新生大鼠海马神经元在无血清培养液中的生长特性

用无血清培养新生大鼠海马细胞,观察神经元的生长分化,并与血清培养进行比较。结果表明:海马神经元在5％血清培养液中培养日龄较长,可达2个月,但非神经细胞增殖速度快,易影响神经元的生长分化。与血清组相比,无血清培养使非神经细胞生长缓慢,神经细胞突起分化早、伸展快,神经元可持续培养1个月。无血清培养易控制因素,有利于神经细胞生长,并具有促进分化的效应,是神经细胞分化发育研究以及单因子分析的理想实验模型。     

昆明小鼠原核胚在不同培养液中的体外发育

目的优化昆明小鼠原核胚胎体外培养系统,提高胚胎发育率.方法小鼠经超排获得原核期胚胎,制备小鼠输卵管上皮共培养系统,使用M16、CZB和KSOM培养液进行体外培养,并对体内和体外发育的囊胚细胞计数.结果在KSOM和CZB中添加胎牛血清能显著提高胚胎囊胚发育率(14.71%对85.71%;6.45%对10.81%);输卵管上皮共培养可以提高胚胎的卵裂率和囊胚发育率,同时提高胚胎质量和同步发育,小鼠胚胎在KSOMFBS中囊胚发育率达85.19%,显著高于CZB和M16.结论在小鼠输卵管上皮共培养条件下,KSOMFBS能够很好支持昆明小鼠原核期胚胎体外发育.     

大鼠前列腺上皮细胞在无血清培养液中增殖的调节

本文报道了未成年大鼠前列腺上皮细胞的无血清培养模型的建立方法,并利用该模型研究了生长因子、催素及性激素对前列腺细胞增殖功能的作用。结果表明：胰岛素、表皮生长因子、转铁蛋白、霍乱霉素和牛垂体提取物对前列腺细胞的增殖有直接的促进作用,糖皮质激素对细胞的增殖无明显影响。催乳素刺激细胞的增值,但与双氢睾酮或雌二醇无协同作用。单独的双氧睾酮或雌二醇对细胞的增殖无显著作用。     

缺氧对离体鸡胚前脑神经细胞生长的影响

在缺氧(95％N_2和5％CO_2)条件下进行8d鸡胚前脑的纯神经细胞培养。培养24,48和72h后,MTT微量比色法检测显示,甲(目替)明显减少,表明神经元已遭严重损害,同时,培养液中葡萄糖被急剧地消耗。但是,即使把糖浓度提高到800—1200mg/100ml,缺氧仍造成神经细胞死亡。结果提示,胚胎脑神经细胞对缺氧敏感,胶质细胞对缺氧神经元的保护可能不在于提供糖原。     

一种适用于骨髓瘤细胞、淋巴细胞杂交瘤细胞生长的无血清培养液CBSF

本文报道CBSF是一种运用于骨髓瘤细胞、淋巴细胞杂交瘤细胞的无血清培养液。我们成功地培养了几株骨髓瘤和杂交瘤细胞,它们能长期在其中生长繁殖传代,并保持杂交瘤细胞能持续分泌抗原特异的抗体。     

Marc-145细胞无血清培养液组分的优化筛选

目的：对Marc-145细胞无血清培养液组分及浓度进行优化筛选。方法：采用Plackett-Burman设计和中心组合旋转设计对不同的营养成分进行优化筛选。结果：经Plackett-Burman设计,利用20组实验对14种不同营养成分进行考察,发现孕酮、抗氧化试剂、乙醇胺、维生素B12、维生素B12和脂肪酸复合剂对Marc-145细胞无血清悬浮生长的比生长速率有显著影响;针对该6种因素进行中心组合旋转实验设计,利用53组实验筛选出它们的最优使用浓度分别为孕酮5．5mg／L、抗氧化试剂250μL/L、乙醇胺2．1mL／L、维生素B12 2．86mg／L、维生素B6 44μg/L和脂肪酸复合剂215μL/L。结论：经2种实验设计方法优化,确定了Marc-145细胞无血清培养液组分及最适浓度,为无血清悬浮培养Marc-145细胞及增殖猪繁殖及呼吸综合征病毒提供了实验基础。     

