新生大鼠离体脊髓薄片神经元的细胞内记录

脊髓薄片的细胞内记录技术建立于70年代末与80年代初。一些学者先后应用这一技术就背角和侧角神经元的电生理特性,某些生物活性物质对背角神经元的作用,以及5-HT、去甲肾上腺素及肽类物质对侧角神经元的作用进行了研究。1986年以来,我们就国内的具体条件开展了这方面的工作,成功地建立了这一研究方法。     

大鼠下丘脑薄片视上核神经元的细胞内生物电记录

从成年Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠用振动切片机制备含有视上核的下丘脑冠状薄片（５００μｍ厚）,并对视上核神经元（ｎ＝１７）进行常规细胞内生物电记录。测得静息电位－６０±８ｍＶ,膜输入电阻１７３±５８ＭΩ,时间常数１０．２±３．９ｍｓ,动作电位幅度６５±１２ｍＶ,阈电位－４４±７ｍＶ,由Ｉ─Ｖ曲线测得斜率电阻１５８±６２ＭΩ,大部分细胞还显示内向整流特性。在静息电位状态下,５７％细胞保持静息,４３％有自发锋电位发放。细胞的锋电位发放模式７８％为时相型,２２％为持续型。外源性去甲肾上腺素（ｎ＝７）或谷氨酸钠（ｎ＝５）可引起伴有膜电阻减小的去极化反应,并可导致锋电位的串发放。     

大鼠下丘脑离体脑薄片视上核神经元的全细胞记录

在大鼠下丘脑薄片标本上对52例视上核神经元进行了全细胞膜片箝记录。膜被动及主动电生理参数测量如下：静息电位,59±8mV;输入阻抗,535±129MΩ;时间常数,32±9ms;动作电位幅度,99±11mV;超射值,37±13mV（n＝39）。大多数神经元在接受去极化刺激时出现明显的慢后超极化电位或电流。我们发现,在电压箱状态下几乎所有的视上核神经元均接受兴奋性和／或抑制性突触传λ（n=13）。药理学实验表明,兴奋性突触后电流是由non－NMDA亚型谷氨酸受体介导,而抑制性突触后电流由GABAA受体介导。     

内质网及其标志酶在离体培养脊髓神经元中的发育变化

本文采用形态学与细胞化学相结合的方法,在超微结构水平观察了与突触酶、受体和结构蛋白的合成有关的内质网和高尔基复合体、GERL以及它们的标志酶的发育变化。结果表明神经元本身有一发育过程,发育早期的细胞器较少,成熟时逐渐增多,以内质网和高尔基复合体最为明显。用G一6一Pase、TPPase和CMPase可分别标记内质网及同源结构、高尔基复合体的成熟而膜囊和GERL。这些酶的出现及阳性水平与神经元的发育呈同步关系。可作为判断细胞分化程度和功能状态的指标。G-6-Pase还分布在突触后树突的内质网中,突触形成大都从含G-6-Pase阳性内质网的树突开始。本文对内质网及G-6-Pase在神经元中的发育变化及功能进行了讨论。     

内质网及其标志酶在离体培养脊髓神经元中的发育变化

In an attempt to elucidate the relationship between synapse formation and cell development, the morphology and cytochemistry of the endoplasmic reticulum and its enzymic marker, glucose-6-phosphatase (G-6-Pase), in cultured mouse spinal neurons were investigated ultrastructurally. It was found that in the early period of the development, neurons were characterized by scarceness of organelles; only a few of granular or agranular endoplasmic reticulum and mitochondria were seen. The endoplasmic reticulum and nuclear envelope were packed specifically with G-6-Pase resection product but the product was weak. After a period of culture, most of the neurons had well-developed endoplasmic reticulum, Golgi apparatus, mitochondria and microtubules, etc. The Golgi apparatus was relatively large, having some cisternae associated with vesicles. Either concave of convex face of the saccules was labeled by thiamine pyrophosphatase (TPPase) specifically. GERL, labeled by cytidine monophosphatase (CMPase), was also seen close to the inner or outer face of some Golgi apparatus. The endoplasmic reticulum at this stage was distributed throughout the cytoplasm, including that in dendrites; its enzyme marker (G-6-Pase) localized consistently within the lumen of all endoplasmic reticulum, nuclear space and subsurface cisternae, and frequently in the concave saccules of the Golgi apparatus. After a long-term culture, some neurons became "aged". The endoplasmic reticulum cisternae enlarged and G-6-Pase reaction reduced. Along with the neuronal development, especially maturation of the endoplasmic reticulum and its enzymic marker, synapse formation was begun at the neuropile area. The axo-dendritic synapses always occurred between the axonal terminals and dendrites where the endoplasmic reticulum had showed positive G-6-Pase reactions. Considering the fact, it suggests that the appearance and change of these specific enzymes may be related to the maturation of the neurons in vitro, and also related to the synapse formation between neurons.     

