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粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大肠杆菌中的高效表达及快速纯化工艺的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
基因工程重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)主要用于癌症患者化疗后的粒细胞减少症.在正确克隆人G-CSFcDNA的基础上,重点对G-CSFcDNA的5′端进行了较为彻底的修饰,修饰后的基因插入pBV220载体组建成功pBV220/G-CSF/2-174高效表达载体.表达后SDS-PAGE分析其表达最高达50%以上.根据G-CSF表达形成包涵体这一特性,建立了一条简便、稳定,适用于大规模生产的分离纯化工艺流程.首先分离纯化包涵体,8mol/L尿素裂解包涵体,稀释复性蛋白,之后一步SP-SepharoseFF柱层析至均质.纯化的G-CSF比活性达3.4×108U/mg蛋白,每升表达菌液回收的G-CSF总活性达1.06×1011U.纯化产物的N-端氨基酸序列分析表明,对甲硫氨酸的去除彻底,用于人体时可能具有较小的免疫原性和毒性 相似文献
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本文应用造血祖细胞体外培养技术研究了重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM—CSF)对正常人骨髓粒单祖细胞集落(CFU—GM)形成的影响,结果表明rhGM—CSF在体外能促进细胞集落的形成,此种效应在一定范围内呈剂量依赖关系,与LEUCOMAX各剂量组相比无显著性差异。采用NBT还原试验和APAAP法观察了rhGM—CSF对U937细胞分化的影响,结果显示rhGM—CSF能抑制U937细胞的增殖,促进其分化,部分细胞具有NBT还原能力,CD116阳性细胞数增加。 相似文献
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人GM—CSF cDNA的克隆和在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
从诱导的人胚肺细胞HFL株中提取总RNA.经RT-PCR反应获取了人GM-CSFcDNA,DNA序列测定表明其顺序与文献报道完全一致。为了获得高效表达,应用PCR改造了人GM-CSF的cDNA5’端核苷酸序列,并将改造的人GM-CSF基因插入含T7启动子的质粒pET-11d构建成表达质粒pETC-5,将此质粒转化大肠杆菌株BL21(DE3)得到表达菌株BLEC4。表达菌株用0.5mol/LIPTG诱导2小时后,产生大量重组蛋白并形成包涵体。SDS—PAGE电泳图谱扫描结果表明,rhGM-CSF产量占菌体总蛋白量的16%。ELISA和TF-1细胞培养测定表明,初步纯化和复性的rhGM-CSF具有天然的hGM-CSF生物活性。 相似文献
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表达新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因的重组鸡痘病毒及其免?… 总被引:11,自引:0,他引:11
将将城疫病毒(NDV)F48E8株融合蛋白基因导入鸡痘病毒(FPV)插入载体pEGF1175-1的P7.5启动子下游,得到转移载体pFG1175-1重组质粒。采用脂质体转染技术,将该质粒转染FPV282E株感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)。,经过多次蓝斑筛选纯化,获稳定的重组病毒rFPV-NDF。间接免疫荧光试验表明,rFPV-NDF感染的CEF中表达了NDV的融合蛋白。用rFPV-NDF免疫的SF 相似文献
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庚型肝炎病毒包膜糖蛋白E2基因在昆虫细胞中的表达 总被引:2,自引:0,他引:2
用PCR扩增出HGVE2全基因,克隆进杆状病毒表达载体pFASTBACHTa中,构建成重组转座载体pFASTBACE2,转化DH10BAC大肠杆菌感受态细胞,筛选阳性菌落,抽提大分子质粒DNA,获得含HGVE2基因的重组杆状病毒穿梭载体,转染昆虫草地夜蛾Sf9细胞,出现细胞病变后,收集含有重组病毒颗粒的培养上清,重新感染草地夜蛾Sf9单层细胞及甜菜夜蛾幼虫,分别收集Sf9细胞和甜菜夜蛾幼虫体内的血淋巴细胞,进行12%SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳,可见表达的融合蛋白带,经亲和层析进行蛋白纯化,用ELISA方法检测各类血清标本,初步研究HGVE2糖蛋白的抗原性 相似文献
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DDPH[1-(2.6-二甲基苯乙氧基)-2-(3.4二甲氧基苯乙胺基)丙烷盐酸盐]是南京药科大学合成的降压新化合物,也具有降低肺动脉高压和抑制肺动脉平滑肌细胞增殖作用。本实验用细胞培养、免疫细胞化学、图像分析、3H-TdR、细胞周期测定等方法,进一步探讨DDPH对缺氧性肺动脉平滑肌细胞(PASMCS)增殖的抑制机制。结果:缺氧促进肺动脉内皮细胞(PAECs)的PDGF·BB和bFGF两种生长因子的表达(积分光密度OD值)增高。缺氧内皮细胞条件培养液(HECCM)能促进PASMCS的PDGF·BB的OD值增高,bFGF的OD值无明显改变。加药组(HEC-CM+DDPH)的PDGF·BB和bFGF的OD值均显著降低,尤以PDGF·BB的OD值减少最多.提示:DDPH能抑制HECCM引起PASMCS的PDGF·BB和bFGF表达增多和细胞增殖。结果与大鼠实验观察相符。 相似文献
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人表皮生长因子(EGF)与单核—巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)融合?… 总被引:1,自引:0,他引:1
应用基因工程技术,将EGF,GM-CSF基因克隆到pGEM-3Zf载体的EcoRI,BamHI位点上,再钭重组融合基因亚克隆到表达载体pBV220扔EcoRI,BamHI位点上,在大肠杆菌DH5α中进行表达,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot表明EG-FGM-CSF融全蛋白获得表达,并且具有EGF,GM-CSF免疫学活活。 相似文献
