小鼠乳腺上皮细胞培养体系的建立及Heregulin-α的调控作用

旨在建立完善的小鼠乳腺上皮细胞体外培养体系,探讨Heregulin-α（HRG-α）对该体系乳腺上皮细胞增殖及代谢的影响,为进一步深入研究乳腺上皮细胞的形态、结构和功能,揭示HRG-α在小鼠乳腺发育中的作用及其规律提供理论依据.通过比较不同pH和不同血清浓度配比的生长培养液对小鼠乳腺细胞生长的影响,得出pH7.4,添加10%血清的生长培养液为乳腺上皮细胞生长的最佳条件.通过运用相差显微镜技术、MTT等研究方法进行不同取材时期乳腺上皮细胞的形态、接种存活率、倍增时间、生长曲线等生物学特性比较,获得妊娠15天为较好的乳腺细胞取材时期.采用免疫组化和RT-PCR方法对细胞重要的标志蛋白角蛋白-18进行检测,鉴定所获得的细胞为乳腺上皮细胞,成功建立小鼠乳腺上皮细胞体外培养体系.利用所建立的小鼠乳腺上皮细胞体外培养体系,采用液相色谱技术及MTT方法,初步探讨了HRG-α对小鼠乳腺上皮细胞的影响.结果表明,适宜量HRG-α对小鼠乳腺上皮细胞生长和分泌总蛋白、乳糖均有显著促进作用,0.1～20ng/mL的HRG-α可促进小鼠乳腺上皮细胞的增殖和总蛋白、乳糖含量的增加,20ng/mL时达到最大值（P〈0.01）,50和100ng/mLHRG-α抑制小鼠乳腺上皮细胞的增殖,降低小鼠乳腺上皮细胞的总蛋白、乳糖含量（P〈0.05）.     

Heregulin-α促进小鼠妊娠期乳腺上皮细胞的增殖/分化及β酪蛋白的分泌

为阐明heregulin-α（HRG-α）对乳腺发育的调控作用及其机理,采用组织培养、毛细管电泳、Western印迹、ELISA等方法,首次对小鼠妊娠期HRG-α对乳腺形态发育、β酪蛋白表达和分泌、Rab3A蛋白表达以及HRG-α诱导的信号转导途径中信号分子的磷酸化状态的影响进行了系统研究．结果表明,在妊娠期,HRG-α能够促进STAT5、p42/p44、p38和PKC的磷酸化以及Rab3A蛋白表达,刺激乳腺上皮细胞的增殖和分化,增加并维持β酪蛋白的表达和分泌．     

小鼠乳腺中瘦素及其受体的表达与作用

瘦素(Leptin)是影响乳腺发育和泌乳的自分泌和旁分泌因子. 为探讨瘦素在乳腺发育、泌乳和退化过程中的调控及作用机理, 本研究应用激光共聚焦显微技术对小鼠乳腺发育、泌乳以及退化过程中瘦素及其长型受体(OB-Rb)蛋白水平的表达定位进行检测, 并采用乳腺组织体外培养和Western blot方法研究了妊娠期、泌乳期和退化期瘦素对乳腺的作用以及乳腺发育各个时期瘦素的信号转导通路. 结果显示, 小鼠乳腺整个发育过程中瘦素和OB-Rb的表达呈显著正相关, 在青春期最高, 妊娠期下降, 泌乳期维持在低水平, 幼仔离乳后乳腺退化, 瘦素和OB-Rb的表达显著上调, 并在乳腺退化13天恢复到青春期水平; 瘦素及其受体的表达部位的变化显示瘦素专一性地诱导OB-Rb的表达, 表明瘦素通过与OB-Rb共同作用调控乳腺发育和泌乳的生理机能; 妊娠期, 瘦素与OB-Rb结合, 通过激活JAK-MAPK信号通路促进乳腺导管上皮细胞的增殖和分化; 泌乳期, 瘦素激活JAK-STAT5信号通路诱导乳腺中b-酪蛋白基因表达; 退化期, 瘦素激活JAK-STAT3信号通路启动乳腺细胞凋亡并参与乳腺组织重建过程.     