新生大鼠离体脊髓薄片侧角中间外侧核细胞的电生理特性

在新生大鼠离体脊髓薄片的中间外侧核作细胞内记录,研究细胞膜的静态与动态电生理特性。细胞的静息电位(RP)变动于-46—-70mV,膜的输入阻抗为108.3±67.9MΩ(X±SD,下同),时间常数9.9±5.6ms,膜电容138.6±124.2pF。用去极化电流进行细胞内刺激时,大部份细胞(85.4％)能产生高频率连续发放,其余细胞(15.6％)仅产生初始单个发放。胞内直接刺激引起的动作电位(AP)幅度为63.4±9.0mV,时程2.4±0.6ms,阈电位水平在RP基础上去极18.7±6.2mV。大部份细胞的锋电位后存在明显的超极化后电位,其幅度为5.1±2.7mV、持续90±31.8ms。刺激背根可在记录细胞引起EPSP或顺向AP,少数细胞尚出现IPSP。而刺激腹根则可引起逆向AP。     

粉锈宁在菜心离体快速繁殖中的应用

应用植物生长延缓剂粉锈宁于菜心离你快速繁殖,试验结果表明,低浓度（1—5μmol／L）的粉锈宁可以明显提高菜心茎尖继代培养时芽的繁殖系数．同时发现低浓度粉锈宁可降低试管苗的玻璃化程度,促进叶片数增加,改善试管苗生长状况,有利于壮苗培育．适当提高粉锈宁浓度还具有促进试管苗生根的作用．粉锈宁可作为一种优良的植物生长调节剂用于菜心离体快速繁殖。     

气动全人工心脏在离体和在体研究中的机械故障

从1976年到1983年,已经制造出156个全人工心脏(T A H),其中86个是Jarvik-5型、70个是Jarvik-7型,它们都已分别植入小牛和山羊体内。在156例中有48例(30%)出现某种机械方面的故障,其中25例(16%)机械故障致使实验动物死亡或实验中断。在有些动物实验中出现故障不止一个。本文将详细地介绍这方面的情况。材料和方法 Jarvik-5型和7型全人工心脏是由Avcothane-5l Elastomer或者Biomer制造而成的,它们的基本设计和结构以前已有报导。所有的心室都是由用溶液浇铸成的连续血液接触面、多层隔膜(图1、表1)刚性瓣膜压紧环及底盘和低架侧倾式蝶瓣所组成。     

微透析技术在猴脑递质研究中的应用

应用透析原理对脑内细胞外液中神经化学物质进行取样分析的想法已有２０多年历史,对脑内细胞外液进行分析可以更好地了解中枢神经系统的生理和病理情况,而微透析技术就是一种用来测定脑内细胞外液神经递质浓度的取样方法,随着探头设计的微型化和高灵敏度的分析方法的建立,微透析技术在许多实验室已成为一种常规实验手段,近年来,以猴脑的研究对象的微透析实验呈增长趋势,并获得了一些崭新的结果,本文介绍在猴脑上进行微透技术     

离体子宫张力测定在药物生殖毒性研究中的应用

目的:建立药物生殖毒性研究中孕鼠离体子宫平滑肌张力的测定方法。方法:SD大鼠于妊娠第6~15天(GD6-15)给予受试物,在妊娠第20天(GD20)取子宫平滑肌,分别给予不同浓度缩宫素和硫酸镁溶液刺激,选择试验的最佳条件。在此基础上,测定不同剂量组孕鼠离体子宫平滑肌张力的变化情况,采用RM-6240BD多道生理信号采集处理系统分析数据,统计结果。结果:选择0.007 U/m L缩宫素、0.008 mol/m L硫酸镁为最佳刺激浓度。随着受试物剂量的增加,加入缩宫素后,各组妊娠子宫平滑肌的频率和张力均呈逐渐上升的趋势,而加入硫酸镁后,各剂量组妊娠子宫平滑肌的活动幅度、频率和张力均呈现降低的趋势,但各剂量组与溶媒对照组相比均未见明显差异(P0.05)。结论:本研究建立了孕鼠离体子宫平滑肌张力的测定方法,该方法可以更好的反映受试物对孕鼠子宫肌的毒性作用,更加全面的评价受试物的生殖毒性。     

离体受精作为技术平台在被子植物有性生殖研究中的应用

被子植物的离体受精10a前在玉米中已获得成功,尽管目前只在玉米获得完全成功和小麦获得部分成功,但离体受精技术的研究成果非常显著。目前离体受精技术已被用于其他的研究,如用分离的精细胞和卵细胞筛选配子细胞的特异基因和蛋白质：研究合子细胞被激活的机理：用不同种植物的精、卵细胞体外融合进行新的远缘杂交尝试;利用合子细胞易分裂和胚胎发生特征探索用其作为转基因研究的受体细胞等。以离体受精技术为基础在高等植物发育生物学和生殖生物学领域的基础研究和应用探索显示了巨大潜力。介绍了离体受精技术在被子植物有性生殖的研究成果和应用前景,为研究和利用被子植物有性生殖过程中的生殖细胞特征提供线索。     