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小鼠2—细胞期经电融合后的早期胚胎发育 总被引:1,自引:0,他引:1
小鼠2-细胞期经电融合后的早期胚胎发育小鼠,电融合,细胞数,核型,四倍体胚胎小鼠2细胞期经电融合后的早期胚胎发育EARLYDEVELOPMENTOFMOUSEEMBRYOSPRODUCEDBYELECTROFUSIONAT2CELLSTAGE关键... 相似文献
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虎斑颈槽蛇胸腺APUD细胞的免疫组织化学观察THEIMMUNOHISTOCHEMICALOBSERVATIONOFTHETHYMICAPUDCELLSINTHESNAKERHABDOPHISTIGRINAKeywordsRhadbdophistigr... 相似文献
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逆转录病毒介导CD基因在人结肠癌细胞中表达 总被引:2,自引:1,他引:1
构建了含有大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶基因(EC-CD)的重组逆转录病毒载体LCDDSN。经PA317细胞包装后,感染人结肠癌细胞株LoVo。G418筛选得一的稳定表达EC-CD基因的细胞克隆LoVo/LCDSN。LoVo/LCDSN鹜型LoVo相比,生长曲线无明显差异,细胞形态亦无改变。LoVo/LCDSN都对5-FU很敏感(IC50约为0.5μmol/L)。表达CD基因使细胞对基本无毒性的原药5-FC 相似文献
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低氧对肺动脉内皮细胞PDGF—B链释放及平滑肌细胞生长的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
应用蛋白dotblot技术检测了低氧内皮细胞条件培养液(HECCM)和常氧内皮细胞条件培养液(NECCM)内PDGF相对含量,并利用[3H]-TdR掺入法和流式细胞术观察了HECCM和NECCM及加入特异PDGF抗体对肺动脉平滑肌细胞(PASMC)生长的影响。结果表明,HECCM中的PDGF含量明显高于NECCM;HECCM能明显增强PASMC内DNA合成,促进PASMC从Go/G1期进入S期;当预先加入PDGF-B链抗体时,则会明显地抑制HECCM对PASMC的DNA合成,阻止PASMC从Go/G1期进入S期。结果提示,低氧时PASMC增殖与肺动脉内皮细胞分泌释放PDGF增加有关 相似文献
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苏北麦田恶性杂草麦家公的生态习性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
苏北麦田恶性杂草麦家公的生态习性研究钱希(江苏省国营黄海农场,响水县,224624)ASTUDYONECOLOGICALHABITSOFBADWEEDSLITHOSPERMUMARVENSEINWHEATFIELDSOFTHENORTHJIANGSU... 相似文献
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近年来中国二叠纪古植物学研究简述刘照华李承森耿宝印(中国科学院植物研究所,北京100093)ADVANCESOFPALAEOBOTANICALRESEARCHESOFPERMIANINCHINALiuZhao-huaLiCheng-senGengB... 相似文献
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大鼠隔区一氧化氮合酶阳性神经元的分布和脑缺血后的变化 总被引:3,自引:0,他引:3
大鼠隔区一氧化氮合酶阳性神经元的分布和脑缺血后的变化DISTRIBUTIONANDISCHEMIAINDUCEDCHANGESOFNITRICOXIDESYNTHASEPOSITIVENEURONSINTHESEPTALAREAOFRAT关键词大鼠... 相似文献
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在长江沙洲上搁浅的中华白海豚 总被引:5,自引:0,他引:5
在长江沙洲上搁浅的中华白海豚STRANDINGOFANINDO┐PACIFICHUMP┐BACKEDDOLP┐HINONASANDBANKINTHEYANGTZERIVER中华白海豚(Sousachinensis,Osbeck)分布在西太平洋和印度... 相似文献
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将含有鸡传染性支气管炎病毒 S1 基因c D N A 的重组转移质粒p S X I V V I+ X3 S1 . Holte 和p S X I V V I+ X3/4 S1 . Holte 分别与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Tn N P V S V I- G D N A( O C C- ,gal+ ) 共转染草地夜蛾( Sf9) 细胞,经空斑纯化得到重组病毒 Tn N P V( X3) S1 . Holte O C C+ 和 Tn N P V( X3/4) S1 . Holte O C C+ 。将重组毒株分别感染 Tn5 B1 细胞,并进行 S D S P A G E 与 Westernblot 检测。结果表明, Tn N P V( X3/4) S1 . Holte O C C+ 在感染的细胞中高效表达了 S1 蛋白, S D S P A G E 凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后72 h S1 蛋白的表达量占细胞内总蛋白量的35 .8 % ,而 Tn N P V( X3) S1 . Holte O C C+ 感染的细胞内检测不出 S1 蛋白。经分析认为这一差异主要来自 S1 基因翻译起始位点及其附近的周围环境。 相似文献
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小牛类表皮生长因子活性肽(c-EGF)的分离纯化及性质 总被引:1,自引:0,他引:1
本文报道小牛颌下腺通过酸抽提、CM52、DE52柱层析、SephadexG75凝胶过滤及HPLC等步,分离纯化到一个分子量为6kD,等电点为4.6的小肽。该小肽类似人重组表皮生长因子(rh—EGF)的生物活性,具有刺激NRK细胞的增殖及刺激新生小鼠的睁眼、萌牙,并具有增加A431细胞膜蛋白质磷酸化的功能。氨基酸组成缺少苯丙氨酸及苏氨酸残基。我们命名它为小牛类EGF样活性肽(calfEGF-likeactivepeptide,简称c-EGF)。 相似文献