汉坦病毒在原代人胚肾与人胚肺细胞中增殖及其特性的研究

近年来研究发现,汉坦病毒能在多种细胞株及人体细胞中增殖、适应.国内学者用人胚肺二倍体细胞(2BS)体外适应该病毒成功,但有关原代人胚肺、肾细胞的报道尚少.作者选用两株病毒及两种原代人胚细胞用于体外感染、观察,应用免疫荧光间接法及胶体金包埋前染色电镜技术对宿主细胞中增殖的病毒进行了动态观察及特异性定位研究,现报告如下.1 材料和方法1.1 细胞的分离和培养1.1.1 人胚细胞:取正常孕妇5—7个月水囊引产胚肾及肺组织,按常规方法分散细胞,5—7天后长满单层.1.1.2 非洲绿猴肾上皮细胞(VeroE6):由安徽省医学科学研究所倪大石惠赠.1.2     

骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖的促进作用

本文通过制备小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液(serum-free murine bone marrow endothelial cell conditioned medium, mBMEC-CM),经超滤分为分子量>10 kDa组分和<10 kDa组分,分别观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞集落生成的影响。用Wright’S Giemsa染色计数内皮细胞集落及检测骨髓内皮细胞的vWF,通过[3H]- TdR掺入量,观察mBMEC-CM原液及其组分以及外源性细胞因子对小鼠骨髓内皮细胞增殖的影响,并用分子杂交方法检测内皮细胞表达的细胞因子,从几个方面来研究mBMEC-CM对骨髓内皮细胞增殖的作用。结果显示,骨髓内皮细胞vWF 检测阳性。mBMEC-CM原液及其分子量>10 kDa组分能刺激骨髓内皮细胞集落增殖,且能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR 掺入量;分子量<10 kDa组分对骨髓内皮细胞集落增殖无明显刺激作用,也不能增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。外源加入IL-6、IL-11、SCF、GM-CSF、VEGF、bFGF 6种细胞因子能明显刺激骨髓内皮细胞集落增殖,SCF、VEGF、bFGF能明显增加骨髓内皮细胞[3H]-TdR掺入量。Atlas array膜杂交实验显示骨髓内皮细胞内源性表达GM-CSF、SCF、MSP-1、endothelin-2、thymosin β10、connective tissue GF、PDGF-A chain、MIP-2α、PlGF、neutrophil activating protein ENA-78、INF-γ、IL-1、IL-6、IL-13、IL-11、inhibin-α等细胞因子的mRNA。上述结果提示,骨髓内皮细胞无血清条件培养液对骨髓内皮细胞增殖具有促进作用。     

小鼠骨髓内皮细胞无血清条件培养液及其超滤组分对粒巨噬系祖细胞生长的影响

本研究通过传代培养小鼠骨髓内皮细胞系细胞,收集无血清条件培养液(mBMECCM),将其作多级串联超滤,获得分子量大于10、3～10、1～3、05～1kD和小于05kD超滤组分。进行粒巨噬系造血祖细胞集落形成试验,检测了它们的作用。mBMECCM和3～10kD组分对粒巨噬系祖细胞(CFUGM)生长未见明显影响,而分子量大于10kD和05～1kD组分促进CFUGM的增殖,分子量1～3kD和小于05kD组分则抑制CFUGM的增殖。这4种超滤组分对CFUGM生长的效应均有剂量依赖性。这些结果提示,在体外培养条件下,小鼠骨髓内皮细胞分泌若干种活性成分,分别对CFUGM的生长起促进或抑制作用     