雌激素受体α在小鼠海马中的表达研究

雌激素在生殖系统、认知记忆系统、骨骼和神经的发育及其功能维持等多种生理功能中扮演了重要的作用。雌激素可以通过结合到核雌激素受体Erα、Erβ来完成其生理功能。最近通过ER敲除鼠和选择性的抑制剂研究表明Erα在海马中具有重要作用。Erα在海马中的表达是否具有年龄和性别差异的研究较少,该文研究了Erα在不同年龄、不同性别的小鼠海马中的表达,并进一步比较了Erα在卵巢去除小鼠和对照小鼠中的表达差异。研究结果揭示了Erα在海马中的表达具有年龄和性别差异,暗示了Erα的表达受到外周雌激素水平的调控。这些结果为进一步研究雌激素和Erα在海马组织中基因表达的调控过程以及相关疾病的临床治疗提供参考。     

Neuregulin／Erb信号转导通路在神经发育中的作用

Neuregulins(NRG)是一在结构上相类似的多肽家族,它们由四个不同的基因编码。NRG有三种异构体（NRG1、2和3）。这些异构体在及脑内有高表达,包括发育中的脑和成熟的脑。这些异构体中,对NRG1研究最为广泛。NRG1对神经系统的发育有多种重要的调节作用。它能促进胶质细胞的生化和分化;也能调节小脑、颗粒细胞沿胶质细胞的迁移。在突触形成过程中,NRG1可诱导以下三种受体的表达：神经肌肉接头和中枢 神经系统内的乙酰胆碱受体的表达;小脑胶质细胞中NMDA受体的NR2C亚单位的表达;小脑胶质细胞中GABAA受体的表达。近年来的研究表明,NRG受体多分布于突触后膜致密区,提示NRG可能对突触的可塑性有重要的作用。本文综述了NRG的研究进展,特别对其功能及其信号转导机制有较多的讨论。     

肿瘤坏死因子-α在乳腺肿瘤中的表达及其与影像学特征的关系

目的:检测乳腺肿瘤中肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)表达及其与影像学特征的关系。方法:利用免疫荧光和流式细胞术检测MDA-MB-231及MCF-7乳腺癌细胞中TNF-α的表达;收集82例经病理证实的乳腺疾病患者组织及其病理资料、影像学资料,通过免疫组化检测乳腺组织TNF-α的表达,并分析其表达量与病理特征及影像学特征之间的关系。结果:TNF-α在MDA-MB-231细胞中呈高表达,恶性乳腺肿瘤组织中TNF-α的表达显著高于乳腺良性肿瘤,其表达量与淋巴结转移、TNM分期相关、核磁共振(MRI)强化是否均匀、钼靶X射线的边界的平滑度形状是否规则以及B超中彩色血流信号强弱均显著相关(P0.05)。结论:乳腺肿瘤组织中TNF-α呈异常高表达,且与乳腺肿瘤的某些影像学特征密切相关。     

TNF-α及其受体在格林巴利综合征中的作用

格林巴利综合征（Guillain-Barrésyndrome,GBS）是一种以周围神经和神经根的脱髓鞘及小血管周围淋巴细胞和巨噬细胞的炎性反应为病理特点的自身免疫性疾病。目前GBS的确切病因还不十分清楚,但是越来越多的研究表明,细胞因子在GBS的发生、发展过程中起到重要的作用,其中TNF-α及其受体在GBS的发病机制中更是扮演着重要的角色。本文就TNF-α及其受体在GBS发病过程中的作用进行综述。     

人α-乳白蛋白在转基因小鼠乳汁中的动态表达图貌

利用人α-乳白蛋白基因(hα-Lac)探针从8×10⁵个噬斑中筛选出两个阳性克隆, 以此构建了包含有7.3 kb的hα-Lac的5′调控序列、2.0 kb的编码区和227 bp的牛生长激素3′UTR的乳腺表达框架. 通过显微注射方法获得5只hα-Lac转基因整合雌性小鼠. 对其中1只转基因表达量较高(达到0.3 mg/mL)的小鼠的一个泌乳期中人乳白蛋白的表达过程分析表明: 转基因并不遵从小鼠内源的α-Lac的表达图貌, 而是以转基因特异的方式表达, 表现为在分娩后的前3天转基因的表达低, 自第4天开始逐渐增高, 到第13~14天达到峰值后渐趋稳定, 并持续到泌乳期结束. 在第2个泌乳期中, 转基因的表达量与首次泌乳期的水平相当. 此外, 转基因表达小鼠的泌乳量较正常小鼠和非表达整合小鼠有一定的增加, 提示泌乳过程中较高浓度的α-Lac可能引发了产乳量的增加.     