蛋白质组学方法在细胞内信号转导研究中的应用

蛋白质组学的新技术为我们研究细胞内的信号转导过程提供了更广泛和崭新的思路,它克服了传统技术的局限性,实现了对蛋白的高通量分析。简要综述了蛋白质组学技术在信号转导过程中信号分子的确定、定量,磷酸化等翻译后修饰的识别,以及蛋白质之间相互作用研究等方面的应用。     

符号检验法及其在动物生态学研究中的应用

符号检验法是非参数统计法的一种重要方法,在动物生态学的实验数据统计分析领域有一定的实用价值,本文简要介绍这一方法的使用。     

地理信息系统及其在动物空间行为研究中的应用

空间属性是动物行为的重要特征,也是行为生态学研究中必须要面对的难题之一。地理信息系统(Geographic Information System,GIS)具有强大的空间分析功能,它在动物行为生态学研究中得到了越来越广泛的应用,如生境选择、领域分析、迁徙路线、活动节律等。本文较系统地阐述了GIS的原理以及在行为生态学研究中所涉及的基本概念和原理,对近年来利用GIS进行的行为生态学研究做了回顾和总结,并对其未来的发展进行了展望。     

RNA干扰及其在动物繁殖研究中的应用

RNA干扰(RNAi)是指小分子双链RNA通过特异性降解与其同源的mRNA,而在mRNA水平上高效阻断体内特异性基因表达的现象,属于转录后水平基因沉默。利用该技术进行基因功能研究,经济有效,通用性好,已成为反向遗传学研究中最重要的工具之一。在动物繁殖领域,RNAi技术主要应用于体外研究哺乳类和禽类卵母细胞发育、胚胎发育和精子形成中重要基因的功能及其作用机制。随着该技术不断发展完善,RNAi必将在动物繁殖生产实践中发挥巨大的作用。     

在体多通道电生理记录技术在大鼠痛情绪研究中的应用

目的:通过已建立的完全弗氏佐剂(CFA)诱导的条件位置逃避(CPA)行为模型,利用在体多通道电生理学记录技术,结合行为观察研究大鼠发生CPA反应时前扣带皮层(ACC)脑区神经元的电活动。方法:电极制作,电极埋置,在体多通道技术记录清醒大鼠r ACC脑区神经元的电活动及其CPA行为记录。结果:1自制的多通道阵列电极可成功记录到ACC神经元的放电活动;2大鼠脚掌注射CFA前后分别与不同环境匹配后,大鼠处于"痛环境"与"非痛环境"时ACC神经元spike的发放频率分别为痛环境(0.85±1.38)imp/s,非痛环境(0.22±0.97)imp/s(P0.05,n=26);3行为学分析痛环境适应前(303.55±61.77)s对比痛环境适应后(140.32±33.52)s(P0.05,n=6)。上述结果显示,脚掌注射CFA的大鼠处于痛环境时诱发ACC神经元spike放电频率增强与行为上的逃避反应同步发生;脚掌注射生理盐水的对照组并无上述反应趋势。结论:大鼠r ACC脑区神经元电活动与疼痛所致的痛厌恶相关情绪的发生有着密切的联系。     

转基因动物及其在医学研究中的应用

转基因动物(transgenic animal)是指基因组中稳定地整合有以实验方法导入的外源DNA的动物。被导入的外源基因称为转基因(transgene)。1974年美国学者Jeanisch等首次应用显微注射的方法将SV40 DNA注射到小鼠囊胚腔内,在子代小鼠的许多组织中含有该DNA,后来研究证明该DNA以非整合的附加体     

转基因动物及其在医学中的应用

转基因动物是通过将外源目的基因导入受精卵或早期胚胎细胞中,使其稳定地整合到受体的基因组中,并得到表达的动物。这一技术已用来在哺乳动物的乳汁中生产贵重的治疗用蛋白,生产供人类移植用的器官,制造人类跗疾病的动物模型。其前景十分广阔。     

DNA-based方法及其在研究动物食物组成中的应用

了解动物的食物组成是研究生态系统的多样性和生态系统功能的基本要求,在动物生态学的研究中至关重要。DNA-based方法包括样本采集、DNA提取、PCR扩增、序列比对分析等一系列步骤,实验的成败取决于标记基因的选择、引物的设计及每个步骤的优化。文章综述了DNA-based方法的各个基本步骤及其优化方法,并对该方法在今后用于国内相关研究的可能性进行展望,关注用于研究国内三峡大坝这个大型水域生态系统的可能性,期望推动国内该领域的研究。     

分子标记及其在海洋动物遗传研究中的应用

分子遗传标记在农业动植物育种和生产上得到了广泛的应用,且取得了可喜的成果,但在水生生物上的应用还处于初始阶段。本文简要介绍了限制性片段长度多态性（RFLP）、随机扩增多态性DNA（RAPD）、扩增片段长度多态性（AFLP）、小卫星DNA和微卫星DNA（或称简单序列重复,SSR）等分子标记的概念、基本原理及其特点,重点介绍了第三代分子标记单核苷酸多态性（SNP）技术。综述了这些分子标记在海洋动物遗传结构分析、亲缘关系鉴定、遗传图谱的构建和标记辅助育种等方面的应用。