转化人胚肌腱细胞力学特性研究

探讨转化人胚腱细胞９Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｈｕｍａｎ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｔｅｎｄｏｎ ｅｅｌｌｓ,ＴＨＥＴＣｓ）力学特性,以阐明在应变条件下进行细胞－支架材料复合培养时腱铁力学相容性。取人腱细胞（Ｈｕｍａｎ ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ｔｅｎｄｏｎ ｃｅｌｌｓ,ＨＥＴＣｓ）和ＴＨＥＴＣｓ,采用微吸管吸吮实验技术,测量单个细胞的粘生及其对聚乳酸（Ｐｏｌｙｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ,ＰＬＡ）和聚乳酸羟基乙酸共     

人皮肤成纤维细胞在不同培养系统中的生长代谢特性

大面积烧伤病人及多种皮肤溃疡病人很难用自体皮肤移植来进行治疗.早期治疗方法采用尸体来源的皮肤移植,但由于来源有限、且有传播疾病的危险,因此应用组织工程技术构建生物活性人工皮肤已成为近十几年来在组织工程和创伤治疗领域的研究热点,目前已有几种人工皮肤成功地走向临床[1].然而,在构建大面积皮肤组织过程中,如何大量制备皮肤种子细胞仍然是一大棘手的难题,成为人体皮肤组织工程迫切需要解决的技术关键.获得大量扩增的皮肤细胞,解决种子细胞的供应问题,是构建人工皮肤的一个关键.     

无血清细胞培养在发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒生长中的应用

目的建立无血清培养基培养Vero细胞制备发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)的工艺。方法分别采用含10%牛血清的MEM(10%MEM培养基)和无血清M2培养基(SF-M2培养基)在方瓶中培养Vero细胞制备SFTSV,比较无血清与含血清培养基培养Vero细胞制备SFTSV在病毒滴度及病毒繁殖曲线之间的差异。在生物反应器里用无血清培养的方式进行工艺放大,收获病毒原液并进行检定。结果无血清培养的Vero细胞能够满足SFTSV培养需求,与含血清细胞培养相比,单位细胞病毒产量没有降低,达到30~60个活病毒/细胞。可以实现在生物反应器的工艺放大,病毒高峰时病毒滴度均在7.0lg PFU/m L以上。结论无血清细胞培养可以应用于SFTSV的培养,有利于降低疫苗生产过程中的纯化难度,提高疫苗安全性。     

人体甲胎蛋白在麦胚无细胞系统中的生物合成

人及动物体内有些蛋白质,在胚胎中存在,而在成年期含量极低,当发生肿瘤时又大量产生。甲胎蛋白是这类蛋白之一种。正常人体血清中甲胎蛋白的含量极低,当体内产生原发性肝癌时,甲胎蛋白的水平可升高近百倍,甚至千倍以上。因此血清甲胎蛋白含量的测定,对原发性肝癌的早期发现和早期诊断具有重要的意义。我们和Ruoslahti比较了胚胎及肝癌来源的甲胎蛋白的物化性质,都证明二者相似。Gitlin用放射自显影技术证明人体甲胎蛋白是由印黄囊及肝细胞合成。原发性肝癌发生过程中肝癌细胞是重要的合成部位。但是甲胎蛋白的大量合成与肝癌发病机制的关系至今还很不清楚。深入研究其合成过程的调节控制机制,显然有其特殊的意义。而用体外无细胞系统深入研究蛋白质的合成过程比用整体或完整细胞更便于认识和分析。真核细胞的无细胞翻译系统过去较多利用     

人精浆,厌氧菌培养液在HSV—2诱导宫颈癌中的作用

本实验应用HSV-Z诱导小鼠宫颈癌的动物模型,发现人精浆或厌氧菌培养液只引起宫颈上皮轻度增生,二者混合(SB)不仅可致宫颈癌(11.5％),而且使HSV-2诱癌率从23.1％提高到50％,同时发现SB具有抑制机体细胞免疫功能的作用,抑制ConA刺激的淋巴细胞转化及NK细胞的活性。上述结果提示SB具有促癌作用,因而也讨论了SB促癌的可能机制。     