肿瘤坏死因子α在中枢神经系统中的作用

概述了肿瘤坏死因子α（TNFα）及其受体在中枢神经系统（CNS）中的作用。TNFα在神经元和胶质细胞中的表达量与神经系统疾病的发病密切相关;TNFα与神经胶质增生、Alzheimer’s病、Parkinson病和多发性硬化症都有关系。然而;当CNS受损伤以后,TNFα能够促进神经营养因子的分泌,增强神经元的粘附和促进轴突的生长;这是它有利的一面。这种双重模式的效应与其受体亚型和激活不同的信号转导途径有关。所以,在CNS的发育中,TNFα可能是一个重要的调节因子。     

microRNA在小鼠乳腺不同发育时期差异表达谱及作用

microRNA是一类大小约22个核苷酸的非编码RNA分子,是一种广泛存在的对基因表达进行微调的分子。microRNA可以通过与靶基因mRNA的特定位点结合,抑制该蛋白的合成或诱导该mRNA的降解,从而参与基因的表达调控。一般来源于染色体的非编码区域,由大约70个核苷酸大小的可形成发夹结构的前体经Dicer酶加工而来。这类小RNA在表达上具有组织和时间的特异性,是调节其他功能基因表达的重要调控分子,在生物的生长发育过程中发挥着重要作用。因此,虽然microRNA的研究仅有很短的历史,但已成为基因表达调控研究的热点领域。以中国昆明小鼠不同发育时期的乳腺组织为实验材料,应用芯片技术及荧光定量PCR技术,分析发育不同时期的乳腺组织microRNA差异表达图谱。本文研究发现microRNA在乳腺不同的发育时期表达图谱不同;与青春期、退化期比较,妊娠期、哺乳期有十余种microRNAs表达上调,20余种microRNAs表达下调;microRNAs在乳腺发育和泌乳周期中发挥重要的作用。     

乳腺发育激素对小鼠乳腺中FGF7，FGF10及其受体表达的影响

为阐明雌激素、孕酮以及催乳素3种乳腺发育激素对乳腺发育的调节机制,本研究以昆明鼠为实验材料,通过体外实验,系统地研究了乳腺发育激素对不同时期乳腺中FGF7,FGF10及KGFR表达的影响．结果表明,17β-雌二醇能引起小鼠乳腺中FGF7表达上调;孕酮对小鼠乳腺中的FGF7表达没有影响;在小鼠乳腺发育的妊娠期与泌乳期,催乳素能弓I起FGF7表达显著上调．17β-雌二醇能引起小鼠乳腺中的FGF10表达上调;在青春期小鼠乳腺发育,孕酮和催乳素能显著降低FGF10的表达;在妊娠期小鼠乳腺发育,催乳素能显著增加FGF10的表达．当17β-雌二醇在体内所占比例较高时,会降低KGFR的表达;而17β-雌二醇在体内所占比例较低时,反而会增加KGFR的表达．低浓度孕酮使KGFR的表达增加,高浓度孕酮对于KGFR的表达没有影响．在妊娠期以及泌乳期,对于小鼠乳腺发育,催乳素能显著升高KGFR的表达．     

磷脂酶Dα在拟南芥低温驯化过程中的作用途径分析

本研究对低温驯化和未经低温驯化的磷脂酶α基因敲除突变体与野生型拟南芥植株进行冻害胁迫处理后,通过观测植株表型和膜离子渗漏率的变化,鉴定两种基因型植株的抗冻性.结果发现,低温驯化后,PLDα敲除突变体的抗冻性明显低于野生型,表明PLDα参与植物的低温驯化过程.对其作用途径进行分析发现,PLDα不参与低温驯化过程中ABA信号转导作用,也没有参与SOD、CAT和POD等3种抗氧化酶活性的调节,但是参与低温驯化过程中膜稳定性调节和渗透调节过程.     

