺及受精囊的大小在各日龄间无显著差异;雄虫精巢长度在4日龄时达到最大,宽度在2日龄时达最大,且不同日龄间也有显著差异,而雄性附腺的大小在不同龄期间无显著差异。【结论与意义】本文阐明了泽兰实蝇的内生殖系统结构与发育状况,这有助于为提高泽兰实蝇人工繁殖效率及生物防治效果奠定理论基础。     

Establishment and characterization of a cell line developed from the neonate larvae of Papilio demoleus Linnaeus (Lepidoptera: Papilionidae)

A new cell line named RIRI-PaDe, developed from the neonate larvae of Papilio demoleus Linnaeus, was established in modified Grace’s medium supplemented with 20% fetal bovine serum. The cell line was incubated at 28°C and consisted of attached round and short spindle-like cells. The population doubling time was 55 h. The chromosome numbers varied widely from 24 to 136 with a mode of 59 at the 71st passage. Comparison of mitochondrial cytochrome c oxidase subunit I gene of the cell line and neonate larvae confirmed that the cell line was of P. demoleus origin. This cell line was susceptible to the Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus and Apocheima cinerarius nucleopolyhedrovirus.     

嗜菌异小杆线虫侵染后暗黑鳃金龟和大黑鳃金龟幼虫脂肪体和中肠组织超微结构观察

【目的】探究昆虫病原线虫嗜菌异小杆线虫沧州品系 Heterorhabditis bacteriophora strain Cangzhou侵染对蛴螬脂肪体和中肠的影响,进一步明确其对蛴螬的致病机理。【方法】采用透射电镜技术,观察暗黑鳃金龟 Hololtrichia oblita (Faldermann)和大黑鳃金龟 H. parallela Motschulsky 2龄幼虫被嗜菌异小杆线虫沧州品系侵染后其脂肪体和中肠组织的病理变化。【结果】血腔注射感染期病原线虫嗜菌异小杆线虫沧州品系悬浮液24和48 h后,观察发现暗黑鳃金龟和大黑鳃金龟2龄幼虫脂肪体和中肠的组织结构均按时序逐渐发生变化,起初表现为脂肪球变形或变小,颜色变浅,脂肪体细胞和中肠细胞内质网、线粒体肿胀,中肠微绒毛变形脱落等现象,48 h后包裹脂肪球的膜结构破裂,脂肪体细胞和中肠细胞线粒体破裂,内质网数量减少,中肠微绒毛大量脱落,同时核内染色质大量解离,核膜破裂。【结论】经昆虫病原线虫嗜菌异小杆线虫沧州品系处理后,暗黑鳃金龟和大黑鳃金龟两种金龟甲2龄幼虫脂肪体和中肠细胞均出现明显的病理变化过程,这是嗜菌异小杆线虫高效致死蛴螬的原因之一。本研究可为昆虫病原线虫作为一种生物防治手段在蛴螬的综合防治中更好地发挥作用提供理论依据。     

氯虫苯甲酰胺诱导甜菜夜蛾细胞色素P450基因上调表达

【目的】明确氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾Spodoptera exigua (Hübner)细胞色素P450基因的诱导表达作用。【方法】采用O-脱乙基香豆素法研究了低剂量氯虫苯甲酰胺处理对甜菜夜蛾幼虫中肠P450s酶活性的影响,应用Real-time PCR方法测定了其对P450基因(CYP9A9, CYP4G37,CYP4S11和CYP6B)和NADPH细胞色素P450还原酶基因(HQ852049)表达的影响。【结果】氯虫苯甲酰胺对甜菜夜蛾P450酶及相关基因的诱导作用均表现出时间效应和剂量效应,。甜菜夜蛾4龄幼虫取食0.02 mg/kg氯虫苯甲酰胺饲料至5龄, 在蜕皮后6-36 h内, 其P450s酶活性增加为对照组的1.90~2.92倍, 诱导效应高于0.01 mg/kg氯虫苯甲酰胺处理组（其P450s酶活性为对照组的1.11~1.62倍）。同时, 0.02 mg/kg氯虫苯甲酰胺处理组甜菜夜蛾中肠P450基因CYP9A9, CYP4G37和CYP6B mRNA的相对表达量分别上升为对照组的1.97~3.95, 2.46~4.29及1.53~4.48倍, NADPH细胞色素P450还原酶基因 HQ852049 的相对表达量亦增加为对照的1.85~4.08倍。【结论】结果提示,氯虫苯甲酰胺可能通过诱导3种P450基因及细胞色素P450还原酶基因 HQ852049 基因mRNA的上调表达而增强了甜菜夜蛾幼虫中肠P450s酶活性。