大麦胚性细胞悬浮系的建立及其生长特性

由春大麦品种“如车”种胚诱导的松脆型胚性愈伤组织经2个月的悬浮培养,成功建立分散性好、生长速度快的胚性细胞悬浮系。该系细胞直径为1-3mm,由富含淀粉粒的胚性薄壁细胞构成。经不同浓度2,4-D实验,发现2mg/L最适合该细胞系的生长。文中对成功建立大麦胚性细胞悬浮系的关键问题进行了讨论。     

植物生长物质在胚培养法挽救陈年小麦种质中的作用

以陈年小麦离体胚为外植体,MS培养基为基本培养基,附加5种植物生长物质2,4-D、NAA、KT、6-BA、GA3进行单因子和正交试验,研究植物生长物质在陈年小麦离体胚萌发中的作用。单因子试验结果表明：单独使用6-BA 1．0mg／L、GA3 2．5mg/L均能在一定程度上促进陈年小麦离体胚出芽和生根,出芽率分别为70．0％和77．5％,比对照分别提高了21．7％和29．2％;生根率分别为63．3％和72．2％,比对照分别提高了21．3％和30．2％。正交试验结果显示GA3对陈年小麦离体胚的萌发影响显著,最佳植物生长物质组合为2,4-D2．0mg／L NAA 1．1mg／L 6-BA0．5mg/L GA3 4．0mg/L,出芽率为82．5％,生根率为60．0％,比对照分别提高了32．5％和17．5％。     

Quox-1基因同源序列在人胚早期发育中的表达

以Quox-1基因的特异性片段b_2为探针,与人基因组DNA作Southern杂交,结果显示,人基因组中存在Quox-1基因的同源序列。以抗Quox-1蛋白的抗体与早期人胚胎组织的切片作免疫组化反应研究了Quox-1基因同源序列在人胚早期发育过程中的表达,结果表明其表达有明显的时间和空间特异性。胚龄30天以前,Quox-1基因的同源序列在人胚包括神经管等许多部位表达,30天以后表达部位局限于脊索、心肌细胞、生肌节、消化道上皮及周皮等处。文中讨论了Quox-1基因同源顺序对人类胚胎早期发育过程可能的调控作用。     

自研培养基在人用鸡胚狂犬病疫苗中的应用

目的评估自主研发培养基QS作为首选培养基用于冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)生产过程的可行性。方法分别制备基于自主研发培养基QS和其他3种商业化培养基(X1、X2、X3)的鸡胚成纤维细胞悬液,观察和比较细胞形态和生长特性;以Flury HEP株接种鸡胚成纤维细胞(MOI=0.003),分别通过直接免疫荧光法、蛋白质印迹法(Western blotting)和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)比较不同培养基条件下收获液中病毒滴度和G蛋白含量。结果在细胞浓度1×10~6个/mL条件下,4种培养基培养的鸡胚成纤维细胞在形态上均无显著区别;但是自主研发培养基QS和X2的病毒收获液的G蛋白含量在第4天时分别为0.66 IU/mL和0.63 IU/mL,高于X1的0.5 IU/mL和X3的0.3 IU/mL。在第6天时分别为0.92 IU/mL和0.88 IU/mL,高于X1的0.64 IU/mL和X3的0.52 IU/mL,说明基于自主研发培养基QS和X2的病毒收获液在G蛋白含量方面具有明显优势。结论自主研发培养基QS可以用于冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的生产。     

人类轮状病毒RNA在麦胚无细胞蛋白合成系统中的翻译

本文描述了筛选HRV阳性粪便样品的方法,并分离纯化有模板活性的HRV ss RNAs,然后在麦胚无细胞蛋白合成系统中进行翻译,每毫克HRV ssRNAs能合成3．5xi0‘cpm不溶于TCA的HRV各类多肽。经凝胶电泳分析,在1．1x10‘cpm的各种多肽中,相当于McCrae等人报道的VPl—vP4四种多肽位置的放射性有5．4×10’cpm,相当于VPS--VPl2八类多肽位置放射性有5．3×10’cpm左右,其数量的分布趋势与上述报道相似。