雄激素受体信号转导途径及其在前列腺癌发展中的作用

前列腺癌是西方男性发病率最高的癌症之一,在采用雄激素阻断疗法后,大部分患者的病情可得到控制,但经过一段时间又会转变为雄激素非依赖型前列腺癌。雄激素受体(AR)在前列腺细胞中扮演重要的角色,它可调节大量基因的表达。在前列腺癌由雄激素依赖型向雄激素非依赖型的转变过程中,AR及其信号途径通过多种方式发挥作用,AR基因的扩增、AR的突变,以及与共激活子之间作用的改变都可能使细胞获得雄激素非依赖型的生长能力。此外,AR还受到多肽生长因子和细胞因子等的调节,表现激素非依赖型的转录激活活性。AR在前列腺癌中作用的阐明对前列腺癌的诊断与治疗有着重大的意义。     

牛α-sl酪蛋白基因序列指导htPA突变体小基因在小鼠乳腺中的表达

将包括α－ｓｌ酪蛋白基因的启动子、ＬＡｔＰＡ小基因、α－ｓｌ酪蛋白基因下游调控序列的融合基 因经显微注射至小鼠的受精卵中,获得了５只转基因阳性鼠,其中１只转基因阳性雌鼠乳清中 ＬＡｔＰＡ的含量为０．１８μｇ／ｍｌ,说明构建的ＬＡｔＰＡ小基因能够正确表达出有生物活性的ＬＡｔＰＡ, 并且可在酪蛋白基因调控序列的指导下在小鼠的乳汁中表达。     

tPAcDNA在兔乳腺中的表达

组织型纤维原激活剂（tPA）的作用是激活血纤维蛋白酶原,从而溶解血栓。生物体内tPA的含量很低,远远不能满足临床需要。为了利用转基因动物生产tPA,需要对所用tPA乳腺表达载体pSVL－WAP－tPA2（Fig．1）进行予证。将三种特研究载体用脂质体包埋,注入中后期怀孕母兔乳腺。对乳汁、乳腺组织的mRNA和DNA分别进行检测。实验兔分娩后,每4天取乳汁冻存,ELISA检测其中tPA含量（Fig.2),泌乳期第4天最高可达600ng/ml。又,于乳腺注射第3天,手术切取部分乳腺组织,制备总RNA,以β－Casein启动子下游序列（TAC TAG…）为引物I,tPA上游序列（TTC CCA…）为引物II,做RT－PCR检测,表明：此时已有tPAmRNA转录（Fig.3)。再,于停乳后30天左右,切取部分乳腺制备DNA,以tPAcDNA为探针,做Southern杂交检测。表明：无tPA整合,仅是以附合体形式存在（Fig.4)。上述质粒直接注射技术是予证转基因用载体表达水平的快捷、简便方法。     

牛α—sl酪蛋白基因序列指导htPA突变体小基因在小鼠乳腺中的表达

将包括α－sl酪蛋白基因的启动子、LAtPA小基因、α－sl酪蛋白基因下游调控序列的融合基因经显微注射至小鼠的受精卵中,获得了5只转基因阳性鼠,其中1只转基因阳性雌鼠乳清中LAtPA的含量为0．18αg/ml,说明构建的LAtPA小基因能够正确表达出有生物活性的LAtPA, 在酪蛋白基因调控序列的指导下在小鼠乳汁中表达。     

磷脂酰肌醇3-激酶在乳腺导管不典型增生癌变过程中的表达和意义

目的探讨乳腺导管不典型增生癌变过程中PI3-K p85调节亚单位的变化.方法应用免疫组织化学S-P方法检测PI3-K p85调节亚单位在乳腺正常组织及各组病变中的蛋白表达情况.结果 PI3-K p85催化亚单位在乳腺癌组表达最为明显,其阳性表达率明显高于乳腺导管单纯性增生、不典型增生组织,差异有显著性.结论 PI3-K的表达强度在一定程度上与细胞的恶性倾向有关,可能是乳腺癌发生过程中的晚期分子事件;以PI3-K信号成分作为直接切入点设计药物将为乳腺癌的治疗提供新的靶点.     

α2肾上腺素受体的结构及其生物学功能

α2肾上腺素受体为七次跨膜的G蛋白偶联受体。该文介绍了有关α2肾上腺素受体的分型、结构和生物学功能的研究进展。     

α-雌激素受体介导的膜信号转导通路

近年来关于α-雌激素受体(ERα)介导的雌激素膜信号转导成为研究热点。ERα介导的雌激素膜信号转导通路,主要包括一氧化氮信号通路、钙离子信号通路以及蛋白激酶信号通路。这些信号转导过程中有第二信使的动员、ERα与连接蛋白的结合,非受体蛋白激酶的活化、ERα与其他膜蛋白的相互作用等多种细胞事件的参与。阐明ERα在雌激素非基因组信号转导中的作用及机制,对于开发更有效的选择性雌激素受体调节剂、改善肿瘤内分泌治疗效果,具有重要临床意义。